试剂研发作为临床生化检验教学的新切入点

在本校2005、2006、2007年级检验本科班学生临床生化检验教学中,以试剂研发为新的切入点,教学中强调试剂研发的重要性、从理论与实践两方面对学生进行研发意识和技能培养。学生建立了试剂研发的意识,初步具备试剂研发的能力。教学中以试剂研发为新切入点,为培养学生科研素质打下坚实基础,提高了临床生化检验教学质量。     

血根碱致钉螺肝脏差异表达基因的鉴定

目的 鉴定血根碱致钉螺肝脏差异表达的基因。方法 浓度梯度法测定血根碱浸杀钉螺的半数致死浓度（LC50）;以80%LC50血根碱浸泡钉螺,分离血根碱组和清水组活钉螺肝脏;提取mRNA,逆转录为cDNA,进行抑制消减杂交;巢式PCR扩增差异cDNA,克隆至pMD-18T载体,PCR和测序鉴定,NCBI中blastx比对分析表达序列标签（expressed sequence tag,EST）。结果 血根碱浸杀钉螺LC50为7.5 mg/L。获得的EST序列大小在150⁴50 bp,经blastx比对,表达上调的基因有α-4（VI）胶原链、α-5（VI）胶原链、40 S核糖体蛋白S19、假定蛋白（WP₀09787 197.1）、kelch样蛋白、颗粒体样蛋白;表达下调的基因有β-微管蛋白、α-淀粉酶1、大亚基核糖体蛋白L23e、几丁质酶-1、捷蛋白-3、假定蛋白（EKC34 262.1）、线粒体乙醛脱氢酶、肽聚糖识别蛋白、真核转录延长因子1A、铁蛋白、去整合素金属蛋白酶、溶菌酶1、1,3（4）-β-葡聚糖酶1、血蓝蛋白α-4D亚基,这些基因编码蛋白的功能涉及物质转运、蛋白合成、增殖诱导、营养、抗氧化、抗炎、呼吸、信号转导等。结论 血根碱处理导致钉螺肝脏基因表达发生改变。     

弓形虫主要表面抗原1截短型片段的纯化与鉴定

目的:表达和纯化弓形虫SAG1,分析其免疫原性。方法:将诱导表达SAG1后菌体裂解,离心,分别收集其上清和沉淀;亲和层析分离纯化裂解上清液中的SAG1,SDS-PAGE和Western blot鉴定SAG1纯度和免疫原性。结果:诱导后重组体pGEX-SAG1/Bl21超声裂解上清液、8M脲溶解沉淀的上清中都含有融合蛋白GST-SAG1,从超声裂解上清液中纯化获得融合蛋白GST-SAG1。结论:亲和层析获得具有免疫原性的SAG1。     

《分子诊断学》课程教学探讨

正分子诊断学是以分子生物学理论为基础,利用分子生物学的技术和方法,研究人体内源性或外源性生物大分子和大分子体系的存在、结构或表达调控的变化,为疾病的预防、诊断、治疗和判断预后提供信息和决策依据~([1])。分子诊断学对疾病的诊断、预防和治疗正发挥着日益重要的作用,已成为推动检验医学发展的主要力量,是21世纪检验医学的主题~([2])。如何发挥分子诊断学在检验医学中的优势,是检验医学工作者面临的     

钉螺肝脏蛋蛋白质双向电泳方法的建立

目的建立针对钉螺肝脏蛋白质组阵列分离的双向电泳方法。方法分析裂解液、细胞破碎、沉淀方法对钉螺肝脏蛋白质提取的影响,并优化双向电泳参数,建立钉螺肝脏蛋白质的提取方法和双向电泳条件。结果LysisⅢ（8mol/L尿素,4%CHAPS,65 mmol/L DTT,40 mmol/L Tris,0.5%IPG Buffer）提取钉螺肝脏总蛋白,2-D Clean-up试剂盒处理纯化总蛋白,等电聚焦参数为8000 v,50000 vh,成功获得了分辨率高、重复性好的双向电泳图谱,凝胶经EMBL银染,可分辨蛋白质斑点数约430个。结论建立了钉螺肝脏蛋白质双向电泳技术,为开展钉螺蛋白质组学研究奠定了良好基础。     

