抗肠道病毒71型感染药物的研究进展

肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)是引起手足口病(hand foot mouth disease,HFMD)的主要病原体,临床表现为手、足、口腔等部位的疱疹及中枢神经系统并发症[1].5岁以下的儿童感染后易发生严重的并发症,如无菌性脑炎、脑膜脑炎、脑干脑炎、脊髓灰质炎样麻痹、心肌炎和肺水肿等,这些并发症可导致死亡或永久性麻痹[2].至今,在全球许多国家发生了EV71感染的暴发,造成病例大量死亡[3-4].目前对于EV71感染既无有效的疫苗,也无明确有效的抗病毒药物[5-6].该病毒的复制周期包括吸附、穿入、脱壳、生物合成、装配与释放,这些过程都可能成为抗病毒药物设计的靶点,按照作用的靶点不同将目前研究的抗EV71药物分为以下几个方面进行综述.     

乙型肝炎病毒核苷类似物交叉耐药株RT区变异分析

目的研究多种核苷类似物(NAs)序贯治疗产生交叉耐药的患者体内乙型肝炎病毒(HBV)RT区变异位点和变异类型。方法筛选6例临床上对两种或两种以上NAs产生交叉耐药的患者,并从患者血清中获取HBV交叉耐药株DNA,进行全基因克隆和测序,从而分析其变异特点和规律。结果经测序鉴定,6位患者体内HBV基因型均为C型,产生交叉耐药的相关性变异以rtM204V/I(YMDD)变异为主(50%),部分YMDD变异株伴有rtL180M变异(16.7%)、其他伴随变异包括rtV173L(16.7%),rtL80I(16.7%)。此外,还发现RT区次要变异伴随位点rtL269I(40%)、rtQ333K(56.7%)、rtH337N(56.7%)。结论RT区次要变异伴随位点rtL269I、rtQ333K、rtH337N的出现可能增强了HBV YMDD变异株在体内的复制能力,并对交叉耐药准种所占比例起到了放大的效果,从而导致本研究中6例患者出现对拉米夫定、恩替卡韦、阿德福韦和替比夫定产生多重耐药。     

表达miR-10a的重组腺病毒的构建与鉴定

Objective To develop a miR-10a-expressing recombinant adenoviral vector. Methods The EGFP gene in shuttle plasmid pDC316-EGFP-U6 was replaced by red fluorescent protein mCherry gene. Long DNA sequence coding miR-l0a was synthesized. After annealing, the double-stranded miR-10a-coding sequence was inserted into pDC316-mCherry-U6. The resultant pDC316-mCherryU6-miR-10a was co-transfected with adenoviral skeleton plasmid pBHGlox△E1, 3Cre into HEK293 cells. The replication-defective adenovirus Ad-miR-10a was purified, amplified, and tittered by plaque assay. The mCherry expression was detected by fluorescence microscope. The expression of miR-10a by Ad- miR- 10 a in HeLa cells was determined by RT-qPCR. Results The sequence of pDC316-mCherryU6-miR-10 a was confirmed by restriction enzyme digestion and sequencing. mCherry expression could be detected under fluorescence microscope. The titers of Ad-miR-10a was 1.8 × 107 pfu/mL, and the level of miR-10a expression in HeLa cells infected with Ad-miR-10a was 40 times higher than that with Admock. Conclusion A miR-10a-expressing recombinant adenovirs Ad-miR-10a has been successfully constructed. The strategy for artificial expression of siRNA is applicable for expression of miRNA.     

miR-122启动子序列的克隆及特异性分析

目的 miRNA- 122启动子序列的预测、克隆及特异性分析.方法 分别从肝癌细胞系Huh-7及HepG2中扩增出预测的miR-122启动子,并将其克隆至含荧光素酶(firefly luciferase,Fluc)报告基因pGL4.17质粒上,用重组质粒转染Huh-7、HepG2及HeLa细胞,分析启动子的特性.结果 成功预测并克隆出miR-122的启动子序列.重组质粒转染细胞后,启动子能够启动Fluc的表达.用含启动子P1的重组载体pGL4.17-P1转染HeLa细胞后,用两种荧光素酶检测体系测得重组载体中荧光素酶的表达水平显著高于对照组(t =0.000 21,P＜0.01及t=0.000 38,P＜0.01).结论 Huh-7、HepG2细胞中miR-122表达差异与启动子序列缺失无关.而受miR-122启动子调节的报告基因在非肝细胞系(HeLa)中也表达,表明miR-122启动子不具有肝细胞特异性.     

口腔医学生早期接触临床教育模式的应用与体会

口腔医学生早期接触临床教育模式的构建和实施是当今口腔医学教育教改的核心内容之一.学校、医院密切配合,做好课程内容的设计和教学过程的组织协调工作.将"早临床、多临床、反复临床"的教育理念贯穿于口腔医学人才培养的全过程.实施口腔医学生早期接触临床教育模式,极大地促进了口腔医学生学习专业知识的热情和决心,提高了学习的兴趣;同时带教教师更加注重言传身教,努力提升自身业务水平.早期接触临床教育模式体现了基础课程和临床课程之间的双向渗透和重组,做到基础教学中有临床,临床阶段有基础,学生早期接触口腔临床.     

