李氏杆菌的流行病学及其致病机理（1）

单核细胞增多性李氏杆菌(Listeriamonocytogenes,以下简称L·M)是一种危害严重的人畜共患病病原微生物。自1926年Murray等提出其对人畜致病性以来,各国大多侧重于该菌在动物临床疫病及防治的研究。近几年来,世界各地,特别是欧美国家均发现经食品感染L·M患者,并呈增长趋势,使人们逐渐认识到该菌在食源性致病菌中的重要地位,被     

大肠杆菌O157胶乳检测试剂的研制

制备大肠杆菌O157抗原,皮下和静脉注射免疫家兔,6周后,采血、分离抗血清,饱和硫酸铵盐析2次提取IgG。合成了聚苯乙烯胶乳,将大肠杆菌O157抗血清共价交联到聚苯乙烯胶乳载体微球的表面,制成免疫微球。用玻片凝集试验,检测大肠杆菌的O抗原,建立了快速、敏感和特异的鉴定大肠杆菌O157血清型的方法。     

邻苯二甲酸单苄酯单克隆抗体的制备

目的制备抗邻苯二甲酸单苄酯(mono-benzyl phthalate,MBzP)的单克隆抗体。方法本实验利用活泼酯法,将邻苯二甲酸单苄酯分别与载体蛋白BSA和OVA偶联,获得完全抗原MBzP-BSA和MBzP-OVA,用MBzP-BSA免疫Balb/c小鼠,制备杂交瘤细胞,利用ELISA方法检测阳性杂交瘤细胞株分泌抗体的效价。结果获得了稳定分泌抗MBzP的细胞株1B9,以该细胞株体内诱生腹水制备腹水型单克隆抗体,纯化后效价为1∶128 000。结论成功制备了抗邻苯二甲酸单苄酯的单克隆抗体。     

大田软海绵酸液相色谱串联质谱检测方法的研究

目的:利用高效液相色谱-串联质谱法建立海产品中大田软海绵酸(Okadaic acid,OA)的检测方法。方法:贝样品提取液经AccuBondⅡSPE silica固相萃取小柱预分离和富集,用三级四极杆串联质谱(MS/MS)作为HPLC的检测器,使用正离子电喷雾(ESI)电离方式,多反应监测(MRM)扫描模式,选择母→子离子对m/z827→m/z723,m/z827→m/z809作为定量检测的离子对,HPLC的流动相为乙腈:1%甲酸-水(体积比70:30),色谱柱为Agilent Extend-C18(2.1×150 mm,Φ5.0μm),对OA标准品及加标样品和实际样品进行HPLC-MS/MS检测。结果:方法线性回归方程为Y=193.07X-780.6(Q1/Q3:m/z827.4→723.5);Y=83.021X-335.6(Q1/Q3:m/z827.4→809.5),相关系数r2均为0.9991;线性范围为10~800μg/L。样品平均回收率为83.99%,平均RSD为4.34%。结论:建立的HPLC-MS/MS方法灵敏、快速、准确,可用于海产品中贝类样品OA限量标准检测。     

大腹园蛛Avg 1的原核表达及生物学活性

[目的]研究大腹园蛛组织蛋白酶B相关基因Avg 1(基因登录号:AY302573)编码蛋白的生物学特性.[方法]设计合成引物(AvgS,AvgX),扩增Avg 1,去除信号肽部分基因Avg,将其与原核表达载体pET-28a(+),pET-20b连接,转化到E.coliBL21(DE3)中.[结果]鉴定为阳性克隆后,用IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳显示Avg-28a-DE3在近35.7ku处出现明显的表达带,其大小与预计分子质量(35.2ku)相当;经薄层扫描分析显示,表达蛋白量占菌体蛋白总量的39.6%,且表达形式主要为包涵体,而Avg-20b-DE3表达产物未见表达带,但RT-PCR方法检测到了Avg mRNA的转录;将表达的包涵体蛋白进行变性及复性处理,与诱导的Avg-20b-DE3表达菌经超声波碎菌处理上清液一同进行蛋白酶活性测定,呈复性的包涵体蛋白不具有酶活性,而Avg-20b-DE3的碎菌上清液显示明显的蛋白酶活性.表达的包涵体蛋白经电洗脱纯化后,常规方法免疫吉绒獭兔,抗血清经ELISA法检测,呈明显阳性反应,经Western blot检测在35.7ku处出现特异结合带.[结论]Avg 1原核表达蛋白具有良好的免疫原性.     

肉品中猪丹毒杆菌的快速检验

利用含猪丹毒免疫血清、吖啶橙、卡那霉素、叠氮钠及蚕蛹浸出液等混合配制的增菌培养基,进行猪丹毒杆菌的增菌培养,结合荧光菌团检查,在含菌量为5×10~2～5×10~3cfu/g时。经37℃培养12h,即可呈现阳性结果。     

食源性致病菌六联融合毒素的构建及免疫学特性研究

[目的]构建4种食源性致病菌融合毒素基因及重组表达载体,制备六联融合毒素的血清抗体. [方法]采用柔性Linker序列(G-G-G-G-S)对目的基因进行串联(HblA-VT1B-SEA-VT2B-BoNTaHc-SEB),构建重组表达质粒pET-22b(+)-F6并在E.coli BL21中进行表达,将表达蛋白纯化后免疫豚鼠制备血清抗体,利用ELISA和琼脂扩散试验验证抗体的特异性与敏感性. [结果]成功构建了重组表达质粒pET-22b(+)-F6并在E.coli BL21中成功表达,37℃表达蛋白主要以包涵体形式存在(表达量10.2%),基因序列全长3 384bp,编码1 127个氨基酸,蛋白分子量为127 205,测序结果与设计序列一致性为100%.ELISA和琼脂扩散试验表明,融合毒素F6与4种食源性致病菌有良好的反应原性,与多种非目标菌不反应. [结论]成功构建了多联融合毒素基因的表达质粒及制备了抗血清,为利用融合毒素的方法检测食源性致病菌,进而建立食源性致病菌广谱、快速的检测方法奠定基础.     

食品中单核细胞增多性李氏杆菌的研究现状

在食品安全性方面,单核细胞增多性李氏杆菌是每个人都关心的食源性病原菌,已出版了两本专著和发表许多综述。这里主要讨论三个方面的最新研究现状,即方法学、控制和法规方面的研究现状。在方法学上由于篇幅所限,只能作以简要探讨。