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目的 构建人源抗破伤风毒素重链C端单链二硫键稳定抗体原核表达载体,并进行原核表达和生物学特性鉴定.方法 采用PCR定点突变的方法,获得二硫键稳定的抗破伤风毒素重链C端(TeNT-Hc)单链抗体基因(27G-scdsFv).连接pET22b(+)载体,转化大肠杆菌BL21 (DE3)工程菌,IPTG诱导表达,SDS-PAGE、Western blot法鉴定表达产物.ELISA检测27G-scdsFv体外抗原特异结合活性和抗体相对稳定性;非竞争酶免法检测抗体亲和力.采用免疫荧光法检测27G-scdsFv体外中和活性.结果 测序结果显示获得正确的27G-scdsFv基因.原核表达scdsFv以包涵体形式存在,表达量约占菌体总蛋白的50%.复性后的27G-scdsFv保持了与TeNT-Hc的特异结合活性,亲和力较其scFv形式略有提升,KD =0.93×10-7 mol/L,1L培养物可获得5 mg scdsFv蛋白.27G-scdsFv的稳定性较scFv形式明显增强.27G-scdsFv在体外可以明显抑制TeNT-Hc与神经元细胞的结合.结论 成功构建人源抗破伤风毒素重链C端单链二硫键稳定抗体原核表达载体,并获得有活性的目的蛋白,为27G-scdsFv的进一步生物学功能研究奠定基础. 相似文献
2.
辛基酚影响MCF-7细胞凋亡及bcl_2、caspase3表达 总被引:1,自引:0,他引:1
目的观察辛基酚(0P)对乳腺癌MCF-7乳腺癌细胞凋亡的影响。方法以流式细胞分析、DNA断端末端标记(TUNEL)试验、DNA片断率分析、流式细胞仪免疫荧光和荧光定量PCK等方法观察OP对MCF-7细胞凋亡、bcl2、bax、caspase3表达的影响。结果8、16μmol/LOP作用MCF-7细胞,TUNEL细胞阳性率和DNA片断百分率增加,48h时的凋亡率分别为(6.6±1.32),(16,3±3.48)『对照(43±1.18)];bcl2荧光量分别为(63.5±5.84),(30.3±2.49)[对照(57.2±4.07)]。4μmol/LOP明显上调MCF-7细胞中bcl2 mRNA表达;16μmol/L OP则明显降低细胞中bcl2 mRNA表达,且bax、caspase3 mRNA表达明显增加。结论8、16μmol/L OP能明显诱导MCF-7乳腺癌细胞的凋亡,增加DNA片断百分率,其机制可能是通过下调细胞中bcl2的表达、上调bax、caspase3的表达来实现。 相似文献
3.
目的:构建pPICZαA-HSA-sTRAIL真核表达质粒。方法:用PCR方法扩增sTRAIL基因,然后克隆入pPICZαA载体,构建pPICZαA-sTRAIL质粒,然后将HSA基因克隆入pPICZαA-sTRAIL质粒,构建pPICZαA-HSA-sTRAIL真核表达质粒。重组子均进行酶切鉴定和PCR鉴定,最后进行DNA测序验证。结果:PCR方法克隆出目的基因,并成功构建了pPICZαA-HSA-sTRAIL质粒。酶切鉴定、PCR鉴定和DNA测序均证明构建的表达质粒完全与预期一致。结论:成功构建了pPICZαA-HSA-sTRAIL真核表达质粒。 相似文献
4.
组合乙肝标志物联合ALT对判断肝损害和HBV-DNA复制状态789例调查分析 总被引:2,自引:0,他引:2
目的调查789例乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)阳性人群的肝损伤及外周血中乙型肝炎病毒复制情况。方法用统计学方法分析HBsAg阳性者789例,同时进行的乙肝标志物五项、ALT和HBV-DNA检验结果分布。结果HBsAg阳性者中ALT异常率为27.8%,而HBV-DNA复制率为49.3%。乙肝标志物组合间的ALT异常率和HBV-DNA复制率存在差异。HBeAg阳性且ALT异常时,HBV-DNA复制率达到93.1%。结论组合乙肝标志物配合ALT可较好地了解肝损伤和HBV-DNA复制情况,有助于判断病情。 相似文献
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目的调查417例乙型肝炎病毒复制阳性患者的肝损伤、乙肝标志物(HBV Markers,HBVM)和外周血HBV DNA水平及抗病毒治疗适应证符合情况。方法对乙型肝炎病毒复制阳性的417例患者的ALT、乙肝标志物(5项)和HBV DNA进行定量分析。结果HBVDNA阳性者中,性别间ALT各组例数比例不同,但在ALT≥2ULN组,性别间ALT例数相同,而HBV DNA拷贝数差异有统计学意义。ALT各组的HBeAg阴、阳性分布无差异,ALT各组HBV DNA拷贝数随ALT升高而升高。乙肝标志物组的13、145、15组的抗病毒治疗适应证符合率是一致的,135组高于其他三组,且13、135组HBVDNA拷贝数无差异,高于其他两组。结论监测ALT、乙肝标志物和HBVDNA,有助于了解本地区HBV感染情况,节约医疗资源,及时治疗,延缓病程。 相似文献
6.
