视动性眼球震颤法在儿童视力检查中的应用分析

目的 探讨视动性眼球震颤(OKN)法在儿童视力检查中的可行性、准确性与稳定性。方法 回顾性对照研究。分别采用OKN法及标准对数视力表对256例6～13岁儿童进行视力检测及分析：(1) OKN法的总体可测率及不同年龄、性别的差异性;(2) 2种方法检测结果的相关性和一致性;(3) OKN法检测视力的可重复性。结果 不同年龄儿童的可测率为58.00%～87.50%,总体可测率为74.41%±9.16%;不同年龄、性别儿童间可测率差异无统计学意义;OKN法及标准对数视力表总体呈正相关,相关系数r值为0.871(P <0.01);OKN法与标准对数视力表检测结果总体差值为-0.11±0.14,2种方法检测结果的95%一致性界限为-0.38～0.16;OKN法2次检测结果总体差值为-0.02±0.25,2次检测结果的95%一致性界限为-0.51～0.47。结论 OKN法用于儿童视力检测具有一定的可行性、准确性以及良好的稳定性。     

人CD137L在肿瘤细胞的表达及其对肿瘤细胞分泌IL-8的影响

目的 :检测人CD137L在肿瘤细胞的表达及其功能。方法 :采用RT PCR、FACS方法检测人CD137L在肿瘤细胞的表达 ,用ELISA方法检测CD137L对肿瘤细胞分泌IL 8的影响。结果 :9种不同来源的人肿瘤细胞系均不同程度表达CD137L ,其中 ,BEL 74 0 2、HL 6 0、A2细胞系呈高水平表达 ;HepG2 .2 .15、L 78、HT 2 9细胞系中度表达 ;U937、H6、HLE细胞系低表达。胚胎细胞系ECV 30 4中度表达 ,而新分离的正常外周血单个核细胞不表达。CD137L的表达水平与肿瘤细胞系的来源无关 ,同一组织来源的细胞系 ,有的高表达 ,有的低表达。肿瘤细胞上的CD137L对肿瘤细胞本身IL 8的分泌可产生不同的影响 :可使HepG2 .2 .15分泌IL 8的水平增加 ,但对HLE、A2 ,只能微弱地增强肿瘤细胞释放IL 8。结论 :CD137L在肿瘤细胞上的表达是普遍现象 ,其表达可能与细胞的快速生长有关 ;肿瘤细胞的CD137L可增强某些细胞系分泌IL 8。     

肿瘤休眠机制与治疗靶点的发现

肿瘤休眠（tumor dormancy）是指肿瘤细胞在人体内长期存在而没有明显生长的一种状态。肿瘤休眠的现象非常普遍,休眠的肿瘤细胞在部分肿瘤患者甚至正常人体内均可检测到。休眠细胞的长期存在是肿瘤复发和远处转移的根源之一,对肿瘤休眠机制和标志物的深入研究将有助于设计靶向治疗。本文中我们主要就肿瘤休眠发生的机制、肿瘤休眠与肿瘤干细胞的关系进行综述。     

人CD137L在肿瘤细胞上的表达及其功能研究

为研究不同来源人肿瘤细胞系表面cD137L的表达和功能。采用RT-PCR、FACS方法检测人CD137L在肿瘤细胞的表达,运用ELISA的方法检测CD137L对T细胞释放IFN-γ的影响及对肿瘤细胞分泌IL-8的影响。结果:来源于肝癌、肺癌、结肠癌、白血病的9种人肿瘤细胞系均可不同程度表达CD137L,但CD137L的表达水平与肿瘤细胞系的来源无相关,同一组织来源的细胞系,有的高表达,有的低表达。胚胎细胞系ECV 304中度表达CD137L,而正常新分离的PBMC不表达。功能研究发现:L78肿瘤细胞上表达的CD137L在CD3单抗存在的情况下与T细胞上的CD137L结合,能提高T细胞释放IFN-γ的水平,其作用具有剂量依赖性,这种作用可被抗-CD137L阻断;而CD137L表达水平与L78相似的Hep G2.2.15细胞在CD3单抗存在下并不能增强T细胞IFN-γ的分泌,进一步分析发现Hep G2.2.15同时表达较高水平的CD137(大约为91.6％),而L78几乎不表达CD137。肿瘤细胞上CD137L与表达在CHO细胞表面的CD137相互作用对肿瘤细胞分泌IL-8的水平产生不同的影响,使Hep G2.2.15分泌IL-8的水平约增加2倍(从15 pg/ml增加到30 pg/ml),但对肿瘤细胞HLE、A2分泌IL-8没有明显影响。CD137L在肿瘤细胞上的表达是普遍现象,其表达可能与细胞的快速生长有关;某些肿瘤细胞系表达的CD137L是有功能的,一方     

