TAG-1对U251细胞活力的影响及相关基因调节机制研究

目的 探讨TAG-1对U251细胞的生长活力和粉样前体蛋白胞内段(AICD)、p53和表皮生长因子受体(EGFR)基因表达变化的影响.方法 以MTT法检测不同浓度TAG-1(0、5、10、20μg/mL)对U251细胞活力影响;免疫荧光细胞化学法观察U251细胞β淀粉样前体蛋白(APP)的表达;TUNEL法检测TAG-1对U251细胞凋亡形态学变化的影响;Real-time PCR检测TAG-1对U251细胞AICD、p53和EGFR基因表达的调控.结果 TAG-1没有抑制U251细胞的生长,相反表现出一定的促生长效应;APP广泛表达于U251细胞膜;在TAG-1浓度为10μg/mL时,U251细胞形态学检测没有发现明显的凋亡细胞,但AICD、p53和EGFR基因表达增加.结论 TAG-1在胶质瘤的增殖中发挥重要作用,但未发现其能通过TAG-1/APP/ AICD/p53或TAG-1/APP/AICD/EGFR信号途径促进U251细胞凋亡.     

人参皂苷Rg3对体外培养小鼠神经干细胞增殖的影响

目的 研究人参皂苷Rg3对体外培养小鼠神经干细胞 (NSCs) 增殖的影响.方法 分离培养胎鼠NSCs, 使用神经球悬浮培养法传代, 特异性抗体Nestin和Sox2鉴定NSCs.采用Brd U标记法和CCK-8法检测不同浓度Rg3 (20 n M、50 n M、250 n M和500 n M) 对NSCs增殖的影响.结果 传代2次后的神经球几乎全为Nestin/Sox2免疫荧光双阳性细胞, 表明其为纯度较高的NSCs.Brd U标记法表明与对照组、20 n M组、250 n M组和500 n M组相比, 50 n MRg3组Brd U阳性细胞相对比率最高, 差异有统计学意义 (P<0.01) , 但其他各组之间差异无统计学意义 (P>0.05) .CCK-8法检测, 结果显示50 n M Rg3在450 nm处吸光值最高, 且与对照组 (P<0.01) 、20 n M组 (P<0.05) 和500 n M组相比, 差异有统计学意义 (P<0.01) , 但其他各组之间无统计学差异 (P>0.05) .结论 人参皂苷Rg3能促进体外培养小鼠NSCs的增殖, 且其最佳浓度是50 n M.     

生发阳气吃点葱

春季万物苏醒,阳气生发,而人体也应与自然界统一,顺应季节的变化,生发阳气。春季需要多吃一些生发阳气的食物,而葱就是这种食物。葱在日常饮食中多作为调料,用于荤、腥、膻以及其他的菜肴、汤羹中,可增加香味;而生食佐餐可增进食欲,健胃提神。中医认为,葱味辛,性温,具有散寒解表、活血通络、杀虫止痒、祛痰利尿等多种作用。辛     

