聚乙二醇修饰干扰素α2b的稳定性研究

目的研究聚乙二醇修饰干扰素α 2b的稳定性。方法以抗病毒活性为指标 ,考察单修饰干扰素α 2b、多修饰干扰素α 2b和干扰素α 2b的稳定性 (4℃、2 5℃、37℃ )、抗胰蛋白酶水解能力和 37℃人血清稳定性。结果在4℃、2 5℃和 37℃条件下 ,稳定性依次为多修饰干扰素α 2b >单修饰干扰素α 2b >干扰素α 2b。抗胰蛋白酶水解试验表明 :干扰素α 2b在 30min时抗病毒活性迅速降到原来的 7.1% ,单修饰干扰素α 2b剩余 5 0 % ,多修饰干扰素α 2b仍保留 71%。体外稳定性试验表明 ,在 37℃人血清放置 10h ,干扰素α 2b只保留 35 % ,单修饰干扰素α 2b保留 71% ,而多修饰干扰素α 2b仍保留 95 %的抗病毒活性。结论聚乙二醇修饰可以增加干扰素α 2b的稳定性 ,抗胰蛋白酶水解能力和 37℃人血清稳定性。除了抗胰蛋白酶水解能力 ,修饰度的增加能够明显增强这种作用     

RhoGDI1通过抑制骨肉瘤细胞凋亡促进其顺铂耐药性的研究

目的 探讨抑制Rho蛋白鸟苷酸解离抑制因子-1(RhoGDI1)的表达对骨肉瘤顺铂耐药性的影响.方法 在骨肉瘤细胞中通过siRNA抑制RhoGDI1的表达(si-RhoGDI1-1、si-RhoGDI1-2组),CCK-8实验检测其对骨肉瘤细胞增殖和顺铂耐药性的影响,划痕实验和体外Transwell检测其对骨肉瘤细胞迁移及侵袭能力的影响,流式细胞术(FACS)和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测RhoGDI1对骨肉瘤细胞凋亡的影响.结果 与si-Control组(转染无意序列)比较,si-RhoGDI1-1、si-RhoGDI1-2组骨肉瘤细胞的增殖速度明细降低(P<0.01),对顺铂的耐受性明显降低(P<0.01),迁移到下室的细胞数显著减少;划痕实验和FACS结果显示,与si-Control组比较,si-RhoGDI1-1、si-RhoGDI1-2组细胞的修复能力明显减弱(P<0.05、P<0.01),细胞凋亡率(P<0.01)和凋亡诱导因子Bax的表达水平明显升高(P<0.01).结论 RhoGDI1通过抑制骨肉瘤细胞凋亡促进骨肉瘤细胞顺铂耐受性.     

聚乙二醇修饰干扰素α2b的体内药代动力学研究

目的：运用同位素示踪法－^125I标记和SDS－PAGE研究聚乙二醇修饰干扰素2b的药代动力学。方法：以大鼠为研究对象,分别按1,3,5μg／kg的的剂量股静脉注射给药,颈动脉采血。利用SDS－PAGE测定血液中原形药物放射量与总放射量的百分比,以校正全血血药浓度。用小鼠测定^125I－干扰素α2b和^125I－单修饰干扰素α2b的组织分布和尿粪排泄,用大鼠测定其胆汁排泄。结果：^125I－干扰α2b和^125I－单修饰干扰素α2b静脉注射给药符合一级消除动力学的二房室模型,按低,中,高三个剂量组,^125I－干扰α2b的消除半衰期（t1/2β）分别为1．020,0．914,0．665h,^125I－单修饰干扰素α2b的消除半衰期（t1/2β）分别为2．72,3．17,2．69h,^125I－单修饰干扰素α2b在肾中的分布明显减少,在肝中的分布明显增加。结论：聚乙二醇修饰能够显著延长干扰素α2b的体内半衰期。     

黄芪人参汤治疗成人病毒性心肌炎90例

目的:观察中药黄芪人参汤加减治疗成人病毒性心肌炎疗效.方法:90例病毒性心肌炎患者均以黄芪人参汤为基础方治疗,根据不同中医证型加减药物;以治疗前后症状的改善程度及心肌酶学指标(CK、CKMB)的改善程度判定疗效,并作统计学分析.结果:①治疗前后CK、CKMB及各类心律失常对比,有高度显著差异(P＜0.01).②治疗前后临床症状改善显著,总有效率为95.56%.③各证型总有效率分别为:邪毒浸心型96%,气阴两虚型100%,邪伤气阴型78.57%,阴阳两虚型100%,邪伤气阴型与其余3证型疗效比较,有显著性差异(P＜0.05).结论:成人病毒性心肌炎病机为心肺气阴两虚,邪舍心脉,以虚为主之虚实夹杂证.黄芪人参汤以益气养阴为主,兼以祛邪透邪外出组方,随证加减药物,体现了"正气存内,邪不可干"之机理和辨证论治之原则,黄芪人参汤治疗成人病毒性心肌炎疗效确切,无明显毒副反应.     

