EphB3通过PI3K/AKT信号通路对胶质瘤细胞侵袭及迁移的影响

目的 探究促红细胞生成素产生的肝细胞受体B3(EphB3)通过PI3K/AKT信号通路对胶质瘤的侵袭、迁移的作用机制。方法 通过EphB3慢病毒过表达及EphB3-siRNA感染U87MG、U251细胞系,采用细胞划痕实验、细胞侵袭(Transwell)实验检测细胞的侵袭、迁移能力,采用蛋白印迹法(Western Blot)检测EphB3过表达及siRNA干扰后磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)的蛋白表达,采用细胞多重免疫荧光检测EphB3的过表达及敲低检测EphB3、p-PI3K、p-AKT共表达情况;收集Ⅰ～Ⅳ级胶质瘤组织样本40例,采用免疫组化检测EphB3的表达,组织多重免疫荧光检测EphB3及p-PI3K、p-AKT的共表达。结果 U87MG、U251细胞系过表达EphB3后细胞侵袭、迁移能力减弱(P<0.05),敲低EphB3后U87MG、U251细胞侵袭、迁移能力增强(P<0.05);EphB3过表达后p-PI3K、p-AKT表达下降(P<0.05),EphB3敲...     

乳腺癌微环境中CD163标记M2型TAM和CD31标记MVD与临床病理特征的关系

目的 探讨乳腺浸润性导管癌肿瘤微环境CD163标记M2型肿瘤相关巨噬细胞(TAM)和CD31标记微血管密度(MVD)与患者临床病理特征的关系.方法 选取乳腺浸润性导管癌138例作为癌组织组,癌旁正常组织35例为癌旁正常组织组,采用免疫组化EnVision二步法检测两组标本中CD163标记M2型TAM和CD31标记MVD...     

乳腺癌中乙酰化转移酶P300和H3K56乙酰化蛋白表达与新辅助化疗及临床病理特征的相关性

目的探讨乳腺癌中乙酰化转移酶P300和H3K56乙酰化(H3K56ac)蛋白表达与新辅助化疗及临床病理特征的相关性。方法应用免疫组化En Vision法检测57例乳腺癌组织化疗前、后及30例乳腺纤维腺病组织中P300和H3K56ac的表达。结果乳腺纤维腺病中P300和H3K56ac高表达率均高于化疗前乳腺癌组织(P0.05)。化疗前P300表达与分子分型和肿瘤大小差异有显著性(P0.05),HER-2阳性乳腺癌中P300高表达率较高(P0.05),P300低表达时肿瘤直径较大(P0.05)。化疗前P300表达与5年生存率差异有显著性,P300低表达提示预后较差(P0.05)。化疗前后H3K56ac表达与乳腺癌临床病理特征差异无显著性(P0.05);化疗后H3K56ac和P300高表达率显著高于化疗前(P0.05);化疗前后两者蛋白表达均无明显相关性(P0.05)。结论化疗前P300低表达时乳腺癌预后较差,可作为评估预后的风险因素。     

五味子甲素协同吉西他滨抑制肝癌细胞HepG2增殖

目的探究五味子甲素(deoxyschizandrin)联合吉西他滨(gemcitabin,GEM)对肝癌细胞HepG2增殖的影响及其可能的作用机制。方法CCK8法和克隆平板实验检测五味子甲素单药、GEM单药及联合用药对肝癌细胞HepG2增殖能力的影响;流式细胞术检测单药组及联合用药组中HepG2细胞的凋亡比例;Western blot法检测各组细胞中BCL2、BAX、pro-caspase3、cleaved-caspase3、pro-caspase9、cleaved-caspase9、β-catenin和TCF-4的表达。结果五味子甲素、GEM及联合用药对细胞HepG2的增殖均具有抑制作用,促进其凋亡,且联合用药组对HepG2细胞的作用明显强于单药组(P<0.05);Western blot结果表明,与对照组相比,五味子甲素、GEM和联合用药对pro-caspase3、pro-caspase9表达无明显影响,显著减少BCL2、β-catenin及TCF-4蛋白的表达(P<0.05),上调BAX、cleaved-caspase3、cleaved-caspase9蛋白的表达(P<0.05)。其中,联合用药比单药更为显著(P<0.05)。结论五味子甲素协同GEM抑制肝癌细胞HepG2中β-catenin/TCF-4通路,进而减少细胞增殖,诱导其凋亡。     

小檗碱联合阿霉素对三阴性乳腺癌MDA-MB-231/ADR细胞株增殖迁移的影响及机制

目的 探讨小檗碱(BBR)联合阿霉素(ADR)对三阴性乳腺癌MDA-MB-231阿霉素耐药细胞株(MDA-MB-231/ADR细胞株)增殖迁移的影响及机制.方法 对数生长期MDA-MB-231/ADR细胞株分为对照组(L-15培养基)、ADR组(ADR终浓度为0.5、1、1.5、2、2.5 mg/L)、BBR组(BBR...     

