5株猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF7全长基因的克隆及序列分析

目的通过测定5株猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF7基因序列,结合GenBank登录的国内外PRRSV分离株核苷酸序列,分析PRRSV核衣壳蛋白(N蛋白)的遗传变异情况。方法根据GenBank公布的PRRSV ATCCVR-2332株全基因组核苷酸序列,设计合成1对特异性引物,用RT-PCR方法扩增出3株PRRSV甘肃流行株(命名为GSZY、GSBY、GSZY株)、1株陕西流行株(命名为Shanxi株)和1株PRRSV江西分离株(命名为Jingxi株)的ORF7全长基因,克隆到pGEM-T Easy载体,然后分别测定插入的核苷酸序列。应用DNAStar序列分析软件对所测ORF7基因核苷酸序列及其推导的氨基酸序列与不同来源的13个PRRSV毒株进行同源性比较。结果5株PRRSV ORF7基因与以ATCC VR-2332为代表的早期引发PRRS的美洲型毒株的核苷酸序列间的同源性为91.9%~94.3%,与国内其他PRRSV分离株的同源性为98.7%~99.7%,与欧洲型代表株LV的同源性为57.7%~58.2%。结论美洲型PRRSV N蛋白氨基酸发生了变异,但国内毒株相对保守。     

合作小型猪T细胞受体α链的基因结构及其多样性

目的 探讨猪TCR基因分子结构的复杂性及其与人类的相似性.方法 以公开的猪TCRα链基因为参考序列设计两对特异性引物,用RT-PCR法从合作小型猪外周血、淋巴结和脾脏的淋巴细胞中克隆了93个猪TCRα基因(简称STA).结果 测序分析表明,克隆的猪TCRα链的基因均含有可变的信号肽区和V区、高变的J区和恒定的C区的基因片段,但基因间的核苷酸序列组成都不完全相同,且具有十分复杂的多态性和多样性,基因间的同源性在68.4%～98.7%,这与TCRα链的基本基因结构特征相一致.依据TCRα基因的同源性对其分子结构、遗传演化关系和归类分析发现,在其信号肽区、FR1区和CDR1区、FR2区 和CDR2区以及FR3区和CDR3区都存在一些变异集中点和变异热点区.用IMGT/V-QUEST分析方法可将合作小型猪TCRαV区(STAV)、J区(STAJ)基因片段与人类的进行比较分析,发现合作小型猪TCRα与人类的遗传演化关系较近,每个序列都能找到与人类对应的TRAV、TRAJ基因片段,甚至V区的相似性可达92%以上.结论 近交培育的合作小型猪在正常状态具有应对外界复杂微生物等环境的TCR遗传多样性分子基础,且适合作为人类免疫学及疾病研究的动物模型.