大鼠心脏移植术后移植心肌组织的病理变化

目的：讨论大鼠同种异位移植术后，不同时间点移植心肌组织的病理变化。方法：SD大鼠为供体、Wistar大鼠为受体，分为6组，行腹腔异位心脏移植术。分别于术后24小时、72小时、7天、10天、12天取移植供 体心脏做病理切片，于光学显微镜下进行病理变化分级。结果：与移植前相比，术后72小时移植心肌组织开始出现典型的I－II级移植排斥性病理改变，术后第7天表现为III级或III级以上严重排斥反应的病理改变。结论：大鼠同种异位心脏移植后第3天，宿主开始对异体移植物产生病理水平的排斥，第7天时达到高峰。     

微量元素硒对健康大鼠CD4~+和CD8~+淋巴细胞的影响

近年的研究指出,人类免疫缺陷病毒(HIV)感染病人血清中微量元素硒水平与CD4⁺细胞数、CD4⁺/CD8⁺比例、细胞比容、血清白蛋白呈正相关^[1],HIV1感染儿童的病死率与低CD4⁺细胞数和低血浆硒水平明显相关^[2].     

大鼠心脏移植淋巴细胞多基因差异表达及淋巴细胞表面蛋白分子的表达时相比较

目的建立大鼠异体异位心脏移植动物模型,观察心脏移植前后淋巴细胞多基因表达和CD4、CD8分子表达及环孢素A对其影响。方法 SD大鼠为供体,Wistar大鼠为受体,分为心脏移植对照组和环孢素A干预两组。移植前、移植后24 h、3 d、7 d、10 d和12 d测定外周血淋巴细胞CD4、CD8分子表达、荧光差异显示分析淋巴细胞编码基因表达水平。结果 (1)移植组:7个基因差异表达,比同组的CD4和CD8分子开始正调表达的时间提前24 h;(2)环孢素A组外周血淋巴细胞的基因表达水平发生变化的有5个基因差异表达;(3)环孢素A组2.3-bisphosphoglycerate比对照组的第一个正调表达时相至少晚24 h,环孢素A还可抑制心脏移植后7 d内外周血淋巴细胞对gig18基因的转录;移植后24 h内,环孢素A组外周血淋巴细胞Na-通道蛋白基因正调表达。结论淋巴细胞多基因差异表达及与表面蛋白分子表达时相比较对于深入研究移植排斥反应机制和环孢素A的作用机制具有一定的意义。     

大鼠静脉多次注射人脐带间充质干细胞安全性的研究

目的:观察多次静脉输注人脐带间充质干细胞(hu MSCs)对大鼠的毒性反应。方法:1贴块法培养hu MSCs;流式细胞仪鉴定第4代hu MSCs特异性表面抗原;标准试剂盒鉴定第4代hu MSCs向脂肪细胞和成骨细胞分化的潜能;2182~203g的SD大鼠分为对照组、0.9%氯化钠组和干细胞组,各8只,雌雄各50%。3干细胞组分别于第1、4和15天时经尾静脉注射(2.5×106)个/kg体质量的第4代hu MSCs,0.9%氯化钠组于同等时间注射与细胞悬液等量0.9%氯化钠液。4第3次注射转染RFP基因(中文)的hu MSCs后11天,腹主动脉取血,检测和比较血常规和生化指标;取脑、心、肺、肝及肾进行病理学检查;荧光显微镜观察器官组织中表达RFP的hu MSCs细胞分布情况,流式细胞仪检测骨髓中表达RFP的hu MSCs;ELISA检测血清γ-IFN、IL-2、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10及IL-12含量。结果:1第4代hu MSCs特异性表面抗原CD73、CD90和CD105表达强阳性,纯度分别为98.7%、99.6%和98.6%,而CD34、CD45、CD11b、CD19、CD79a和HLA-DR的表达水平为阴性,CD14表达水平为23.1%;hu MSCs分化成脂细胞和成骨细胞的比例均为99%;2注射3次干细胞后实验动物全部存活,干细胞组部分血常规和生化指标与0.9%氯化钠组相比有差异,但与对照组相比,只有PLT明显降低、CHOL明显升高;3干细胞组脑、心、肺、肝、肾的形态和组织病理学无明显改变;(4)干细胞组的器官组织和骨髓中未检测到表达RFP的hu MSCs;(5)干细胞组血清IL-8水平明显升高。结论:多次尾静脉注射hu MSCs对大鼠没有明显的毒性反应。     