一步核酸扩增和快速直接免疫组化在乳腺癌前哨淋巴结术中的诊断价值

目的:探讨一步核酸扩增(one-step nucleic acid amplification, OSNA)检测技术及快速直接免疫组织化学(rapid direct immunohistochemistry, RDIHC)染色技术在乳腺癌前哨淋巴结(sentinel lymph node, SLN)术中的诊断价值。方法:应用多聚辣根过氧化物酶直接标记的抗体CK和CK19对乳腺癌前哨淋巴结冷冻切片进行RDIHC染色,OSNA检测淋巴结CK19 mRNA表达量,以术后石蜡诊断为金标准,对常规冷冻切片(frozen section, FS)、OSNA及联合RDIHC的冷冻切片(FS+RDIHC)进行评价及比较。结果:67例206枚淋巴结的结果分析,FS+RDIHC准确率(100%)显著高于FS(97.09%,P<0.05)。67例的整体诊断中FS与FS+RDIHC在准确率、特异度、灵敏度、假阴性率以及延迟诊断率无显著差异。对同时进行FS、RDIHC以及OSNA检测的结果分析,OSNA准确率(95.45%)与FS准确率(94.32%)显著低于FS+RDIHC(100%,P<0.05...     

小檗碱增加乳腺癌细胞对阿霉素药物敏感作用的实验研究

目的:观察小檗碱联合阿霉素对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞株增殖的影响及潜在机制。方法:培养三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞株;CCK-8检测不同浓度阿霉素和联用小檗碱后细胞的存活率变化;Western blot检测细胞内p300、hSIRT-2、H3K56ac蛋白表达情况;细胞划痕实验、侵袭小室法检测药物对MDA-MB-231细胞迁移和侵袭能力的影响。结果:阿霉素对细胞增殖的抑制作用呈浓度依赖性,相同浓度阿霉素联合终浓度80 μmol/L盐酸小檗碱对细胞的增殖抑制率均明显高于单独使用阿霉素（P＜0.05）。p300、hSIRT-2、H3K56ac三种蛋白在对照组及加药组中均有表达,hSIRT-2蛋白在加药后含量降低,p300和H3K56ac蛋白的含量仅在含小檗碱组的细胞中增多,差异有统计学意义（P＜0.05）。细胞侵袭和迁移实验显示小檗碱可以有效增强阿霉素对乳腺癌MDA-MB-231细胞三维迁移能力的抑制作用。结论:小檗碱可协同阿霉素抑制MDA-MB-231细胞增殖,共同发挥抗肿瘤效果,作用机制可能与p300、hSIRT-2、H3K56ac蛋白有关。     

乳腺癌和导管增生病变与1p染色体不稳定的关系

目的检测乳腺普通型导管增生(usual dutal hyperplasia,UDH)、乳腺不典型增生(atypical dutal hyperplasia,ADH)、乳腺导管原位癌(dutal carcinoma in situ,DCIS)及乳腺浸润性导管癌(invasive dutal carcinoma,IDC)中染色体1p微卫星杂合性缺失(loss of heterozygosity,LOH)/微卫星不稳定(microsatellite instability,MSI)的改变规律,探讨乳腺导管增生病变进展为IDC的遗传学改变特征。方法应用PCR法检测20例UDH、7例ADH、25例DCIS、25例IDC石蜡包埋组织,8%尿素变性聚丙烯酰胺凝胶电泳后银染检测染色体1p区间微卫星位点D1S193、D1S463、D1S2881、D1S2885、D1S234、D1S252的LOH/MSI。结果染色体1p的每个位点均发生LOH/MSI,其发生的频率UDH为55.0%、ADH为42.9%、DCIS为64.0%、IDC为72.0%,各组间差异无显著性(P0.05);微卫星位点D1S193、D1S2881、D1S2885、D1S252、D1S234在各组中LOH/MSI的频率差异均无显著性(P0.05)。D1S463的频率在UDH组为5.0%、ADH组为0、DCIS组为45.0%、IDC组为40.0%,其中UDH组与ADH组明显低于DCIS组、IDC组(P0.008)。结论 1p染色体遗传学不稳定是乳腺癌发生的早期事件,D1S463位点的改变可能在乳腺导管增生性病变进展为乳腺癌中起关键作用。     

芥子碱硫氰酸盐增强HepG2细胞对吉西他滨敏感性的作用

目的探讨芥子碱硫氰酸盐增强人肝癌细胞HepG2对吉西他滨敏感性的作用及分子机制。方法应用计算机分子对接技术分析芥子碱硫氰酸盐结合多耐药性相关蛋白ABCB1和ABCG2的能力,罗丹明123实验检测芥子碱硫氰酸盐对HepG2细胞外排药物能力的影响,CCK-8、克隆形成实验、流式细胞术分别检测芥子碱硫氰酸盐联合吉西他滨对HepG2细胞增殖、克隆形成、凋亡的影响,Western blot实验检测芥子碱硫氰酸盐联合吉西他滨对HepG2细胞中ABCB1、ABCG2、活化半胱天冬酶-8(Cleave caspase-8)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、凋亡相关基因(Bax)表达的影响。结果芥子碱硫氰酸盐可稳定结合多耐药性相关蛋白ABCB1、ABCG2,降低HepG2细胞外排药物的能力,增强吉西他滨对HepG2细胞增殖和克隆形成的抑制作用(P<0.05)及吉西他滨诱导HepG2凋亡的能力(P<0.05),抑制ABCB1、ABCG2蛋白表达,增强吉西他滨诱导的Bcl-2表达减少及Cleave caspase8、Bax表达增加(P<0.05)。结论芥子碱硫氰酸盐能靶向抑制多耐药相关蛋白ABCB1和ABCG2,增强肝癌HepG2细胞对吉西他滨的敏感性。