原位末端标记技术的发展及在临床诊断研究中的应用

染色体结构和数量的变化与畸形和精神损害相关．因此染色体评价已经变成了产前诊断中不可缺少的部分。近15年来，荧光原位杂交技术（fluorescence in situ hybridization，FISH）已经被广泛应用于肿瘤研究中的基因扩增、易位重排及缺失等的检测，在肿瘤诊断和鉴别诊断、预后和治疗监控等方面都有重要意义。然而在某些情况下探针的获得比较困难．只有有限的探针可以通过商业的手段得到。在20世纪80年代出现了一种新的技术-原位末端标记技术（Primed in situ labeling，PRINS），因其具有高效性、特异性、敏感性、廉价等特点，有替代FISH的可能性。     

小鼠ERA蛋白在大肠杆菌中的表达及其纯化

目的:对小鼠ERA蛋白(mERA)进行表达、纯化,为真核生物ERA功能研究奠定基础.方法:构建MBP-mERA融合表达载体.在大肠杆菌中诱导表达融合的小鼠ERA蛋白,经直链淀粉亲和层析纯化,Western Blotting鉴定所表达纯化的蛋白.结果:表达的MBP-mERA融合蛋白占菌体总蛋白的18 %;纯化后的融合蛋白纯度为70 %;Western Blotting证实了mERA蛋白的表达.结论:利用基因重组技术,在大肠杆菌中高表达了mera基因,并对融合蛋白进行了初步纯化.     

组织微阵列在生物制药研发中的应用

组织芯片(tissue chips)又称组织微阵列(TMA)是近几年发展起来的新技术，它是将数十至上千个小组织整齐地排放在一张载玻片上而制成的组织切片。一个芯片蜡块的连续切片可同时用作免疫组化、荧光原位分子杂交、多彩FISH、mRNA原位分子杂交等方法的分析。使基因DNA、mRNA和蛋白质同时在不同分子水平表达和原位分析成为可能。它具有体积小、信息量大、快速平行、高效等诸多优点。本文结合组织芯片的特点和用途，对其在生物制药研发中的运用进行了初步探索。     

抗白色念珠菌抗体库构建中抗体基因的扩增和克隆

目的应用PCR方法从人血中克隆抗白色念珠菌抗体重链(VH)和轻链(VL,VK)可变区基因,重组到PGEM-llzf( )载体中,为构建抗白色念珠菌抗体库奠定基础。方法设计7条VHbank primer(5')和6条For primers(3')引物,9条VLbank primer(5')和2条For primers(3')引物,4条VKbank primer(5')和4条For primers(3')引物。从45名念珠菌病恢复期患者的外周血淋巴细胞中提取总RNA,用RT-PCR方法扩增人抗体重链(VH)和轻链(VL,VK)可变区基因。通过于linker链两端引入酶切位点,经T4DNA连接酶连接成完整的基因片段并重组到pgem-llzf( )载体中。结果经PCR方法扩增出了7条VH、9条VL和4条VK片断,经测序证实扩增片断全部为抗体可变区基因。经linker连接入pgem-llzf( )载体中,获得完整的重组基因。结论获得了全人源抗白色念珠菌单链抗体基因,为构建抗白色念珠菌抗体库奠定基础,也为研发有效治疗白色念珠菌和耐药性白色念珠菌的感染的药物提供了新的手段。     

组织微阵列在生物制药研发中的应用

组织芯片(tissue chips)又称组织微阵列(TMA)是近几年发展起来的新技术,它是将数十至上千个小组织整齐地排放在一张载玻片上而制成的组织切片.一个芯片蜡块的连续切片可同时用作免疫组化、荧光原位分子杂交、多彩FISH、mRNA原位分子杂交等方法的分析,使基因DNA、mRNA和蛋白质同时在不同分子水平表达和原位分析成为可能.它具有体积小、信息量大、快速平行、高效等诸多优点.本文结合组织芯片的特点和用途,对其在生物制药研发中的运用进行了初步探索.