检测血清ATG浓度ELISA方法的建立

目的建立检测人血清中兔抗人胸腺免疫球蛋白(ATG)的检查方法并进行初步临床应用。方法用鼠抗兔IgG单克隆抗体做固相,辣根过氧化物酶(HRP)标记的羊抗兔IgG多克隆抗体做二抗,建立双抗体夹心ELISA方法。并检测使用ATG的异基因造血干细胞移植患者血中ATG的浓度。结果ATG浓度最低检测值为31.25ng/ml,在40～1000ng/ml范围内呈线性关系,组内和组间的变异系数分别为7.91%和5.22%。用该法测定7例干细胞移植预处理方案中使用ATG患者的浓度,ATG随时间在体内浓度逐渐下降,但预处理后90天仍能测得ATG,表明ATG在体内作用时间比较久,可能会影响移植后免疫功能重建。结论双抗体夹心法具有灵敏性高、特异性强的特点,可用于人血清中ATG水平的定量测定。干细胞移植预处理方案中使用ATG后体内浓度进行性降低,ATG将会比较长时间在体内起作用。