磷酸胆碱聚合物载AT1受体反义寡核苷酸对自发性高血压大鼠血压及心血管重构的影响

目的 探讨磷酸胆碱聚合物MPC30-DEA70载AT1受体反义寡核苷酸(AS-ODN)对自发性高血压大鼠(SHR)血压及心血管重构的影响.方法 将MPC30-DEA70(N)与FAM-AS-ODN(P)按不同N/P比值络合后经尾静脉注入SD大鼠体内,未经处理的SD大鼠为对照,3周后观察复合物在全身各组织器官的分布.再将MPC30-DEA70与AT1受体AS-ODN按不同N/P比值络合后经尾静脉注入8周龄SHR大鼠体内,未经处理的SHR大鼠为对照,3周后测量尾动脉压,对主动脉及心肌组织行天狼星红染色,并用Western blot法和RT-PCR法检测AT1受体蛋白及mRNA表达情况.结果 MPC30-DEA70/FAM-AS-ODN复合物能够进入肾脏组织;空白对照组和N/P=1∶0组的尾动脉压持续上升,缬沙坦组、N/P=10∶1组和N/P=1∶1组的尾动脉压较空白对照组明显下降;空白对照组和N/P=1∶0组心肌细胞肥大,主动脉壁增厚,胶原纤维大量沉积,而缬沙坦组、N/P=10∶1组和N/P=1∶1组上述情况较空白对照组明显改善;N/P=10∶1组和N/P=1∶1组AT1a蛋白和mRNA表达较空白对照组显著降低.结论 MPC30-DEA70能够安全有效地进入肾脏各组织,在体内运载AT1受体AS-ODN,下调AT1受体蛋白及其mRNA表达,抑制SHR大鼠血压进展及心血管重构,是一种创新性的非病毒类基因运输载体.     

重症监护室内重症肺炎患者新发血栓事件和病死率的研究分析

背景探讨社区获得性肺炎（community acquired pneumonia,CAP）及新型冠状病毒感染（coronavirus disease 2019,COVID-19）所致重症肺炎患者的血栓栓塞症事件的发生率、病死率,并分析其相关高危因素。方法 收集2018年1月—2023年2月期间复旦大学附属中山医院（厦门）重症监护室收治重症肺炎患者161例。根据肺炎类型划分为COVID-19组88例、CAP组73例;根据是否发生血栓,划分为血栓组及非血栓组。收集人口统计学资料、实验室指标,并记录两组患者的血栓栓塞症事件、结局。结果 CAP组中出现24例（32.9%）血栓,均为静脉血栓,无动脉血栓形成;COVID-19组出现32例（36.4%）血栓,其中31例为静脉血栓（2例合并新发脑梗）,1例为新发心肌梗死;但两组血栓发生率无显著差异（P>0.05）。血栓组与非血栓组间的性别、年龄、静脉血栓栓塞症评分（venous thromboembolism score,VTE评分）、活化部分凝血活酶时间（activated partial thromboplastin time,APTT）及...     

磷酸胆碱聚合物作为药物运输载体转染大鼠心肌细胞的体外研究

目的探讨新型阳离子磷酸胆碱聚合物MPC30-DEA70能否安全有效地转染进入心肌细胞.方法应用原子转移自由基聚合法 (ATRP)合成具有高度生物相容性的双嵌段的MPC30-DEA70,以异硫氰酸荧光素(FITC)标记,并对材料的溶液进行表征;采用MTT法检测MPC30-DEA70与心肌细胞的相容性;应用荧光显微镜(FM)、共聚焦激光扫描显微镜(CLSM)、透射电镜(TEM)观察MPC30-DEA70在细胞内的分布和定位;流式细胞术(FCM)检测MPC30-DEA70的细胞转染效率和荧光强度.结果 MPC30-DEA70与心肌细胞具有较好的细胞相容性,在较高浓度下才表现出一定的细胞毒性并呈现剂量依赖性;MPC30-DEA70可以进入到心肌细胞内部,大部分分布于核周围,少部分可以进入细胞核,对心肌细胞的超微结构无明显影响;MPC30-DEA70在心肌细胞内具有较高的转染效率和荧光强度,并呈剂量依赖性.结论 新型阳离子磷酸胆碱聚合物MPC30-DEA70可以安全有效转染心肌细胞,是一种理想的非病毒类药物或基因运输载体.     

磷酸胆碱聚合物载反义c—myc寡核苷酸对兔髂动脉球囊损伤后血管狭窄的影响

目的探讨局部转运磷酸胆碱聚合物MPC30-DEA70载反义c—myc寡核苷酸（c—mycAS—ODN）基因复合物对兔髂动脉球囊损伤后血管狭窄的影响。方法40只家兔随机分为对照组、多聚赖氨酸（PLL）组、裸c—mycAS—ODN组、PLL载基因复合物N／P=3：1组和N／P=5：1组,每组各8只。构建兔髂动脉球囊损伤模型,于血管损伤段行PLL、c—mycAS—ODN、PLL载N／P=3：1和N／P=5：1基因复合物的局部转运。24h后应用共聚焦显微镜观察基因复合物在髂动脉的分布情况;4周后苏木精-伊红染色光镜下观察髂动脉的组织形态学变化,包括新生内膜面积（NIA）、中膜面积（MA）和新生内膜／中膜面积比（I／M）;Western blot法检测各组损伤血管处c—myc蛋白的表达情况。结果共聚焦显微镜可见转染N／P=3：1、N／P=5：1基因复合物的血管内膜有均匀的绿色荧光分布。苏木精-伊红染色光镜下对照组、PLL组、裸c—mycAS—ODN组均可见显著的内膜增生,组间比较NIA、I／M无显著性差异（P〉0．05）;与对照组比较,N／P=3：1组和N／P=5：1组NIA、I／M均明显减少（P〈0．05）,后两组间比较无显著性差异（P〉0．05）。Western blot显示对照组、PLL组、裸c—mycAS—ODN组c—myc蛋白表达均明显增高,组间比较无显著性差异（P〉0．05）;与对照组比较,N／P=3：1组和N／P=5：1组c—myc蛋白表达明显减少（P〈0．05）,后两组间比较无显著性差异（P〉0．05）。结论多聚赖氨酸可促进MPC30-DEA70／c—myc AS—ODN复合物进入髂动脉血管,有效抑制球囊损伤后新生内膜的过度增生,为基因治疗血管内狭窄提供了新型的非病毒类转基因手段。     

