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目的探讨多肽N-乙酰氨基半乳糖转移酶-2(ppGalNAc-T2)对胶质瘤细胞侵袭转移的作用。方法将ppGalNAc-T2的真核表达正义载体、RNA干扰载体通过脂质体稳定转入胶质瘤细胞U251;通过荧光显微镜观察及RT-PCR检测ppGalNAc-T2的表达来确定载体正确转入细胞;细胞分为以下5组:U251转染正义载体组与空载体组、U251转染干扰载体组与对照载体组、U251未转染组,通过RT-PCR方法检测各组细胞基质金属蛋白酶(MMP)-2、基质金属蛋白酶抑制剂(TIMP)-2mRNA表达的变化;通过划痕法检测各组细胞的迁移差异。结果荧光显微镜观察及RT-PCR检测结果表明,载体成功转入细胞;RT-PCR检测结果发现,随着ppGalNAc-T2的增高,MMP-2的表达降低,而TIMP-2的表达升高(P〈0.05);划痕结果显示,正义组细胞迁移能力随ppGalNAc-T2的上调而减弱(P〈0.05),干扰组划痕修复较快(P〈0.05),其他对照组相近(P〈0.05)。结论 ppGalNAc-T2的上调可抑制细胞的划痕修复,由此推测ppGalNAc-T2可能与胶质细胞的侵袭转移密切相关。 相似文献
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目的:研究反义caveolin-1对实质肿瘤细胞中β3-半乳糖基转移酶7(β3GalT7)表达的调节,以期阐明caveolin-1与β3GalT7的相关性。方法:运用脂质体介导转染人工合成的caveolin-1反义核苷酸(ASODN)至人类4种实质肿瘤细胞中,通过荧光显微镜、RT-PCR及蛋白质印迹检测β3GalT7表达的变化。结果:转染反义caveolin-1后的4种实质肿瘤细胞中β3GalT7均有明显的增强。结论:表明caveolin-1调节肿瘤细胞中β3GalT7的表达,且与β3GalT7的表达呈负相关。 相似文献
3.
目的:观察壳聚糖对白血病细胞(K562,SHI-1)的作用。方法:以不同浓度的壳聚糖处理白血病细胞K562后,运用RT-PCR方法检测实验组K562细胞中多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶-2(ppGalNAc-T2)mRNA表达差异。另用不同浓度的壳聚糖分别作用于白血病K562细胞和SHI-1细胞,MTT法检测壳聚糖对两种细胞的相对抑制率。结果:与阴性对照组比较,实验组K562细胞的ppGalNAc-T2表达降低,且随壳聚糖浓度升高,表达量进一步减少;MTT实验显示不同浓度的壳聚糖对K562细胞和SHI-1细胞均有抑制作用,并呈浓度依赖性。结论:壳聚糖对肿瘤细胞有一定的抑制作用,同时还可以减少ppGalNAc-T2在mRNA水平的表达。 相似文献
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目的 研究适用于啮齿类实验动物质量监测中嗜肺巴斯德杆菌快速可靠的检测方法。方法 对17株标准菌株及76株嗜肺巴斯德杆菌疑似分离菌株进行检测,分析比较文献中4种PCR检测方法的敏感度和特异度,选择最优PCR方法,并将其应用于22个厂家的312只实验动物(包括191只小鼠,57只大鼠,64只沙鼠)气管和肠内容物样本的检测,同时与国标中的细菌分离培养加生化鉴定方法检出率进行比对。结果 Dole qPCR和Benga mPCR能特异检出疑似嗜肺巴斯德杆菌的分离株中所有的Heyl型和Jawetz型; Benga mPCR和巴斯德菌科引物的Bootz PCR虽能检出疑似分离菌株中所有嗜肺巴斯德杆菌Heyl型和Jawetz型,却不能与巴斯德菌科其它细菌相区分; 高正琴等[8]报道的qPCR方法,虽然敏感度高,但特异度较差。因此选择了敏感度高、特异度强的Dole qPCR方法,应用于啮齿类实验动物呼吸道与肠内容物样本嗜肺巴斯德杆菌的筛查。对191只小鼠,57只大鼠以及64只沙鼠调查显示,小鼠气管和肠内容物中阳性率分别为25.7%和27.2%,大鼠分别为28.1%和29.8%,沙鼠分别为26.6%和21.9%; 小鼠、大鼠和沙鼠的PCR总阳性率(气管和/或肠内容物阳性)分别为39.3%,35.1%和34.4%,而传统分离培养方法总检出率仅为4.7%,15.8%和23.4%。结论 嗜肺巴斯德杆菌DoleqPCR方法的阳性检出率远高于传统培养方法,更适合于实验动物的快速质量监测。 相似文献
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目的探讨偏钒酸钠(NaVO3)对HL-60细胞增殖及凋亡的影响,初步判断该影响与ppGalNac-T2的相关性。方法用不同浓度NaVO3作用HL-60细胞后,采用MTT法观察HL-60细胞生长抑制情况,琼脂糖凝胶电泳检测DNA条带,Hoechst 33258染色后荧光显微镜观察细胞核的变化,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率,分子对接与分子动力学模拟初步判断钒对糖基转移酶ppGalNac-T2活性的影响。结果 MTT检测结果显示,低浓度的Na-VO3促进细胞增殖,高浓度的NaVO3抑制细胞的生长;高浓度NaVO3作用HL-60细胞24 h可见到DNA出现梯形条带,且细胞核呈现核浓缩现象;FCM测定不同浓度NaVO3(5×10-7、1×10-7、1×10-8、1×10-9、1×10-11mol/L)处理HL-60细胞24 h后细胞凋亡率分别是(69.1±2.3)%、(56.3±4.9)%、(39.6±6.5)%、(31.4±1.6)%、(12.2±3.4)%,明显高于HL-60细胞自然凋亡率(均P〈0.05);VO3可以与N-乙酰氨基半乳糖转酶2(ppGalNac-T2)的活性中心相关结构形成氢键,并影响ppGalNAc-T2催化相关柔性结构的构象变化,进而影响底物进入和离开酶的活性中心,从而抑制酶的催化功能。结论 NaVO3可以诱导HL-60细胞凋亡,该作用可能与ppGalNAc-T2活性改变相关。 相似文献
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