一种复方邻苯二甲醛消毒剂对遗体表面消毒效果观察

目的观察复方邻苯二甲醛消毒剂对遗体表面的消毒效果。方法采用悬液定量杀菌试验和遗体现场消毒试验对该复方邻苯二甲醛消毒剂的实验室杀菌效果和现场消毒效果进行了检测,同时与75%酒精作比较。结果用含邻苯二甲醛17 mg/L的该复方消毒剂作用3 min,对悬液内金黄色葡萄球菌、大肠杆菌的杀灭率均达到100%;对白色念珠菌杀灭率达到100%需要作用5 min。用相同浓度的该消毒剂对遗体表面作擦拭消毒并作用3min,对自然菌平均杀灭率达96.14%,用75%酒精以同样方式作擦拭消毒,对自然菌平均杀灭率为71.15%。结论该复方邻苯二甲醛消毒剂对细菌繁殖体具有快速杀灭作用,对遗体表面自然菌杀灭效果达到消毒合格要求,且明显优于75%酒精消毒效果。     

数字化微笑设计技术在口腔美学教学中的实施

口腔美学是临床修复的重要内容,数字化微笑设计技术以口腔美学标准为基本准则,使临床医生通过计算机软件将按特殊要求精确拍摄的照片进行美学分析和设计,操作前就实现精确的美学评估,预测评估修复后美学与功能的效果,并展示给患者,帮助临床医生做出合适的临床决策。将数字微笑设计技术引进口腔美学教学,通过理论学习和实际操作,使学生初步掌握数字化微笑技术的基本原理和流程,并在临床操作中逐步实施,逐步缩短临床和实习间差距,为将来临床工作顺利过渡奠定坚实的基础。在教学实施中总结积累经验,使口腔美学这门课程的不断丰富和完善。     

医学微生物学实验教学改革初探

实验教学是医学微生物教学中不可或缺的组成部分,不但可以有效促进理论课教学内容的消化吸收,还能培养学生分析问题和解决问题的能力,因此实验教学也是教学改革的重要环节。从医学微生物学实验教学角度出发,结合七年制和本科教学实践,概括了医学微生物学实验教学改革的内容,从明确教学目的、开展设计式教学、采用多样化教学手段和融入人文教育这几个方面介绍改革经验。     

表达miR-10a的重组腺病毒的构建与鉴定

目的 构建表达miR-10a的重组腺病毒(adenovirus,Ad)载体.方法 用红色荧光蛋白mCherry基因替换穿梭质粒pDC316-EGFP-U6的增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)报告基因.利用表达siRNA的策略,合成编码miR-10a的长链DNA序列,双链退火后克隆至pDC316-mCherry-U6获得pDC316-mCherry-U6-miR-10a.pDC316-mCherry-U6-miR-10a与骨架质粒pBHGlox△E1,3Cre共转染HEK293细胞,包装成复制缺陷型重组腺病毒Ad-miR-10a,空斑形成实验纯化、扩增、滴定重组腺病毒.Ad-miR-10a感染HeLa细胞后在荧光显微镜下观察mCherry表达,用RT-qPCR检测miR-10a表达.结果 构建的pDC316-mCherry-U6-miR-10a序列正确,荧光显微镜下可见mCherry的表达,重组腺病毒Ad-miR-10a滴度为1.8 × 107pfu/mL,感染HeLa细胞后miR-10a表达较mock高40倍.结论 成功构建了表达miR-10a的重组腺病毒,siRNA表达策略可用于miRNA的人工表达.

Abstract：

Objective To develop a miR-10a-expressing recombinant adenoviral vector. Methods The EGFP gene in shuttle plasmid pDC316-EGFP-U6 was replaced by red fluorescent protein mCherry gene. Long DNA sequence coding miR-l0a was synthesized. After annealing, the double-stranded miR-10a-coding sequence was inserted into pDC316-mCherry-U6. The resultant pDC316-mCherryU6-miR-10a was co-transfected with adenoviral skeleton plasmid pBHGlox△E1, 3Cre into HEK293 cells. The replication-defective adenovirus Ad-miR-10a was purified, amplified, and tittered by plaque assay. The mCherry expression was detected by fluorescence microscope. The expression of miR-10a by Ad- miR- 10 a in HeLa cells was determined by RT-qPCR. Results The sequence of pDC316-mCherryU6-miR-10 a was confirmed by restriction enzyme digestion and sequencing. mCherry expression could be detected under fluorescence microscope. The titers of Ad-miR-10a was 1.8 × 107 pfu/mL, and the level of miR-10a expression in HeLa cells infected with Ad-miR-10a was 40 times higher than that with Admock. Conclusion A miR-10a-expressing recombinant adenovirs Ad-miR-10a has been successfully constructed. The strategy for artificial expression of siRNA is applicable for expression of miRNA.     

人腺病毒3型感染对H9c2细胞microRNA表达谱的影响

目的研究腺病毒感染对大鼠心肌来源的H9c2细胞microRNA表达谱的影响。方法用人腺病毒3型（Ad3）攻击成层和未成层的H9c2细胞,6h后收获总RNA,基因芯片检测microRNA表达谱。结果比较未成层与成层的H9c2细胞microRNA的表达谱,H9c2细胞成层后有54种microRNA表达显著下调,7种microRNA表达显著上调。与未感染病毒的细胞比较,Ad3感染的未成层H9c2细胞有41种microRNA表达显著下调,12种microRNA表达显著上调。与未感染病毒的细胞比较,Ad3感染成层H9c2细胞后有8种microRNA的表达显著下调,62种microRNA的表达显著上调。结论细胞不同的生长状态及Ad3感染显著改变了H9c2细胞的microRNA表达谱。