不同胎龄小鼠脑组织中神经干细胞所占比例的研究

目的详细了解并比较不同胎龄小鼠全脑和大脑皮层组织中神经干细胞(neural stem cells,NSCs)所占比例,为后期优化分离培养NSCs提供直接量化数据。方法分离不同胎龄小鼠全脑(胎龄12.5、14、16和18d)和大脑皮层(胎龄14、16和18 d)组织,消化成单细胞悬液,贴壁培养3~4 h,细胞免疫荧光标记NSCs特异性标记物Nestin,统计分析各组中NSCs所占比例。另外,通过实时荧光定量PCR技术检测Nestin mRNA在不同胎龄(12.5、14、16和18 d)小鼠大脑皮层中的表达水平。结果细胞免疫荧光结果显示,分离培养的不同胎龄小鼠全脑和大脑皮层组织中均有Nestin阳性细胞。在分离培养的小鼠全脑组织中胎龄12.5 d组NSCs所占比例最高,为53.42%±1.57%;胎龄18 d组NSCs所占比例最低,为25.96%±1.31%,而胎龄14 d组和16 d组位于二者之间。在分离培养的不同胎龄小鼠大脑皮层组织中,胎龄14 d组NSCs所占比例最高,为33.65%±0.29%;胎龄18d组比例最低,为25.29%±0.28%,胎龄16 d组位于二者之间(26.82%±0.30%)。实时荧光定量PCR结果显示,当把胎龄12.5 d组的小鼠大脑皮层组织中Nestin mRNA表达水平设定为1,胎龄14 d组的小鼠大脑皮层组织中Nestin mRNA的相对表达量为0.83±0.04,胎龄16 d组为0.77±0.05,胎龄18 d组为0.44±0.05。因此,随着小鼠胎龄增加,小鼠大脑皮层中的Nestin mRNA的表达水平逐渐下降。结论在小鼠大脑发育过程中,随着胎龄增加,分离培养的小鼠全脑和大脑皮层组织中神经干细胞比例逐渐降低。     

人Tau基因多表位肽段原核表达载体的构建与表达

摘要：目的构建含人Tau多表位肽段基因的原核表达载体,在大肠杆菌中诱导表达并纯化目的蛋白,检测Tau多表位DNA疫苗
免疫小鼠后特异性抗体产生情况。方法以质粒pVAX1-Tau 为模板,用PCR 扩增人Tau 多表位肽段基因,插入表达载体
pGEX-4T-2中,构建原核表达质粒pGEX-4T-2-TauP1/P2。将鉴定后的阳性重组质粒转入E.coli BL21（DE3）中,经异丙基-β-D-
硫代吡喃半乳糖苷（IPTG）诱导表达,并采用GST法纯化、SDS-PAGE鉴定目的蛋白的表达。以TauP1/P2 DNA疫苗免疫小鼠获
取血清,Dot-blot检测TauP1/P2特异性抗体产生情况。结果PCR扩增出约300 bp的基因片段,克隆至表达载体后,经酶切和测
序验证正确;获得了纯化的目的蛋白,并证实了GST-TauP1/P2融合蛋白的表达。Dot-blot检测到特异性TauP1/P2抗体的产生。
结论成功构建和表达人Tau多表位肽段基因的目的蛋白GST-TauP1/P2,能够识别Tau多表位DNA疫苗免疫后小鼠产生的特
异性TauP1/P2抗体。
     

大鼠视觉皮层动态锰离子增强磁共振功能成像研究

目的 应用动态锰离子增强磁共振技术行大鼠视觉皮层功能成像,为神经系统功能的研究提供方法.方法 成年雄性Wistar大鼠6只,右颈外动脉插管后于连续的4个时段分别进行不同处理,第一时段(5 min)不给予药物,无视觉刺激;第二时段(10 min)经右颈外动脉注射甘露醇和氯化锰,无视觉刺激;第三时段(15 min)仅注射氯化锰,给予视觉刺激;第四时段(5 min)注射氯化锰与谷氨酸混合液,无视觉刺激.每一时段处理后立即进行大鼠头颅磁共振成像,应用SPM软件进行图像的配准和平滑处理,应用Matlab软件得出图像的配色图及等高线图;选取视觉皮层进行兴趣区(ROI)分析,观察不同处理后磁共振图像中脑内特异性增强区域并比较大鼠视觉皮层的信号强度.结果 磁共振图像分析显示第一、二时段处理后大鼠脑内未发现特异性增强区域,第三时段处理后大鼠右侧视觉皮层特异性增强,第四时段处理后大鼠右侧脑内多个核团特异性增强;ROI分析显示第三时段处理后的视觉皮层信号强度(1.897±0.172)明显强于第二时段(1.549±0.163),差异有统计学意义(P<0.05).结论 动态锰离子增强磁共振成像技术能分析大鼠视觉皮层功能活动,可做为研究神经系统功能的新方法.