新型阳离子磷酸胆碱聚合物MPC30-DEA70转染血管平滑肌细胞的体外研究

目的 探讨新型阳离子磷酸胆碱聚合物MPC30-DEA70（PC聚合物）转染进入体外培养的血管平滑肌细胞（VSMCs）的安全性和有效性.方法 应用ATRP法合成具有高度生物相容性的PC聚合物MPC30-DEA70;植块贴壁法原代培养大鼠VSMCs;MTT法检测PC聚合物与VSMCs的细胞相容性;应用FM及CLSM观察PC聚合物在细胞内的分布和定位;FCM法检测PC聚合物在VSMCs中的转染效率和荧光强度.结果 PC聚合物与原代培养的VSMCs具有较好的细胞相容性,随浓度的增高表现出一定的细胞毒性;PC聚合物可以转染进入VSMCs,大部分分布于细胞质及核周围,少部分可以进入到细胞核内;PC聚合物在VSMCs中具有较高的转染效率和荧光强度,并呈剂量依赖性.结论 新型阳离子磷酸胆碱聚合物MPC30-DEA70可以转染进入血管平滑肌细胞,是一种安全有效的非病毒类药物运输载体.     

磷酸胆碱聚合物MPC30-DEA70负载转化生长因子β1AS-ODN转染心肌细胞

背景：目前反义寡核苷酸的基因治疗已经拥有良好的应用前景,但是反义寡核苷酸的相对分子质量小却不容易入细胞并且易被核酸酶降解,能否有效地穿过细胞膜且不被核酸酶降解从而与目的基因结合发挥作用,因此人们一直致力于理想载体的选择、基因转移效率的增加和转移特异性等研究。目的：探讨新型阳离子磷酸胆碱聚合物MPC₃₀-DEA₇₀能否有效地负载转化生长因子β1反义寡核苷酸(AS-ODN)进入心肌细胞,并观察其对该基因胞内生物表达的影响。方法：按不同N/P电荷比值将载体MPC₃₀-DEA₇₀与转化生长因子β1 AS-ODN络合成形成基因复合物并且对其总电性进行表征;采用MTT法检测MPC₃₀-DEA₇₀与心肌细胞的生物相容性;共聚焦激光扫描显微镜观察MPC₃₀-DEA₇₀/TGF-β1AS-ODN在细胞内的分布和定位;应用流式细胞仪检测MPC₃₀-DEA₇₀/TGF- β1AS-ODN(FAM标记)的细胞转染效率和荧光强度;Western blot、RT-PCR法检测转化生长因子β1细胞内表达水平。结果与结论：MPC₃₀-DEA₇₀与心肌细胞具有较好的细胞相容性,在较高质量浓度(>20 mg/L)下才表现出一定的细胞毒性并呈剂量依赖;MPC₃₀-DEA₇₀/TGF-β1AS-ODN复合物对心肌细胞具有较高的转染效率,并且能够携带转化生长因子β1 AS-ODN进入细胞后下调转化生长因子β1 mRNA和蛋白的表达。新型阳离子磷酸胆碱基聚合物MPC₃₀-DEA₇₀可以有效负载和运输转化生长因子。中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程     

磷酸胆碱聚合物载AT1受体siRNA对血管内皮细胞AT1受体表达的影响

目的探讨新型阳离子磷酸胆碱聚合物MPC30-DEA70载AT1受体siRNA对血管内皮细胞AT1受体表达的影响。方法应用琼脂糖凝胶电泳表征具有不同N/P比值的MPC30-DEA70与siRNA的复合物;将不同比例的MPC30-DEA70/siRNA基因复合物转染至人脐静脉内皮细胞,应用荧光显微镜(FM)检测其细胞内分布;流式细胞术(FCM)检测转染效率及荧光强度;Western blot法和RT-PCR法检测AT1受体蛋白及mRNA的表达情况。结果不同N/P比值的基因复合物在电泳中可见不同程度的迟滞现象,随正电性增强而显著。FM观察到MPC30-DEA70/siRNA复合物分布在细胞核周围,FCM结果显示随N/P比值的增大,转染效率明显增加,荧光强度也随之增强。RT-PCR法和Western blot法显示随着N/P比值的增大,基因复合物可使AT1受体的mRNA和蛋白表达明显下降(P<0.05)。结论 MPC30-DEA70可作为AT1受体siRNA的载体转染至血管内皮细胞,下调AT1受体的mRNA及蛋白的表达,提示阳离子磷酸胆碱聚合物可以有效负载和运输siRNA,抑制特异基因的表达,是一种有效的非病毒类转基因载体。