葡萄糖调节受损患者对口服葡萄糖耐量试验知晓率调查分析

目的：了解四川某三甲医院葡萄糖调节受损患者对口服葡萄糖耐量试验的掌握程度,分析相关影响因素,探讨相应的对策,提高口服葡萄糖耐量试验的准确性。方法采用自行设计的口服葡萄糖耐量试验相关知识问卷,问卷包括：一般资料问卷和OGTT知识调查。OGTT知识调查由试验目的、试验前准备、试验中注意事项、试验后标本处理、结果判读等组成,通过半结构式面对面调查葡萄糖调节受损患者对OGTT试验的知晓率并进行分析。结果对OGTT试验目的知晓率为71.4%,对试验前准备知晓率为54.0%,对试验中注意事项知晓率为52.0%,对试验后标本的正确处理知晓率为35.7%,对试验结果判断正确的知晓率为28.5%,综合以上分析平均知晓率为48.3%。接受过OGTT试验相关知识教育的患者为60.0%。接受相关知识主要来自医生和护士,较少从陪伴、家属、健康教育宣传资料处了解。结论葡萄糖调节受损患者对OGTT试验知晓率较差,需加大对OGTT试验相关知识的宣传,提高患者对OGTT试验的掌握度,从而保证OGTT试验的准确率。     

中西医结合临床护理人才培养模式在中医医院的应用研究

目的：探讨中西医结合临床护理人员规范化培训模式与应用效果,培养适应中医医院护理工作需要的人才,推动中西医结合护理专业的发展。方法：成立培训管理组织机构,制定培训计划和考核方案,编写培训教材。从2008年至2011年。对西医院校应届毕业的200名护理人员进行为期2年的中西医结合护理规范化培训。结果：通过培训,非中医护理专业毕业的护理人员不仅掌握了中医基础知识和中医护理操作技术,而且能够熟练运用中西医结合的护理方法,综合素质有了明显提高。结论：实施中西医结合临床护理人员规范化培训,有利于中医医院护理队伍的建设和中西医结合护理工作的顺利开展,能真正实现中医医院“西医不落后,中医要领先”的发展目标。     

新型融合基因hIFNα1—CB在大肠杆菌中表达

目的构建人干扰素α1和抗菌肽B的融合蛋白表达质粒pHC,并初步研究融合蛋白的抗病毒活性.方法重组质粒pHC转化E.coli JM83,温控诱导表达,SDS-PAGE制备蛋白质,病变抑制法测定其抗病毒比活性.结果得到分子量约为21ku的目的蛋白,抗病毒比活性为2.62×106IU/mg.结论成功构建了融合蛋白表达质粒pHC,重组蛋白的构象及C-端的β位酰胺化等因素可能影响重组蛋白的生物学活性.     

重组人LFA3-Ig融和蛋白体内外生物活性研究

LFA3-Ig融合蛋白是由人淋巴细胞功能相关抗原3(LFA-3)与CD2结合的部分与人IgG1的Fc段构成的融合蛋白,采用基因工程技术大量制备,可用于治疗银屑病等自身免疫性疾病。实验利用体外细胞模型及正常食蟹猴作为体内模型,研究了上海市抗体工程技术研究中心研制和中试生产LFA3-Ig的生物学效应。结果表明:rhLFA3-Ig可通过特异性地结合淋巴细胞表面的CD2,抑制T淋巴细胞的活化,其体外活性与国外同类产品相比无显著差异;食蟹猴重复应用rhLFA3-Ig后,高剂量组外周血淋巴细胞有显著下降,于给药后48 h即降至最低,为给药前的76.1%;给药期间高剂量组外周血淋巴细胞波动于给药前的80%左右,至恢复期末,淋巴细胞恢复至给药前的90%左右。给药后,各剂量组CD2+、CD3+、CD4+及CD8+淋巴细胞计数均有不同程度的下降,且具有剂量相关性,停药后可恢复。上述结果为该重组融合蛋白提供了必要的临床前药效学资料,可作为其临床试验的重要参考。     

聚乙二醇修饰干扰素α2b的分离纯化和制备

目的建立聚乙二醇修饰干扰素α2b的分离纯化方法.方法运用Superdex75Highload制备型凝胶色谱柱,以含0.15mol/LNaCl的0.01mol/L磷酸盐缓冲液进行洗脱,流速为1.5ml/min,检测波长为215nm.结果各洗脱组分经SDS-PAGE检测呈单一条带.聚乙二醇修饰干扰素α2b的蛋白回收率为36.5%,抗病毒活性回收率为4.3%,比活度为4.74×10\+7IU/mg,是原形干扰素α2b的10.4%.结论这种方法可以用于制备聚乙二醇修饰干扰素α2b.