人4-1BB-hIgG1Fc融合蛋白真核表达载体的构建

目的：构建人４１ＢＢ胞膜外区ｈＩｇＧ１Ｆｃ融合蛋白真核表达载体。方法：ＰＣＲ扩增人４１ＢＢ胞膜外区和ｈＩｇＧ１Ｆｃ基因片段，用ＨｉｎｄⅢ、ＰｓｔＩ酶切４１ＢＢ胞膜外区，ＰｓｔＩ　、ＥｃｏＲ　Ｉ　酶切ｈＩｇＧ１Ｆｃ　，ＨｉｎｄⅢ、ＥｃｏＲＩ　酶切ｐＣＤＮＡ３，纯化后的酶切产物经Ｔ４ＤＮＡ连接酶连接，转化大肠杆菌ＤＨ５α，氨苄青霉素筛选阳性克隆，ＰＣＲ及测序鉴定。结果：连接反应产物转化大肠杆菌ＤＨ５α，氨苄青霉素筛选出多个阳性克隆；分别以针对４１ＢＢ胞膜外区和ｈＩｇＧ１Ｆｃ的引物进行ＰＣＲ扩增，电泳后观察到一５５８ｂｐ、７０８ｂｐ的特异性条带，与４１ＢＢ胞膜外区和ｈＩｇＧ１Ｆｃ相符，提示构建成功。进一步测序分析证明克隆在ｐＣＤＮＡ３　质粒中的４１ＢＢ和ｈＩｇＧ１Ｆｃ序列和读码框架正确，无基因突变。结论：成功构建人４１ＢＢ胞膜外区ｈＩｇＧ１Ｆｃ融合蛋白真核表达载体，为表达４１ＢＢ融合蛋白奠定基础。     

重组可溶性人CD137在CHO细胞中的表达

目的：获得表达人可溶性CDl37抗原的dhfr-CHO细胞抹。方法：将CDl37-hIgGlFc-pCD-NA3重组质粒及pSV2-dhfr质粒，运用脂质体介导法共转染CHO细胞。用G418筛选出阳性克隆，MTX递增浓度诱导人可溶性CDl37在dhfr-CHO细胞的表达。运用RT-PCR检测CDl37 mRNA转录水平，SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测人CDl37可溶性蛋白在CHO细胞中的表达。结果：重组质粒转化细胞进行RT-PCR后，得到一大小为558bp的特异性条带，与人CDl37胞膜外区一致；重组质粒转化细胞进行SDS-PAGE得到一大小约为37KDa的奈带，与人CDl37-hIgGlFc融合蛋白大小基本一致。结论：获得了表达人可溶性CDl37的dhfr-CHO细胞株，为获得纯化的CDl37抗原、制备CDl37单抗奠定了基础。     

徕卡MC1型手术显微镜光源高压启动电路原理及检修分析

本文首先简单介绍了徕卡MC1手术显微镜电路的结构组成,详细阐述了比照高压启动电路线路板画出的线路图的工作原理,故障检修分析过程及排除方法,并对维修中出现的困境及如何更好解决主流品牌医用光源此类高压启动电路问题进行了讨论,为对其更快、更好维修提供了数据及理论依据。     

CD137(人4-1BB)在dhfr-CHO中的表达及活性研究

目的 :构建CD137真核高效表达系统 ,深入研究CD137及其配体在细胞信号转导中的作用。方法 :将构建有CD137全长cDNA序列的pCDNA3质粒 (CMV ILA SEN ,CIS)及pSV2 dhfr(含二氢叶酸还原酶基因 ) ,运用脂质体介导法共转染二氢叶酸还原酶缺陷的CHO细胞 (dhfr CHO) ;用G4 18筛选出阳性克隆 ;MTX压力选择系统诱导CD137在dhfr CHO细胞的高效表达 ;RT PCR、免疫细胞化学法及流式细胞术测定CD137的表达情况 ;3H TdR掺入法进行活性研究。结果 :CD137为膜型表达 ,CIS转化dhfr CHO细胞CD137表达率为 96 0 7% ;活性研究显示CD137膜蛋白轻度促进抗CD3单抗诱导的PBMC增殖。结论 :获得高效表达CD137的CHO细胞株 ,CD137膜蛋白促进抗CD3单抗诱导的PBMC增殖。