人乳头瘤病毒基因分型液态芯片的构建

目的:通过构建人乳头瘤病毒基因分型的液态芯片,建立高通量、灵敏和特异的HPV型别检测系统.方法:在LuminexTM平台上,采用国际公认的标准HPV质粒建立13种基因分型HPV芯片,选择引物及探针,将探针有效的偶联到微球上.结果:用LuminexTM平台建立了13型HPV芯片,对单一或两种标准质粒混合的样品均可准确分型.对分型检测的阳性标本进行基因测序,经美国NCBI数据库BLAST比对符合其检测型别.结论:利用LuminexTM平台构建了13种HPV 型别液相芯片的诊断体系,具有高通量、快速准确等特点,适用于大规模临床样本的HPV基因分型的诊断.     

人乳头瘤病毒基因分型液态芯片的应用研究

目的:采用人乳头瘤病毒(HPV)液态芯片对HPV感染患者进行基因分型,为早期诊断与治疗HPV感染和宫颈癌提供依据.方法:采用13种HPV基因分型液态芯片,对100例尖锐湿疣及100例宫颈糜烂患者进行HPV基因分型检测.以反向斑点印迹法作为对照检测.结果:100例尖锐湿疣患者中感染HPV单一型占78%(其中HPV6占42%,HPV11占36%);混合型占20%,其中高危型占6.3%.宫颈糜烂患者临床标本PCR阳性率为55%;对50例PCR阳性的患者进行HPV分型,其中9例可检出型别,高危型占67%.两种方法检测有较高的一致性,但液态芯片方法更灵敏.结论:HPV基因分型液态芯片可以快速、精确和高通量地对HPV感染标本进行HPV分型检测.     

人乳头瘤病毒基因分型液态芯片构建中的影响因素

目的 基于LuminexTM100技术平台,构建人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)基因分型液态芯片;探讨在构建HPV基因分型液态芯片过程中的影响因素.方法 在LuminexTM平台上,采用国际公认的标准HPV质粒构建13种基因分型HPV芯片,选择通用引物、探针,将探针有效的偶联到微球上.优化PCR体系和杂交体系,检测反应中PCR浓度、杂交反应时间、微球的时效等对构建芯片的影响,测定标准质粒变异系数(CV)值.结果 采用构建的HPV液态芯片,可准确区分HPV基因型.对349例标准样本检测结果 进行回代特别函数判别分析,检测准确率在96.7%以上.对构建芯片条件进行分析,杂交反应时间对杂交反应结果 在一定的杂交时间内有明显的影响;当PCR产物不同浓度范围时,PCR产物的浓度对荧光值有不同的影响,各型HPV探针CV范围为0.41%～14.69%.结论 杂交反应时间、样品PCR反应中的污染、微球的时效和探针的质量等均可以影响液态芯片系统的构建.构建的HPV基因分型液态芯片检测系统,检测性能稳定,具有可重复性,可应用于临床的大量样品的筛查.