利用生物信息学技术研究蛋白功能的几种方法

阐明基因的功能是后基因组计划的主要任务。生物信息学为解决这一难题提供了有力手段。生物信息学是用数理和信息学的观点、理论、方法研究生命现象 ,组织和分析呈指数增长的生物学数据的一门新型学科。本文介绍 4种应用生物信息学技术研究蛋白功能的方法     

Eukaryocytic Expression of Human B7. 1 （CD80） and its Antileukemia Effect

Objective: To construct the human B7. 1 (CD80) eukaryocytic expressing veotor and its expression on HL60 cells to investigate the immunotherapeutic and immunoprotective effects of B7. 1 molecule on acute leukemia. Methods: ①B7. 1 gene was subcloned from the cloning vector using PCR. Both of the PCR products and eukaryocytic expressing vector pHook were digested with Apa I , Sal I and linked using T4 DNA ligase. The ligased products were transduced into DH5α.B7. 1 gene containing clones were selected by digestion with Apa I and Sal I which were further con-formed by sequencing. ②HL60 cells were transformed by B7. 1 with lipofectamine and detected by FACS.③Tumor formation, mice survival time and the immunotherapeutic and immunoprotective effects by immunization with B7. 1^ cells were evaluated. Results:①The PCR products were about 620 bp. Six clones were all digested by Apa I and Sal I to produce 620 bp gene fragment which was in the same way as B7. 1. It demonstrated that the recombinant vector had been constructed successfully. Further sequencing confirmed the validity of the construction. There was no nucleotide mutation. ②B7. 1 was availably expressed on HL60 cells. ③ B7. 1 HL60 cells delayed the growth of tumor and prolonged the survival time of leukemic mice, distinctively. So did the immunoprotection of B7. 1 HL60 cell. Conclusion: The human B7. 1(CD80) eukaryocytic expressing vector can be success-fully constructed by molecular cloned methods and can be stably and availably expressed on the membrane of B7. 1 negative acute myelocytic leukemia ( AML ) cell line HL60. Furthermore, the costimulatory molecalar vaccine has siipaficanl effection of immunotherapy and immunoprotection and gives the rationale for clinical application.     

磷酯酰肌醇-3激酶家族研究进展

PI3激酶家族包括 3种类型 ,Ⅰ型和Ⅲ型的催化亚基与调节亚基形成异二聚体 ,II型不形成异二聚体 ,具有独特的C2结构域。生长因子、有丝分裂原等多种因素可使其活化。所生成的 3 磷酸肌醇脂 (PIP、PIP2、PIP3)具有第二信使功能 ,即作为信号转导分子膜易位活化的“锚”分子。PI3 K家族在细胞的增殖、抗凋亡、细胞迁移、膜泡转运、细胞癌性转化等众多过程有关的信号转导方面起重要作用 ,本文就此予以综述。     

抗CD3 scFv基因的真核表达及其生物学活性鉴定

目的：真核表达抗CD3单链抗体(scFv)，并研究其生物学活性。方法：将编码抗CD3 scFv的DNA片段插入真核表达载体pDisplay中。对所构建重组表达载体进行测序确认后，以电穿孔法将重组质粒导入Hela细胞，以原位杂交法检测抗CD3 scFv的表达，以3H TdR掺入法检测其在体外对T细胞的活化作用，以MTT比色法观察转染的。Hela细胞与T细胞混合培养后，诱发的细胞毒性T细胞的杀伤作用。结果：成功地构建了抗CD3 scFv的真核表达载体，并在Hela细胞中获得表达。所分泌的抗CD3 scFv在抗CD28mAb存在的条件下，能够刺激T细胞活化。将转染的Hela细胞与T细胞混合培养能够诱发CTL的杀伤作用。结论：真核表达的抗CD3 scFv具有刺激T细胞活化的活性，可用于构建对肿瘤进行免疫治疗的双功能分子。     

膜结合性补体调节蛋白及其在肿瘤免疫治疗中的控制策略

通过抗体进行的肿瘤免疫治疗,其机制大多是通过活化补体直接引起肿瘤细胞溶解(CDC)或加强抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用.而许多研究证实,肿瘤细胞表面表达的膜结合性补体调节蛋白(mCRPs)能抑制补体系统的激活,而保护肿瘤细胞免遭CDC的杀伤,因此许多抗体介导的肿瘤免疫治疗的效果往往不尽人意.相关研究表明,通过阻断mCRPs或抑制mCRPs表达能使肿瘤的杀伤效果有明显的提高,因而控制mCRPs在未来的免疫治疗中很有潜力,本文简述了相关研究进展.     

外用鹿茸膏剂抗小鼠皮肤衰老的实验研究

目的 检验外用鹿茸膏剂抗皮肤衰老的效果。方法 连续30 d给小鼠皮下注射D-半乳糖,建立皮肤衰老模型;三个实验组每天涂抹浓度分别为5%、10%、15%的鹿茸膏剂,空白组涂抹凡士林,连续涂抹21 d后,观察各组小鼠的皮肤表观特征,并测定各组皮肤含水率、羟脯氨酸(HYP)含量、透明质酸(HA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活力。结果 三个鹿茸膏剂实验组小鼠皮肤的松弛、皱褶状况都有所改善,以15%组效果最佳。皮肤含水率模型组为(57.72±0.89)%,5%鹿茸膏剂实验组为(66.22±1.21)%,和模型组相比,差异有统计学意义(P＜0.05);10%、15%鹿茸膏剂实验组皮肤含水率为(68.82±0.64)%、(70.70±1.05)%,和模型组相比,差异有统计学意义(P＜0.01)。HYP含量模型组为(3.604±0.20)μg/mg,10%鹿茸膏剂实验组为(3.956±0.12)μg/mg,和模型组相比,差异有统计学意义(P＜0.05);15%鹿茸膏剂实验组为(4.080±0.12)μg/mg,和模型组相比,差异有统计学意义(P＜0.01)。HA含量模型组为(6.163±0.54)μg/mL,10%鹿茸膏剂实验组为(8.514±0.63)μg/mL,和模型组相比,差异有统计学意义(P＜0.05);15%鹿茸膏剂实验组为(9.024±0.24)μg/mL,和模型组相比,差异有统计学意义(P＜0.01)。SOD活力模型组为(304.84±12.026)U/mg,5%鹿茸膏剂实验组为(338.36±7.848)U/mg,和模型组相比,差异有统计学意义(P＜0.05);10%、15%鹿茸膏剂实验组为(353.12±5.964)U/mg、(357.20±10.634)U/mg,和模型组相比,差异有统计学意义(P＜0.01)。结论 外用10%和15%鹿茸膏剂有抗皮肤衰老作用。     

