HSV1-tk报告基因真核表达载体的构建及其在人肺腺癌AGZY细胞中的表达

目的：构建含有HSV1-tk（ Herpes simplex virus type 1 thymidine kinase, HSV1-tk）基因的真核表达载体,并检测其在人肺腺癌AGZY细胞系中的表达。方法应用PCR反应从质粒pHSV106质粒中扩增HSV1-tk基因后与pMD18-T载体连接,构建重组质粒pHSV1-tk/18T。将测序正确的重组质粒插入plRES2-EGFP 载体内,通过LipofectamineTM 2000将表达载体转染人肺腺癌AGZY细胞。结果酶切鉴定结果表明扩增的HSV1-tk基因序列正确;用荧光显微镜观察HSV1-tk基因的转入和表达;RT-PCR和Western blot结果显示在AGZY细胞中HSV1-tk基因在转录水平和蛋白水平均可以正确表达。MTT结果显示转染后AGZY细胞与未转染细胞在细胞增殖能力方面无明显差别。结论成功构建HSV1-tk报告基因的真核表达载体,在人肺腺癌AGZY细胞中能有效表达。     

卵巢癌荷瘤裸鼠鼠双微体扩增基因siRNA分子探针显像研究

目的:探究放射性核素99Tcm标记siRNA制备的鼠双微体扩增基因（murine double minute 2,MDM2）分子探针特性及卵巢癌荷瘤裸鼠显像效果。方法:将针对目的基因MDM2设计的siRNA1及对照组NC siRNA与99Tcm通过HYNIC链接,合成分子探针99Tcm-siRNA1、99Tcm-NC siRNA,检测探针的标记率、放射性化学纯度、稳定性、生物活性、细胞摄取率。应用TurboFect体内转染试剂包裹99Tcm-siRNA1、99Tcm-NC siRNA探针,进行高表达MDM2的荷瘤裸鼠显像,测量不同时间点肿瘤/对侧肌肉组织（T/M）的放射性计数比值,并分析探针在小鼠体内分布的情况。结果:99Tcm-siRNA1、99Tcm-NC siRNA标记率分别为（62.17±3.16）%、（61.56±4.08）%,P＞0.05（n=3）,99Tcm-siRNA1的放化纯度为(94.5±3.8)%,经体外孵育2 h、4 h、6 h后分子探针并未发生明显解离,放化纯度均达到90%以上,稳定性好。经99Tcm-siRNA1探针干扰后MDM2基因mRNA相对表达量为0.34±0.06（n=3）,蛋白相对表达量为0.46±0.09（n=3）。体外摄取试验中,SKOV3细胞在不同时间段对探针的摄取率持续上升,在体内显像中,99Tcm-siRNA1探针组1 h、4 h、10 h各时间点的T/M比值分别为3.079±0.568、2.927±0.140、3.465±0.432（n=4）,99Tcm-NC siRNA组1 h、4 h、10 h各时间点的T/M比值分别为:1.472±0.272、1.272±0.165、1.804±0.165（n=4）,99Tcm-siRNA1不同时间点在肿瘤组织中分布均较高。结论:99Tcm-siRNA1探针的标记方法、递呈方式可行,能够在肿瘤内特异性聚集,可为卵巢癌的诊断提供一种实时无创显像的方式。     

IL-12 IL-18对乙型肝炎患者Th_1/Th_2亚群的影响

目的探讨IL-12I、L-18对乙型肝炎患者Th1/Th2亚群的影响。方法常规分离人外周血单个核细胞(PBMC),在培养基中分别加入IL-12、IL-18和植物血凝素(PHA)培养72 h。用ELISA方法检测上清中IFN-γ、IL-4的含量。结果IL-12联合PHA或IL-18联合HA诱导下,乙型肝炎患者的IFN-γ水平明显高于对照组;IL-12联合PHA诱导下,乙型肝炎患者IL-4水平降低;IL-18联合PHA诱导下轻度患者明显降低;IL-12、IL-18联合PHA诱导下,乙肝患者的IFN-γ水平明显高于对照组,IL-4水平有降低趋势。结论IL-12、IL-18能够诱导乙型肝炎患者PBMC中Th2细胞向Th1细胞转化;而且IL-12的体外作用要强于IL-18。