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1.
Ⅲ型中国株HCVE2/NS1基因的扩增及其哺乳动物细胞表达质粒克隆构建吴朝栋陶其敏杜绍财常锦红(北京医科大学人民医院肝病研究所,北京100044)E2/NS1基因被认为是丙型肝炎病毒(HCV)基因组的结构区基因,具有较大的变异性[1],而且在不同的... 相似文献
2.
HCV NS5 b套式PCR在酶切基因分型研究中的应用 总被引:3,自引:0,他引:3
目的:探讨HCV NS5 b区酶切分型技术在临床上的应用。方法:选用了HpaⅡ、Cfr10Ⅰ、AluⅠ、HhaⅠ、HaeⅢ、AvaⅡ、TaqⅠ、BstNⅠ、Sav3AⅠ、StuⅠ、BalⅠ、SmaⅠ等13种限制性内切酶,对已知23例1b型和17例2a型样品进行酶切分析和验证。结果:40例NS5b分型结果表明23例1b型中有AluⅠ特异切点,无1a的BalⅠ切点和2b的MboⅠ切点,17例2a型中无 相似文献
3.
4.
丙型肝炎病毒非编码区ABC程序酶切分型研究 总被引:17,自引:0,他引:17
目的为进一步了解中国是否存在HCV 3b基因及1a、2b和6a基因型感染,建立HCV 5′端非编码区(5′ NCR)不同基因型的基因库。方法分型方法按ABC程序进行,A应用BHH′(BsrBⅠ、HaeⅡ、HinfⅠ)复介内切酶消化5′NCR cDNA,可将不同基因型划分为5组:1a、1b,6a,2a、2b,3a,3b、4a。B应用BstU Ⅰ内切酶鉴别1a、1b。C应用Hae Ⅲ内切酶鉴别2a、2b、3b、4a及6a。电泳检测片段大小。结果(1)la、1b、2a、2b、3a、3b、4a、6a 8种基因型参比品的ABC分型结果表明,该8种基因型获得良好的分型效果。(2)93份HCV RNA阳性患者ABC分型结果表明,1b型感染率占66.67%,2a型18.28%,1b/2b型、3b型及2b型均为3.23%,2a/2b型和1b/2a型各为2.15%,1a型1.08%。结论结果表明应用HCV 5′-NCR ABC分型技术既保证了HCV RNA检测的灵敏度,又能完成1a-6a型中的8种基因型的鉴别。 相似文献
5.
脱氧尿嘧啶核苷酸掺入量对尿苷酶抗污染效果的影响 总被引:8,自引:0,他引:8
目的 了解脱氧尿嘧啶核苷酸(dUTP)掺入量与尿苷酶(UDG)抗污染的关系。方法 通过聚合酶链反应将50% dUTP和全dUTP掺入HCV cDNA,并观察UDG的抗污染效果。结果 0.05U、0.1U、0.2U的UDG37℃消化60min,PAGE检测可抗10^-1-10^-8 50% dU-DNA模板污染。0.1U UDG 37℃ 10min能抗10^-6,20min-30min可抗10^-5,PAGE虽阴性,但DNA-EIA杂交A值0.617,仍为阳性;40min可抗10^-3,未经杂交证实。37℃消化20min电泳检测可抗10^-1-10^-8全dU-DNA污染,DNA-EIA杂交A值在0.005-0.049均为阴性。结论 本文研究结果证实,用50% dU-DNA为模板,37℃ 10-20min时,抗污染效果较差,需增加抗污染时间。应用全dU-DNA为模板时,可获得良好的抗污染效果。 相似文献
6.
自从1983年本所建立斑点分子杂交方法检测血清乙肝病毒DNA以来,(以下简称斑试)有数篇报导应用~(32)P乙肝病毒DNA探针进行临床检测。说明斑试敏感、特异,并证实了乙肝病毒DNA与HBeAg、Dane颗粒、DNAP之间有良好的相关性,一些资料表明将~(32)P乙肝病毒DNA探针应用SouthernBlot法检测肝组织内乙肝病毒DNA状态。~3H乙肝病毒DNA探针过去多用于肝组织内病毒的原位杂交。我们应用缺刻转移标记制 相似文献
7.