人B7.1(CD80)的真核表达及抗白血病作用

目的:构建人B7.1(CD80)重组真核表达载体,并在HL60细胞上表达,探讨其在急性白血病免疫治疗及免疫保护中的重要作用。方法:①应用分子克隆方法,采用PCR法扩增人B7.1基因片段,ApaⅠ、SalⅠ分别双酶切PCR产物和表达载体pHook,纯化后的酶切产物由T4 DNA连接酶连接,转化大肠杆菌DH5α,应用ApaⅠ、SalⅠ双酶切和DNA序列分析技术进一步鉴定阳性克隆。②应用脂质体转化技术将B7.1转化HL60细胞,并以FACS检测其表达。③将B7.1~+细胞免疫小鼠,通过成瘤时间及存活时间等指标观察其免疫治疗和免疫保护作用。结果:①PCR法扩增出一大小约620 bp的基因片段;共筛选出6个阳性克隆,均可ApaⅠ、SalⅠ双酶切出大小约620 bp的基因片段,与人B7.1基因片段大小相符,提示重组载体构建成功。进一步DNA序列分析证明人B7.1基因序列和读码框架正确,与文献报道人B7.1cDNA序列一致,无基因突变。②应用FACS在转化HL60上检测到B7.1的高效表达。③B7.1~+ HL60细胞能明显抑制肿瘤生长,延长白血病鼠存活时间,且其免疫预防时成瘤时间较野生型HL60(B7.1-)显著延迟,小鼠存活时间明显延长。结论:应用分子克隆方法可成功构建人B7.1(CD80)重组真核表达载体,并稳定、高效表达于B7.1之急性髓性白血病(AML)细胞系HL60胞膜上,这种共刺激分子瘤苗具有显著     

幽门螺杆菌与食管相关疾病关系研究进展

幽门螺旋杆菌（Helicobacter pylori,Hp）是一种定植在人胃黏膜上的微需氧致病茵,目前已经证实：Hp与人类的慢性胃炎、消化性溃疡密切相关,同时又是引起胃癌和胃黏膜相关淋巴瘤的危险因素。随着对Hp致病机制研究的深入,近年来Hp与食管相关疾病如胃食管反流病（gastro esophageal reflux disease,GERD）,Barrett食管以及食管癌之间的关系也受到越来越多的关注,研究提示Hp在GERD及Barrett食管的发生中可能起保护作用,但研究结论尚存在争议,同时目前初步研究提示Hp与食管癌的发生有一定的关系,可能是其危险因素之一。     

大鼠自发性乳腺癌生物学特性的研究

目的:观察大鼠自发性乳腺癌在不同接种途径下、不同性别、不同品系大鼠体内的生长与转移的生物学特性。方法:制备瘤细胞悬液,首先以不同瘤细胞数在大鼠右腋皮下接种,通过成瘤率及存活天数确定最佳细胞数;以2×106个瘤细胞从右腋皮下、腹腔、后肢肌肉和尾静脉分别接种CHN大鼠,以2×106个瘤细胞分别从右腋皮下接种雌性和雄性CHN大鼠,以2×106个瘤细胞从右腋皮下分别接种不同品系大鼠,分别观察大鼠成瘤率及存活天数;分别取肿瘤、浸润与转移肿瘤组织,做组织切片,HE染色后观察。结果:大鼠自发性乳腺癌在动物体内接种不同瘤细胞数与不同途径接种肿瘤成活率均为100%,肿瘤具有浸润性生长与转移特性,但带瘤宿主存活时间有非常显著性差异(P<0.001);不同性别大鼠移植瘤细胞后宿主存活时间、瘤重和瘤系数在雌雄大鼠之间无显著性差异(P>0.05),提示大鼠自发性乳腺癌属于非激素依赖性瘤株;不同品系大鼠接种瘤细胞悬液后肿瘤仅在CHN和CHN×LOU/M F1代大鼠体内生长,表明大鼠自发性乳腺癌是CHN大鼠的一种同基因型瘤株。结论:大鼠自发性乳腺癌无论用哪种方法在CHN大鼠体内接种成活率均为100%,都具有浸润性生长与转移特性,是CHN大鼠的一种同基因型和非激素依赖性新瘤株,对研究乳腺癌具有重要意义。     

纺织品传感器于电子电路设计及应用

我们的核心技术是用布料当电路版及传感器,同时藉由钢丝线当传输线来量测人体生理资讯,其可用来量测呼吸、姿势、体温、心电图、汗湿度、跌倒、心跳等,民扬公司已开发出穿戴式的心电图衣、呼吸带、和可侦测身体活动的服饰,有别于现有产品,使用舒适的感应器贴片、不用穿的非常紧、及可以随意走动,还可无线传送数位讯号至远端平台以长期监控其生理状况