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目的探讨微小RNA-199a-3p(miR-199a-3p)对心肌纤维化的调控作用及其作用靶基因。方法原代分离并体外培养成体
C57BL/6小鼠心肌成纤维细胞;脂质体转染法将miR-199a-3p模拟物和Smad1 siRNA瞬时转染至小鼠心肌成纤维细胞;双荧光
素酶报告基因实验检测miR-199a-3p与潜在靶基因Smad1 3’端非翻译区(3’-UTR)的结合作用;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和
Western blot 法分别检测小鼠心肌成纤维细胞转染miR-199a-3p 后,Smad1 及纤维化相关基因表达。Western blot 检测转染
miR-199a-3p,Smad1 siRNA 后,小鼠心肌成纤维细胞中纤维化相关基因、Smad1 和Smad3 的激活水平。结果RT-qPCR 和
Western blot结果证实在心肌成纤维细胞中过表达miR-199a-3p可以增强纤维化相关基因表达。双荧光素酶报告基因实验显示
miR-199a-3p 与Smad1 3’-UTR有结合作用。RT-qPCR和Western blot 结果证实miR-199a-3p 可在转录水平抑制Smad1 表达。
过表达miR-199a-3p和沉默Smad1均能一致性的通过激活Smad3通路而促进心肌成纤维细胞中纤维化相关基因表达。结论
miR-199a-3p通过靶向Smad1,从而激活Smad3通路来促进纤维化相关基因表达。 相似文献
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目的 研究环形RNA circRNA_005647对小鼠心肌成纤维细胞(CFs)纤维化表型的影响及分子机制。方法 利用血管紧张素Ⅱ 缓释泵[1.46 mg/ (kg·d),2周]诱导建立小鼠高血压心肌纤维化模型,采用Masson染色观察心肌纤维化程度。实时荧光定量PCR检测发生纤维化的小鼠心肌及血管紧张素Ⅱ诱导的小鼠CFs中circRNA_005647的表达。利用放线菌素D和RNase R实验检测circRNA_005647的稳定性。利用重组circRNA_005647 腺病毒(rAd-circRNA_005647)感染小鼠CFs,检测CFs中纤维化相关基因Col1a1、Col3a1、Acta2 的mRNA和蛋白表达变化。双荧光素酶报告基因实验、RNA反义纯化实验及RNA Pulldown实验验证circRNA_005647与微小RNA miR-27b-3p的结合作用。结果 RT-qPCR结果显示,circRNA_005647在高血压诱导纤维化的小鼠心肌和Ang-II处理的小鼠CFs中表达增强(P<0.01)。放线菌素D和RNase R实验证实circRNA_005647比其宿主基因 Myo9a mRNA具有更好的稳定性(P<0.01)和抵抗 RNase R的降解作用。过表达 circRNA_005647可显著抑制小鼠CFs中纤维化相关基因 Col1a1、Col3a1和 Acta2表达(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验、RNA反义纯化实验及 RNA Pull down实验一致性地证实了circRNA_005647与miR-27b-3p之间存在特异结合作用,miR-27b-3p具有促进小鼠CFs的纤维化表型作用(P<0.05),并可减弱circRNA_005647对小鼠CFs中纤维化相关基因表达的抑制作用。结论 CircRNA_005647在心肌纤维化中表达增强,并通过结合miR-27b-3p发挥抑制心肌纤维化作用。 相似文献
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