β-连环蛋白在人毛囊发育形成中的表达 总被引:5,自引:1,他引:4
目的:研究β-连环蛋白(β—catenin)在人毛囊从胚胎到成熟发育过程中的表达及意义。方法:采用SP免疫组化技术(IHC)对不同胚胎龄及成年期的正常人头皮标本进行染色,分析比较不同时期毛囊β-catenin表达及其差异。结果:β—catenin蛋白的表达与毛囊发育的不同阶段具有相关性,早期形成的毛芽中未见β-catenin表达,而胚胎毛囊发育后期的外根鞘及膨突区中出现β-catenin表达,在成人发育成熟的毛囊中,β—catenin表达明显增强,阳性细胞集中于毛囊外根鞘内侧。结论:β—catenin在毛囊不同发育阶段表达与分布的差异,提示β-catenin可能在毛囊从发生到成熟过程中发挥重要作用。 相似文献
7.
目的观察辛基酚对MCF-7乳腺癌细胞周期及周期蛋白表达的影响。方法以MTT试验、流式细胞分析、免疫细胞化学和RT-PCR等方法观察辛基酚对MCF-7乳腺癌细胞增殖、细胞周期相和细胞凋亡、CDK2和CDK4 mRNA表达、Cyclin D1 mRNA及蛋白表达的影响。结果4、8、16μmol/LOP作用MCF-7乳腺癌细胞72h时,细胞增殖率分别为107.31%、168.06%、62.00%,G0/G1期细胞分别为(52.46±6.67)%、(50.19±7.39)%、(67.31±5.47)%,对照组(55.27±7.53)%,细胞凋亡率分别为(4.84±1.12)%、(6.48±1.36)%、(19.26±3.57)%,对照组(5.56±1.125)%,16μmol/LOP减少了细胞中CDK2、CDK4、Cyclin D1 mRNA及Cyclin D1的表达。结论4、8μmol/LOP促进MCF-7乳腺癌细胞增殖,16μmol/LOP则抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,这可能与OP影响细胞中CDK2、CDK4、Cyc-lin D1 mRNA及Cyclin D1表达有关。 相似文献
9.
目的调查789例乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)阳性人群的肝损伤及外周血中乙型肝炎病毒复制情况。方法用统计学方法分析HBsAg阳性者789例,同时进行的乙肝标志物五项、ALT和HBV-DNA检验结果分布。结果HBsAg阳性者中ALT异常率为27.8%,而HBV-DNA复制率为49.3%。乙肝标志物组合间的ALT异常率剐HBV-DNA复制率存在差异。HBeAg阳性且ALT异常时。HBV-DNA复制率达到93.1%。结论组合乙肝标志物配合ALT可较好地了解肝损伤和HBV-DNA复制情况,有助于判断病情。 相似文献
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目的 观察自拟腹水1号方对脾肾阳虚兼水瘀互结型乙肝肝硬化腹水患者尿钠的影响及疗效,并对其机制进行探究。方法 选取80例脾肾阳虚兼水瘀互结型乙肝肝硬化腹水患者,随机分为观察组及对照组各40例,均予常规西药治疗,观察组加用自拟腹水1号方,记录治疗前、治疗7 d和治疗14 d患者尿钠及血电解质变化;治疗前、治疗14 d后记录患者中医证候积分、肝肾功能以及彩超腹水深度、尿量、体重,评价自拟腹水1号方对尿钠的影响及疗效。结果 ①治疗14 d后,对照组血钠较治疗前降低(P<0.05);治疗14 d后,两组血钾及24 h尿钠水平较治疗前明显增加(P<0.05),观察组明显优于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。②治疗14 d观察组中医证候积分的改善程度优于对照组;观察组ALT、AST、TBIL、ALB、BUN、CRE指标的改善程度优于对照组(P<0.05);治疗后两组24 h尿量均明显增加,体重、彩超腹水深度下降,且观察组的改善程度优于对照组(P<0.05)。结论 在西医常规治疗的基础上,加用腹水1号方能增加乙肝肝硬化腹水脾肾阳虚兼水瘀互结证患者尿钠的排出,从而减轻患者水钠潴留,改善患者的症状。 相似文献