模型动物在动物流感病毒传播机制研究中的应用

动物流感(influenza)不仅会对畜禽养殖业造成巨大的经济损失,而且可以跨越种间障碍进入人群,引发全球性的公共卫生危机和灾难性后果.模型动物是研究流感传播机制的重要基础.模型动物的使用有助于我们对流感病毒传播机制的深入了解.本文从流感病毒的宿主范围、常用模型动物的宿主限制因素和模型动物在流感病毒跨种传播机制中的选择与应用等三个方面进行了综述.     

弓形虫钙离子结合蛋白的研究进展

刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)作为顶复门中一种寄生原虫,可以感染有核细胞。研究表明,钙离子与弓形虫侵染、运动等生理活动相关。内质网中含有大量的钙离子,许多钙离子结合蛋白质在弓形虫的生理活动中起重要作用。钙离子结合蛋白质包含多种EF手型(EF-hand)结构域。目前记载在TOXO DB中含有EF-hand的蛋白质有55种;在Plasmo DB含有EF-hand的蛋白质有69种。本文对钙离子结合蛋白质的各种作用进行阐述。     

CMAH基因在小鼠不同组织中的转录水平分析

目的哺乳动物细胞中所含唾液酸及其衍生物主要包括N-乙酰神经氨酸(N-acetylneuraminic acid,Neu5Ac)、N-羟乙酰神经氨酸(N-glycolylneuraminic acid,Neu5Gc)和脱氨神经氨酸(deaminoneuraminic acid,KDN),其中Neu5Ac可在胞苷单磷酸-N-乙酰神经氨酸羟化酶(cytidine monophospho-N-acetylneuraminic acid hydroxylase,CMAH)的催化下合成Neu5Gc。本研究应用相对荧光定量PCR方法检测BALB/c小鼠不同组织中CMAH基因的转录水平,为进一步分析不同组织中所含Neu5Gc含量差异提供参考依据。方法在NCBI数据库中查找CMAH基因mRNA序列并设计特异引物,选择小鼠β-actin为内参基因,应用相对荧光定量PCR方法检测正常BALB/c小鼠9种组织中CMAH基因mRNA的转录情况。结果在9种不同的小鼠组织中,肝脏组织中CMAH基因mRNA转录水平最高,其分别为脾脏的2.46倍、肾脏的3.17倍、气管的5.14倍、肺脏的11.70倍、心肌的21.12倍、骨骼肌的31.37倍、小肠的66.90倍以及脑组织的1055.99倍。结论本研究确定BALB/c小鼠CMAH基因在多种组织中均有转录且差异较大。     

H6亚型流感病毒在小鼠肺内的适应性传代研究

目的为了进一步探讨H6亚型禽流感病毒(AIV)对哺乳动物的感染与致病能力,建立H6亚型AIV哺乳动物感染模型。方法用H6N1亚型AIV感染BALB/c小鼠,并在小鼠肺组织中连续传代,测定病毒的EID50。观察感染鼠临床症状和体征,评价病毒的致病性。结果经8～9代的适应后,该病毒即对小鼠产生明显的致病性,小鼠表现出精神萎靡、食欲减退、竖毛、弓背等临床症状。测定鼠肺适应株病毒H6N1-P8-M1、H6N1-P9-M2、H6N1-P8-M3的EID50分别为108.5、106.75和108.25/ml,三毒株感染鼠在发作期全部死亡。H6N1-P0组小鼠感染后14d仍全部存活。结论 H6N1亚型AIV与其他亚型相似,同样具有经适应后对哺乳动物呈现高致病性的能力,提示应关注H6亚型AIV对人类的潜在风险,得到的毒力增强鼠肺适应株为H6N1流感病毒疫苗和药物研究以及致病分子机制研究提供了动物模型。     