目的了解克拉玛依地区HBV基因型分布状况,比较其与GenBank HBV序列同源性以及进化树分析。方法通过对S基因区B、C、D型GenBank序列分析,研究MboⅠ酶和EarⅠ酶在不同型中具有独特的切点,利用限制性片段多态性分析(PCR_RFLP)区分各型,将各个基因型与GenBank序列进行1∶1同源性比对的进化树分析。结果272份样品有241份成功分型。C型44.8%,B型36.9%,D型4.1%,B C型10.8%,B D型3.3%。少数民族C型40.4%,B型30.7%,D型9.6%。B、C、D型的同源性分别是97.8%~98.7%,96.9%~99.3%,97.5%~99.0%。进化树分析发现,克拉玛依地区的2例D型与新疆哈密地区D型进化距离最近。结论克拉玛依地区HBV基因型B、C、D均有,以B、C型占优势,未检测到A型,D型与新疆哈密地区D型有较近的亲缘关系。 相似文献
8.
丙型肝炎病毒基因分型的研究进展 总被引:7,自引:0,他引:7
丙型肝炎病毒(HCV)属于黄病毒科(Flaviviridae),其基因组为单股正链RNA,易变异,目前可分为6个基因型及不同亚型,根据2005年新达成的HCV基因型命名规则共识,以阿拉伯数字表示HCV基因型,以小写的英文字母表示基因的亚型(如1a、2b、3c等).由于1型和4型对于聚乙二醇干扰素联合利巴韦林标准化治疗较2型和3型更为耐药,因此HCV基因型检测在临床上具有重要意义.2004年中国《丙型肝炎防治指南》指出,HCV RNA基因分型有助于判定治疗的难易程度及制定抗病毒治疗的个体化方案. 相似文献
9.
目的 研究中国丙型肝炎病毒 (HCV)不同基因型感染分布情况 ,并对 3b序列进行分析。方法 采用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)技术扩增HCV5’NCR 1a、1b、2a、2b、3a、3b、4a、6a不同基因型的cDNA及 187份HCVRNA阳性样品中cDNA。A应用BHH (BsrBI、HaeⅡ、HinfI)复合内切酶消化 5′ NCRcDNA ,B应用BstUⅠ消化 ,C应用HaeⅢ消化 ,电泳检测片段大小。结果 187例HCVRNA阳性患者ABC分型结果表明 ,1b型感染率占 6 7 38% ,2a型 12 30 % ,1b/ 2a型为5 88% ,3b型 5 35 % ,2b型 3 2 1% ,2a/ 2b、1b/ 2b型各为 2 14 % ,1a型 1 0 7,6a型 0 5 4 %。 3份 3b基因型 5’ NCRA T克隆测序结果表明 ,3株 3b型之间同源性为 99 5 4 %~ 10 0 %。其中chiKQ5 0与GI5 14 395 3a株为 96 2 8%与GI6 76 8773b株同源性为 98 6 % ,与 1a型为 93 4 9% ,与 1b型为94 88% ,与 2a型为 91 6 3% ,与 2b型为 89 30 % ,与 4a型为 95 35 % ,与 6a型为 93 4 % ,结论 研究结果表明该项分型技术既保证了RT PCR检测灵敏度 ,又具有良好的分型效果。提示 :该分型方法不仅适合中国HCV基因型检测 ,对亚洲及欧洲和非洲HCV分型研究也具有一定的参考价值 相似文献
10.
目的 分析丙型肝炎病毒(HCV)抗体酶联免疫吸附试验(ELISA)诊断试剂盒(EIAgen HCV Ab Kit)的可信度.方法 应用考核试剂EIAgen HCV Ab Kit和参比试剂Ortho HCV 3.0 ELISA对2 881例样本进行检测,检测结果不一致时,应用重组免疫印迹试验(RIBA)确证.所用试剂为RIBA(R)HCV 3.0 SIA或核酸试验(NAT),并对结果进行综合分析.结果 2 881例样本中,阳性样本333例,阴性样本2 539例,9例不确定的样本被剔除.考核试剂检测真阳性333例,无假阴性结果,真阴性2 527例,假阳性12例.考核试剂灵敏度为100.00%,高于参比试剂;特异性为99.53%,略低于参比试剂.考核试剂对部分国内常见HCV基因型的灵敏度为100.00%,对于非HCV感染的病毒性肝炎、自身免疫性疾病及妊娠样本具有良好的特异性,特异性均为100.00%.溶血、脂血样本对考核试剂检测结果无影响.考核试剂阳性预测值为96.52%,阴性预测值为100.00%,符合率为99.58%.考核试剂S/CO≥5.9的样本301例,其中用参比试剂检测S/CO≥3.8占88.70%;考核试剂S/CO<5.9的样本32例,其中用参比试剂检测S/CO<3.8占87.50%.结论 试剂EIAgen HCV Ab Kit灵敏度100.00%,特异性较好,是一种优质的抗-HCVELISA试剂,尤其适用于阳性样本的筛选.采用EIAgen HCV Ab Kit试剂检测样本,当S/CO≥5.9时,样本的阳性预测值比较高. 相似文献