PCR-荧光探针法和核酸序列测定法对呼吸道病原体的检测效能比较及呼吸道病原体的流行特征分析

目的 比较PCR-荧光探针法和核酸序列测定法对呼吸道病原体的检测效能,进一步分析呼吸道病原体的流行特征。 方法 选择 2019 年 7 至 12 月浙江大学医学院附属杭州市第一人民医院呼吸道感染患者 309 例,采集鼻咽拭子标本,分别采用核酸序列测定法和 PCR-荧光探针法进行同步盲法检测,以核酸序列测定法的检测结果为金标准,分析 PCR-荧光探针法检测不同病原体的灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值,并分析不同呼吸道病原体的流行特征。 结果 309 例鼻咽拭子标本中,两种方法检测结果不一致或不完全一致的样本共 2 例,针对不同病原体,PCR-荧光探针法的检测灵敏度均为 100.00%,特异度为99.65%~100.00%,阴性预测值均为 100.00%,阳性预测值为 75.00%~100.00% 。309 例呼吸道感染患者,人鼻病毒检出率为25.6%（79/309）,人腺病毒检出率次之,为 11.3%（35/309）;学龄前儿童（＜6 岁）和 6~21 岁人群检测出 18 种呼吸道病原体,其中以人鼻病毒检出率最高。 结论 与核酸序列测定法相比,PCR-荧光探针法检测鼻咽拭子标本中的呼吸道病原体更灵敏、安全、简便、稳定,具有较高的临床应用价值。本院呼吸道感染以人鼻病毒为主。     

四重逆转录重组酶聚合酶等温扩增技术快速联检四种难鉴别蚊媒病毒的效果观察

目的建立针对登革病毒（DENV）、黄热病毒（YFV）、基孔肯雅病毒（CHIKV）、寨卡病毒（ZIKV）的四重逆转录重组酶聚合酶扩增（RT-RPA）技术,用于同时快速检测上述4种病毒。方法通过正交设计建立检测4种蚊媒病毒（DENV、YFV、CHIKV、ZIKV）的四重RT-RPA反应体系。通过质粒标准品、体外转录RNA和临床血清验证单重RT-RPA和四重RT-RPA的检测灵敏度、特异度、重复性和临床应用符合率。结果单重RT-RPA对DENV、YFV、CHIKV、ZIKV质粒DNA的检出限分别为1×102、1×102、1×102、＜1×102Copies/ml,对DENV、YFV、CHIKV和ZIKV体外合成RNA的检出限分别为1×102、1×102、1×102、1×102Copies/ml,四重RT-RPA对DENV、YFV、CHIKV和ZIKV质粒DNA的检出限分别为1×102、1×102、1×102、1×102Copies/ml,对体外合成RNA的检出限分别为5×102、5×102、5×102、5×102Copies/ml。本研究建立的单重及四重RT-RPA反应体系与其他常见病毒不存在交叉反应,RT-RPA法测定的阈值时间值（TT）的变异系数为1.76%~5.96%。四重RT-RPA法对不同病毒体外转录RNA检出率不同,DENV、YFV和CHIKV为100.00%,ZIKV为83.33%。单重RT-RPA、四重RT-RPA、RT-PCR对DENV临床样本的检出率无统计学差异（P＞0.05）。结论本研究建立的针对DENV、YFV、CHIKV和ZIKV的单重RT-RPA和四重RT-RPA检测方法特异度好、灵敏度高、重复性好,对蚊媒传染病的早期诊断及鉴别诊断具有重要作用,同时也为其他新发再发传染病的快速诊断方法建立提供研究方向。     

鼻咽拭子中鼻病毒三种检测方法比较分析

目的 比较三种检测方法(病毒分离培养鉴定法、核酸序列测定法和PCR-荧光探针法)检测鼻咽拭子标本中鼻病毒(HRV)的可靠性。方法 采用盲法、对比试验设计。根据纳入标准和排除标准入组220例鼻咽拭子标本,分别用病毒分离培养鉴定法、核酸序列测定法和PCR-荧光探针法进行盲法检测,以评价三种检测方法的临床应用性能。结果 本次试验入组的220例鼻咽拭子样本中,病毒分离培养鉴定法检测结果为阳性的样本20例,核酸序列测定法检测结果为阳性的样本32例,PCR-荧光探针法检测结果为阳性的样本35例。与病毒分离培养相比,PCR-荧光探针法检测阳性符合率为100.00%,阴性符合率为92.50%,总符合率为93.18%;PCR-荧光探针法与病毒分离培养鉴定法检测结果一致性一般(kappa=0.692),与核酸序列测定法检测结果一致性较好(kappa=0.947)。结论 PCR-荧光探针法检测鼻咽拭子标本中的HRV可靠、准确、安全、简便、稳定,具有较高的临床应用价值。