免疫-PCR法检测儿童尿中生长激素水平

目的 :建立超灵敏度的免疫 PCR法检测尿中生长激素的水平。方法 :在经戊二醛处理的PCR管中完成双抗夹心酶免疫反应 ,通过PCR扩增连接在抗原 抗体复合物上的DNA分子 ,琼脂糖电泳及扫描判断结果。结果 :处理后的PCR管完全能够进行免疫反应 ,其灵敏度可达 0 1pg ml左右。琼脂糖电泳及扫描结果表明 ,30例正常青春发育期前儿童与 1 0例经常规生长激素激发试验诊断为生长激素缺乏 (growthhormone deficient,GHD)的儿童 ,1 2h夜尿生长激素 (GH)水平有明显差异。结论 :此法的敏感度比酶标法高 1 0 3 ～ 1 0 4倍 ,适于儿童尿中微量GH水平的检测     

hCu,Zn-SOD-TAT PTD融合基因的构建和表达

目的构建人hCu,Zn-SOD-TAT PTD表达载体及其原核表达与表达产物的纯化.方法从人肺cDNA文库中PCR扩增hCu,Zn-SOD基因,插入pUC19测序;以测序质粒为模板,再用含TAT PTD编码序列的3′引物PCR扩增得hCu,Zn-SOD-TAT PTD融合基因,并插入pUC19.将SOD-TAT PTD融合基因克隆至温控表达载体pJW 2,转化大肠杆菌DH 5α.温度诱导表达,表达产物用离子交换层析法初步纯化. 结果经限制性内切酶酶切图谱分析和DNA序列测定表明所构建质粒与设计相同,hCu,Zn-SOD-TAT PTD融合蛋白在转化大肠杆菌获得了高效表达并纯化.结论成功地获得了hCu,Zn-SOD-TAT PTD融合基因的表达产物,为进一步研究及临床应用奠定了基础.     

注射用母牛分枝杆菌预防性治疗潜伏性结核感染的细胞免疫机制

目的评价母牛分枝杆菌（微卡）在预防性治疗潜伏性结核感染中的细胞免疫学作用机理。方法对入学的大学新生进行PPD筛检和X线透视检查，确定潜伏结核感染人群，随机分为对照组、化学药物治疗组和微卡治疗组，每组中各随机选择30例，于用药前、用药后1个月、用药后6个月分别采集血样，采用流式细胞术检测符项细胞免疫学指标，动态观察三组免疫前后细胞免疫学指标的变化情况。结果治疗1个月后，微卡组外周血中CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋、NK、NKT和γδT各细胞亚群的比例较之对照组普遍升高，各组IL4^＋、IFNγ^＋表达也显著升高；治疗6个月后，微卡组CD4^＋T细胞比例显著高于同期的对照组和化疗组；CD8^＋、γδT各细胞亚群的比例与用药后一个月相比呈下降趋势，其中CD8^＋T细胞与同期对照组比较下降显著；微卡组IL4^＋表达与同期化疗组、对照组比较显著性降低，同时IFNγ^＋表达较用药前水平显著升高。结论微卡能显著提高潜伏结核感染者固有和获得性细胞免疫水平，尤其是增高并维持CD4^＋细胞的比例，降低CD8^＋细胞的比例，并能够调节Th1／Th2平衡，提示微卡对潜伏性结核感染有预防性免疫治疗作用，避免潜伏结核感染者的发病。     

hCu,Zn-SOD-TAT PTD的融合表达及其跨膜转运性质的初步研究

HIV I反式激活蛋白TAT中的一段富含碱性氨基酸的短序列具有独特的跨膜转运能力 ,被称为TAT蛋白转导结构域 (proteintransductiondomain ,PTD)。从人肺cDNA文库中PCR扩增hCu ,Zn SOD基因 ,插入pUC19测序 ;以测序质粒为模板 ,再用含TATPTD编码序列的 3’引物PCR扩增得hCu ,Zn SOD TATPTD融合基因 ,并插入 pUC19。将SOD基因和SOD TATPTD融合基因分别亚克隆至温控表达载体 pJW 2 ,转化大肠杆菌DH5α。SDS PAGE和Westernblot结果表明 ,热击诱导 4h后 ,分别在 19ku和 2 2ku处出现SOD和SOD TATPTD目标表达条带 ,表达蛋白以包含体形式存在。分别提取SOD和SOD TATPTD包含体 ,复性纯化后SOD和SOD PTD重组蛋白均具有特异的SOD酶活性 ,其比活性分别为 12× 10 3 NU/mg和 9.9× 10 3 NU/mg。细胞试验结果表明 ,与SOD相比较 ,SOD TATPTD融合蛋白能显著提高细胞内SOD酶活力。     

Cyanovirin-N:一种新型灭活HIV-1蛋白的研究进展

Cyanovirin- N是新发现的一种能够有效抑制 HIV感染的天然蛋白 ,由蓝细菌 N ostoc ellipsosp orum合成分泌。本文综述了 Cyanovirin- N的发现、结构特点、抑制HIV的分子机理以及应用前景。