615系小鼠可移植性肝癌基因表达产物——蛋白质的研究

作者对615系小鼠可移植性肝癌H615(原发性)和H22(OAAT诱发)的肝癌细胞基因组表达的蛋白质进行了分析研究。SDS-PAGE 扫描显示肝癌组织的蛋白质较正常肝组织的蛋白质有特征性差异。高分辨IF-SDS-PAGE 双相电泳分析发现:H615新出现 6个蛋白质斑点,消失 4个斑点,有7个斑点的蛋白质含量升高,21个斑点含量下降;H22新出现7个斑点,消失12个斑点,有15个斑点的含量升高,17个斑点含量下降。结果表明,实验性肝癌组织H615和H22的细胞基因表达发生了一定变化,这些改变可能是肝细胞癌变的部分原因。     

人脑胶质瘤cDNA文库的构建

作者用异硫氰酸胍－酚－氯仿一步法提取人脑胶质瘤总ＲＮＡ，Ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）纤维素亲和层析分离ｐｏｌｙ（Ａ￣＋）ＲＮＡ为模板，合成的ｃＤＮＡ长度为０．２～５ｋｂ。胶质瘤ｃＤＮＡ插入片段克隆到λｇｔ１１载体，所获得的重组子在体外进行包装。该ｃＤＮＡ文库滴度为１．１２×１０￣５，克隆效率为４．８×１０￣３／ｎｇｃＤＮＡ。本文库为研究人脑胶质瘤的基因结构与功能提供了重要基础。     

Polymin-HRP核酸杂交探针

本文叙述一种将辣根过氧化物酶(HRP)与单链DNA交联以制备非同位素核酸杂交探针的新方法。HRP-单链DNA复合物可用于斑点杂交,经杂文并与HRP底物溶液作用后,可直接检出互补的DNA靶序列,而不需繁冗的细胞化学夹心法。本法可检出 1～4 pg的靶DNA。     

肺癌组织和患者体液中P_(21)~(ras)表达的初步研究

作者首次利用水平式板状凝胶电泳分离蛋白质,不经过Western转移电泳,直接用抗P~(ras)_(21)单克隆抗体在凝胶上进行酶联免疫分析,研究了人肺癌组织及患者体液中P~(ras)_(21)的表达情况。9例肺癌中8例有P~(ras)_(21)表达,其中4例明显高于正常肺;18例肺癌患者血清和2例胸水中没有检查到P~(ras)_(21)。     

桥粒蛋白生化免疫特性研究

桥粒在含高浓度脲(0.5mol/L)的变性剂中(100℃)作用30分钟即能完全溶解.经SDS-PAGE分离获得7条高分子量(>67kd)蛋白带和一些小分子量角蛋白。这7条高分子量蛋白带是桥粒的特异组成蛋白,即桥粒蛋白Ⅰ和Ⅱ(Desmoplakin Ⅰ和Ⅱ),多肽3、4a、4b、5、6,它们的分子量分别为250kd和215kd、165kd、130kd、115kd、83kd及75kd.用制备电泳法1次可提取Desmoplakin Ⅰ 2～2.5mg,纯度达93.1％.等电聚焦电泳测定其等电点为6.8～7.2。氨基酸组成分析甘氨酸含量很高,免疫印迹表明能被Desmoplakin Ⅰ McAb识别.     

615系小鼠可移植性肝癌组织中不依赖于cAMP的蛋白激酶研究

多种致癌基因编码蛋白具有不依赖于cAM P的酪氨酸蛋白激酶活性,这类酶活性升高,造成细胞内蛋白质错时错量磷酸化,是细胞发生转化的一个关键步骤,作者综合Weber和Huang的方法,处死实验动物后,迅速取出肝癌或肝组织,在冰浴中制成匀浆,并于10 000r/min,0～4℃离心20分钟,得含酶上清液。蛋白激酶活力测定系统内,含10mmol/L Tris.