成人自体心肌干细胞体外高效扩增及特异性鉴定

[目的]建立一种稳定、高效的成人自体心肌干细胞体外培养扩增及特异性鉴定方法。[方法]手术中取下的心脏组织标本,通过胶原酶消化的方法获得细胞,使用自体血清进行贴壁培养和传代的方法纯化细胞,细胞增殖至3代后进行RT-PCR基因表达检测,流式细胞表面标记检测及染色体核型分析的鉴定。[结果]通过本实验的方法可以在成人心肌组织中分离和纯化心肌干细胞,并在体外可大量增殖,至3代细胞可增殖至5×107。RT-PCR鉴定其具有全能干细胞因子Nanog、Oct-4、Sox-2、Rex-1的mRNA表达,及心肌转录因子Nkx2.5和GATA4的mRNA和蛋白表达;表达间质干细胞表面标记CD29、CD90、CD105;不表达造血干细胞表面标记CD45和人免疫抗原HLA-DR;且培养后46条染色体无移位和缺失等染色体突变。[结论]通过本研究确立了一种稳定、高效的成人自体心肌干细胞体外培养,扩增和特异性鉴定的方法,为自体心肌干细胞移植技术的临床应用奠定重要的基础。