瓜蒌薤白半夏汤干预大鼠心肌缺血的有效部位初步研究

目的 比较瓜蒌薤白半夏汤（GXBD）不同提取部位对心肌缺血大鼠的保护作用，初步探寻该经典方剂干预"胸痹"的物质基础。方法 瓜蒌、薤白、法半夏的比例为5：2：2，95%乙醇加热回流提取3次，依次用石油醚、氯仿、醋酸乙酯、正丁醇及水进行萃取，得GXB1~GXB5部位；药渣水煎后得GXB6部位。Wistar大鼠结扎冠状动脉左前降支，制备急性心肌缺血（AMI）模型。采用多导生理记录仪监测大鼠心电图，并统计ST段抬高阳性率。心肌切片氧化三苯四氮唑（TTC）法染色后，采用图像分析处理系统测算心肌梗死率。生化试剂盒检测血清肌酸激酶（CK）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）的活性。采用AMI动物模型及心肌缺血诊断指标评价GXBD的6个部位干预AMI的药效，首先进行各部位各剂量的纵向比较，确定每个部位的最佳作用剂量；然后进行6个部位之间的横向比较，筛选出有效部位。最后，对有效部位的化学成分进行理化鉴定。结果 对于AMI模型大鼠，GXB4~GXB6均能够显著降低AMI大鼠的心电图ST段抬高阳性率、心肌梗死率及血清CK、CK-MB活性，其中GXB4作用最显著；而GXB1~GXB3虽然也显示出一定的缺血保护作用，但结果无显著性差异。GXB4~GXB6部位共有的化学成分为糖类、香豆素、苷类，GXB4特有的成分为甾体及萜类。结论 GXB4~GXB6部位对AMI有显著干预效果，GXB4效果最为显著；发挥AMI保护作用的物质可能是糖类、香豆素、苷类、甾体及萜类。     

H9亚型禽流感病毒HA基因的克隆与序列分析

目的扩增、克隆H9N2 HA基因,并进行序列分析,为H9N2流感病毒种间及跨种传播机制研究奠定基础。方法设计特异性引物,扩增克隆H9N2亚型禽流感病毒,测序后进行序列分析。结果成功克隆出4株H9N2亚型禽流感病毒,全长均为1.7 kb,ORF为1 683 bp,编码560个氨基酸;联机检索,与参考毒株比对核苷酸和氨基酸同源性均在90%以上。结论成功克隆4株H9N2亚型禽流感病毒,序列分析显示其核苷酸和推导氨基酸与参考毒株高度同源。     

裂谷热病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立

目的根据裂谷热病毒(Rift Valley Fever Virus,RVFV)M片段的保守序列设计并合成特异性引物和TaqMan探针,建立鉴定裂谷热病毒的TaqMan实时荧光定量PCR检测方法。方法合成裂谷热病毒M片段基因,PCR扩增后将其连入pMD18-T载体,构建重组质粒作为阳性标准品,以10倍系列稀释的标准品进行荧光定量PCR扩增,并绘制标准曲线。结果所绘制标准曲线的相关系数为0.999,该检测方法的灵敏度达40copies/μL,特异性好,对除裂谷热病毒外其他病毒(PPRV、HFV、RV、SPPV和GIPV)检测均为阴性。该方法重复性好,批内重复和批间重复的变异系数均小于1%。结论裂谷热病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立为裂谷热病毒的快速准确诊断及流行病学调查提供了有效的手段。     

改善胰岛素抵抗的中药活性成分及作用机制研究进展

近五年来,共发现能改善胰岛素抵抗的中药活性成分35种。全面概述了这35种成分的来源、理化性质、分子结构。它们通过调控不同信号通路发挥改善胰岛素抵抗作用,机制主要包括抑制氧化应激、抵抗炎症反应、调控葡萄糖转运通路、促进脂肪酸分解。参考文献50篇。     

豚鼠TNF、IFN-γ、IL-1荧光定量PCR检测方法的建立

目的建立测定豚鼠肺脏中TNF、IFN-γ、IL-1的荧光定量PCR方法。方法根据已有序列设计TNF、IFN-γ、IL-1基因检测引物,建立荧光定量PCR检测方法。结果用建立的荧光定量PCR检测豚鼠TNF、IFN-γ、IL-1基因的溶解曲线峰值单一,扩增水平稳定。结论成功建立了检测豚鼠TNF、IFN-γ、IL-1基因的荧光定量PCR方法,为豚鼠先天免疫方面研究提供技术支持。     

中药保护内皮祖细胞的有效成分及作用机制

近5年来中药界学人发现22种中药成分可有效保护内皮祖细胞（EPCs）。分别通过调节氧化应激反应、抑制EPCs凋亡、阻遏炎症因子的分泌、增强EPC动员、迁移、分化等生物学功能发挥对EPCs的保护作用。对此做系统论述及整理,并总结目前研究中存在的问题及以后的研究方向。