应用简并引物RT—PCR扩增锌指结构域筛选新基因

目的：应用简并引物RT－PCR扩增并克隆TF－ⅢA型锌指蛋白基因表达序称标签（EST）,以最终获得新的锌指蛋白基因,方法：分别用TPA和Hemin诱导人红白血病（HEL）细胞,提取总RNA。根据TF－ⅢA型锌指蛋白保守序列设计简并引物,并以之进行RT－PCR扩增,然后将其克隆到pGEM-T easy载体中测序,应用DNAsis软件分析序列并通过GenBankblast进行序列比较。结果：克隆并测序了30个扩增片段,22个是锌指蛋白基因的EST,其中17个是新的锌指蛋白基因EST。结论：应用简并引物RT－PCR克隆一些具有保守所酸顺序结构域的蛋白基因EST是可行的。并具有简便,高效等优点,此外,还可有目的地克隆一些具有重要功能结构域的蛋白质基因。