大鼠心脏移植后淋巴细胞5种免疫分子表达的变化

目的：观察大鼠异体异位心脏移植术后不同时间点，淋巴细胞相关免疫分子的表达水平、供心存活率及心肌组织的病理学改变，探讨免疫排斥反应的相关时间进程。方法：分别经供体SD大鼠的心脏主动脉、肺动脉与受体Wistar大鼠的腹主动脉及下腔静脉吻合，进行异位心脏移植术。于术前及术后不同时间点，取血分离淋巴细胞。用流式细胞仪分别检测淋巴细胞上CD4、CD8、IL-2R、ICAM-Ⅰ和MHC-Ⅱ类分子的表达水平。对供心心肌组织进行常规病理学检查。结果：于移植后24h，只有MHC-Ⅱ类分子的表达水平增加，CD4、IL-2R和ICAM—Ⅰ的表达水平降低，CD8无改变。术后72h，CD4、CD8及IL．2R的表达增加，其中CD8和IL-2R达峰值。术后7～10d，除CD4的表达继续增加外，其他4种免疫分子的表达水平逐渐降低。术后不同时间点移植心脏的存活率分别为：100％(24h)、85．7％(72h)、16．7％(7d)、0(10d和12d)。病理学检查显示，移植后24h，心肌组织无明显的病理学变化，术后3d，7只大鼠中4只出现ⅠA级及以上病理改变。术后7d，6只大鼠全部发生Ⅱ级以上的病理学变化。结论：大鼠心脏移植后的24h内，外周血淋巴细胞为以MHC-Ⅱ分子表达为主的抗原识别、呈递期，并伴有一过性免疫功能降低；术后24—72h为T细胞活化期，术后3-7d为免疫排斥反应效应期。CD4、CD8和IL-2R等免疫分子表达的峰值与开始出现轻度排斥反应时病理学变化的时间相一致。     

脐带间充质干细胞源外泌小体减轻糖尿病模型小鼠心肌纤维化

目的:探讨脐带间充质干细胞外泌小体对糖尿病模型小鼠心肌纤维化的保护作用。方法:6~8周C57BL/6雄性小鼠随机分为3组:对照组、糖尿病模型组和糖尿病+外泌小体组。采用高脂饮食连续喂养5周后,联合小剂量多次(45 mg/kg,每周1次,连续5周)腹腔注射链脲佐菌素的方法诱导糖尿病(血糖≥16.7 mmol/L)模型。糖尿病+外泌小体组在糖尿病造模后,经尾静脉每周注射1次外泌小体,连续注射4周;对照组和糖尿病组予等体积的生理盐水连续注射4周。利用小动物彩色多普勒超声诊断仪检测小鼠心功能指标;然后取腹主动脉血,用生化比色法检测葡萄糖和游离脂肪酸的含量;同时取心脏组织,HE染色观察心肌纤维的结构变化;Masson染色观察心肌纤维化水平。结果:超声心动图结果显示,与对照组相比,糖尿病组较对照组的左心室舒张末期内径和左心室收缩末期内径增大(分别P0.05和P0.01),射血分数和室壁缩短率下降(P0.01);糖尿病+外泌小体组较糖尿病组的左心室收缩末期内径减小,心室扩张减小,射血分数和室壁缩短率提高(P0.01)。生化比色法检测血糖及血浆游离脂肪酸结果显示,与对照组相比,糖尿病组血糖及血浆游离脂肪酸水平显著增高,差异有统计学意义(P0.01);糖尿病+外泌小体组可显著降低血糖及游离脂肪酸水平,差异有统计学意义(P0.01)。HE染色结果显示,对照组心肌细胞完整,排列整齐;糖尿病组心肌细胞出现肥大、断裂;糖尿病+外泌小体组心肌细胞较完整,排列较整齐。Masson染色结果显示,与对照组相比,糖尿病组纤维化面积显著增大,差异有统计学意义(P0.01);与糖尿病组比较,糖尿病+外泌小体组纤维化面积减小,差异有统计学意义(P0.01)。结论:局部注射人脐带间充质干细胞外泌小体可以减轻糖尿病小鼠心肌纤维化,并改善心脏功能。     