以方法学评价为切入点提高临床生化检验教学质量

在本校2001级检验本科班学生临床生化检验教学中,方法学评价教学贯穿始终。学生建立了正确选择检测方法的意识,初步培养了正确评价方法的能力,为培养学生科研素质打下坚实基础。     

以提高学习兴趣为突破口提高生物化学教学质量

生物化学是医学的重要基础课,其理论及技术已经辐射渗透到基础医学及临床医学的各个学科,给诊断和治疗带来了革命性的变革,同时也为医学的发展提供了新的概念、思路、技术和方法[1],因此受重视程度不断提高.然而,由于生化课的内容抽象、繁杂、深奥、枯燥,因而成了学生普遍公认的重点课和难点课[2].为提高教学质量,本教研室采用故事引入法、游戏学习法、竞争学习法,并与实际生活联系等手段,大力提高学生学习兴趣,收到了较好的效果.现报道如下.     

血水草生物碱致钉螺肝脏损伤机制研究

目的 分析血水草生物碱（ECA）对钉螺肝脏蛋白质和糖原水平、酶活性变化及脂质过氧化的影响,探讨血水草杀灭钉螺机制。方法 10 mg/L ECA药液浸泡钉螺36 h,解剖活钉螺,分离肝脏,测定总蛋白质和糖原、丙二醛（MDA）水平及丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、酸性磷酸酶（ACP）、碱性磷酸酶（AKP）和乳酸脱氢酶（LDH）的活性。结果 ECA浸泡后钉螺肝脏总蛋白质和糖原的量均显著降低,AKP、ALT、AST、LDH酶活性明显下降,与清水对照组相比,均存在显著差异（P＜0.05、0.01）;而ACP及MDA水平差异不显著。结论 ECA抑制钉螺肝脏AKP、ALT、AST、LDH酶活性,影响钉螺肝脏糖及蛋白质代谢,破坏代谢平衡,导致肝功能紊乱,从而引起钉螺死亡。     

血水草血根碱对钉螺肝脏损伤的研究

目的分析血水草血根碱（SAN）对钉螺肝脏糖原、重要酶活性及脂质过氧化的影响,探讨SAN对钉螺肝脏损伤的机理。方法自血水草粉末中分离SAN,配制5 mg/L水溶液,每500 ml溶液投放50只钉螺,25℃浸泡36 h,解剖活螺,分离肝脏,另设清水对照组。测定钉螺肝脏糖原和丙二醛（MDA）含量以及丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、酸性磷酸酶（ACP）、碱性磷酸酶（AKP）、超氧化物岐化酶（SOD）、过氧化物酶（POD）的活性,采用独立样本t检验对统计结果进行分析。结果 SAN组和清水对照组钉螺的肝脏糖原含量分别为（12.151±0.204）mg/g和（18.113±0.163）mg/g,差异有统计学意义（P〈0.05）;MDA水平分别为（5.298±0.441）nmol/mgprot和（4.351±0.197）nmol/mgprot,差异无统计学意义（P〉0.05）;SAN组钉螺的肝脏ALT、AST、ACP、AKP、SOD分别为（2.760±0.076）U/mg-prot、（68.723±2.295）U/mgprot、（407.949±19.868）U/gprot、（191.287±0.771）U/gprot、（48.452±0.193）U/mgprot,清水对照组钉螺分别为（1.104±0.000）U/mgprot、（49.448±1.626）U/mgprot、（344.475±30.186）U/gprot、（121.905±3.127）U/gprot、（38.814±2.765）U/mgprot,两组差异均具有统计学意义（P均〈0.05）,SAN组和清水对照组钉螺肝脏POD活性分别为（22.170±0.018）U/mgprot、（21.747±0.264）U/mgprot,两组POD差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 SAN可引起钉螺肝脏糖原含量及一些重要酶活性的改变而导致钉螺肝功能损伤。     

钉螺软体组织蛋白水解酶的初步分析

目的分析钉螺软体组织中的蛋白水解酶。方法以明胶作底物,利用明胶-SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)分离钉螺软体组织蛋白质,于不同缓冲液和酶抑制剂中进行孵育,分析和鉴定其中的蛋白水解酶。结果钉螺软体组织中存在降解明胶的蛋白水解酶,其最适pH值为碱性。金属蛋白酶抑制剂乙二胺四乙酸二钠(EDTA)可抑制其活性。电泳分离获得有活性的酶蛋白。结论钉螺软体组织中存在被EDTA抑制的蛋白水解酶。