不同剂量人脐带间充质干细胞异种移植对大鼠血液学及肝肾功能影响的研究

目的 观察不同剂量的人脐带胶样组织间充质干细胞(hUMSCs)经静脉移植入大鼠体内对血常规及肝肾功能等指标的影响.方法 ①体外培养人脐带间充质干细胞;利用流式细胞仪鉴定第4代hUMSCs表面抗原的表达;标准试剂盒鉴定第4代hUMSCs向脂肪细胞和成骨细胞分化的潜能;②182～203 g的50只SD大鼠随机分为5组:空白对照组;盐水组;3.5×107/kg干细胞移植为干细胞Ⅰ组;3.5×108/kg干细胞移植为干细胞Ⅱ组;3.5×109/kg干细胞移植为干细胞Ⅲ组;注射后第11天,腹主动脉取血,监测和比较血常规和生化指标,分析比较各项指标的变化和差异.结果 ①第4代hUMSCs特异性表面抗原CD73、CD90和CD105表达强阳性,能分成脂细胞和成骨细胞,比例分别为98.4％和95.7％;②注射干细胞后实验动物全部存活,第11天时实验组24项血常规指标与空白对照组相比差异无统计学意义;③于细胞组血糖较空白对照组明显降低[(8.4±1.6),(7.7±1.6),(7.1±1.6) mmol/L比(9.6±4.9)mmol/L];干细胞组糖化血清白蛋白较空白对照组明显降低[(0.69±0.10),(0.68±0.12),(0.65±0.08) mmol/L比(0.85±0.14) mmol/L];干细胞组的心肌酶水平较空白对照组明显降低[(184±8),(155±24),(144±18)U/L比(223±21) U/L,P＜0.05].结论 不同剂量hUMSCs经尾静脉注射入大鼠体内引起血糖、糖化血红蛋白和心肌酶等的降低,且与剂量相关,选择适当剂量的干细胞移植将对临床治疗效果起到重要的作用.     

GABA对大白鼠左心室肌细胞动作电位的影响

用玻璃微电极技术观察GABA对大白鼠左心室肌细胞快反应动作电位的作用,发现灌流GABA100μg/ml后,可使左心室肌细胞动作电位幅度降低。由对照组100±6mv降低至78±17mv(25min P<0.01);APD_(50)缩短,由对照组18±6ms缩短至10±3ms(25min P<0.05);APD_(50)亦缩短,由对照组46±20ms缩短至27±10ms(25min P<0.05)。V_(max)降低,由对照组104±27v/s降至86±26v/s(25min P<0.05)。     

环孢素A、抗生素、硒对大鼠心肌组织中CD4~+/CD8~+淋巴细胞浸润的影响

将同批Wistar大鼠分为对照、环孢素A、抗生素以及微量元素硒组 (每组各 6只 )。于给药 2 4h取心脏标本 ,冰冻切片 ,常规染色和CD4 + /CD8+ 单克隆荧光抗体免疫组化标记 ,于普通光学显微镜及荧光显微镜下对心肌组织中淋巴细胞进行计数和分类。常规染色片中 ,环孢素A组、抗生素和服硒组心肌组织中浸润的淋巴细胞总数均低于对照组 (P <0 .0 1 ) ;降低程度为环孢素A组 >服硒组 >抗生素组。免疫组化片中 ,环孢素A组和抗生素组心肌组织中浸润的CD4 + 和CD8+ 淋巴细胞数低于对照组。结果提示 :环孢素A、抗生素、微量元素硒均可抑制大鼠淋巴细胞对心肌组织的浸润 ,主要通过同时抑制CD4 + 和CD8+ 淋巴细胞在心肌组织中的浸润功能而起作用。     

硒制剂对大鼠心脏移植术后移植心肌组织病理变化的影响

目的：观察硒制剂对大鼠异位心脏移植术后不同时间点心肌组织病理变化的影响。方法：SD大鼠为供体、Wistar大鼠为受体，分为对照组和服硒组。对照组不给任何干预，服硒组按照40μg/kg/天的剂量，给予硒力口服液灌胃给药。两组行腹腔异位心脏移植术，分别于术前及术后24小时、72小时、7天、10天、12天取供体及移植心脏做病理切片，于光学显微镜下进行病理变化分级。结果：术后72小时对照组移植心肌组织开始出现典型的I^II级移植排斥性病理改变。术后第7天表现为Ⅲ级或Ⅲ级以上严重排斥反应的病理改变，而服硒组各时间点移植心肌的病理变化均明显轻于对照组。结论：硒制剂可明显减缓大鼠异位心脏移植术后移植心肌组织的病理改变，抑制宿主对异体移植物产生病理水平的排斥，延长移植物的存活时间。