细胞周期基因芯片筛选不同增殖状态下CNE-2细胞的差异表达基因

目的:了解不同增殖状态鼻咽癌细胞(CNE-2)细胞周期基因表达差异,探讨鼻咽癌放射治疗中加速再增殖的机理.方法:对不同增殖状态的CNE-2细胞,采用基因芯片技术、实时荧光定量PCR检测其细胞周期相关基因表达差异.结果:细胞增殖活性最高时相(2Gy连续照射第3天)与最低时相(2Gy连续照射第5天)表达有差异的基因有3条,为检测基因总数的3%(3/100),其中细胞增殖活性增高时上调基因为CCNE1、CUL-5,下调基因为CDKNlA.应用相对定量荧光实时PCR技术对部分差异表达在2倍以上的基因(CCNE1、CDKNIA))进行了mRNA水平的验证,结果显示实时PCR实验结果与芯片结果具有良好的一致性.结论:某些细胞周期基因如CCNE1、CUL-5、CDKN1A等可能参与了鼻咽癌放射治疗过程中发生的加速再增殖过程,有必要对这些基因功能作进一步研究,以探明照射过程中肿瘤细胞加速再增殖发生的分子机制.     

细胞周期基因芯片筛选不同增殖状态下CNE-2细胞的差异表达基因

目的：了解不同增殖状态鼻咽癌细胞（CNE-2）细胞周期基因表达差异，探讨鼻咽癌放射治疗中加速再增殖的机理。方法：对不同增殖状态的CNE-2细胞，采用基因芯片技术、实时荧光定量PCR检测其细胞周期相关基因表达差异。结果：细胞增殖活性最高时相（2Gy连续照射第3天）与最低时相（2Gy连续照射第5天）表达有差异的基因有3条，为检测基因总数的3％（3／100），其中细胞增殖活性增高时上调基因为CCNE1、CUL-5，下调基因为CDKN1A。应用相对定量荧光实时PCR技术对部分差异表达在2倍以上的基因（CCNE1、CDKN1A））进行了mRNA水平的验证，结果显示实时PCR实验结果与芯片结果具有良好的一致性。结论：某些细胞周期基因如CCNE1、CUL-5、CDKN1A等可能参与了鼻咽癌放射治疗过程中发生的加速再增殖过程，有必要对这些基因功能作进一步研究，以探明照射过程中肿瘤细胞加速再增殖发生的分子机制。     

干扰CDC25A基因对CNE2细胞连续照射期间增殖的影响

目的 采用RNA干扰技术沉默CDC25A基因，观察其对鼻咽低分化鳞癌细胞株（CNE-2）在连续照射中后期加速增殖现象的影响。方法构建、培养出CDC25A基因沉默效果稳定的CNE2-psilence4．1-CDC25A，接受射线2Gy／d连续照射5d，分别采用MTT法、流式细胞术检测细胞的生长增殖活性，并在mRNA及蛋白水平上应用RT—PCR、WesternBlot法进行验证。结果MTT法检测结果表明，CNE2-psilence4．1-CDC25A细胞存活分数（SF）在第5天达到高峰，CNE2-psilencc4．1-Control细胞SF在第3天达到高峰。流式细胞术检测结果显示，CNE2-psilenee-4．1-CDC25A细胞在照射第5天S期细胞比（SPF）及增殖指数（PI）为最高值，CNE2-psilence4．1-Control细胞在照射第3天SPF值最高，在照射第4天PI值最高；RT-PCR、WesternBlot法进一步验证CNE2-psilence4．1-CDC25A细胞在照射第1、3、5天的CDC25A的表达与MTT法、流式细胞术检测结果基本吻合。结论与CNE2-psilencer4．1-Comrol细胞相比，基因沉默的CNE2-psileneer4．1-CDC25A细胞在连续分割照射期间，细胞的生长速度减慢、生长高峰延迟。     

抑制CDC25A表达的siRNA真核表达载体的构建

目的 在哺乳动物细胞中构建并鉴定抑制CDC25A表达的siRNA真核表达载体.方法 根据CDC25A的基因序列,设计特异性的siRNA,将合成的siRNA 核酸片段退火形成双链后连接到经Bam HI和HindⅢ双酶切后的psilencer4.1真核表达载体,命名为psilencer4.1-CDC25A以及psilencer4.1-Control,并进行酶切及测序鉴定.结果 通过酶切鉴定和序列测定,成功地构建出抑制CDC25A表达的siRNA载体及其阴性对照载体.结论 成功构建和验证了siRNA真核表达载体,为下一步研究奠定了良好的基础.     

不同增殖状态下CNE-2细胞株DNA损伤修复相关基因表达差异的观察

目的:了解不同增殖状态鼻咽癌细胞(CNE-2)基因表达差异,探讨鼻咽癌放射治疗中加速再增殖的机制.方法:对不同增殖状态的CNE-2细胞,采用基因芯片技术、实时荧光定量PCR检测其DNA损伤修复相关基因的表达差异.结果:CNE-2细胞增殖活性最高时相(2 Gy连续照射第3天)与最低时相(2 Gy连续照射第5天)表达有差异的DNA损伤修复相关基因6条,占检测基因总数的5.9%(6/102),其中细胞增殖活性增高时上调基因为CDC25A,下调基因为DDIT3、GADD45、CDKN1A、BNIP3和FOXO3A.应用相对定量荧光实时PCR技术,对部分差异表达>2倍的基因(CCNE1、CDC25A、CDKN1A、DDIT3、GADD45和BNIP3)进行了mRNA水平的验证,结果显示实时PCR实验结果与芯片结果具有良好的一致性.结论:DNA损伤修复的某些基因如CDC25A、CDKN1A、DDIT3、GADD45、BNIP3和FOXO3A等可能参与了CNE-2细胞放射治疗过程中发生的加速再增殖过程,加速再增殖可能是一个复杂的、多基因协同作用的结果.     

临床技能考核纳入卫生系列职称评聘的实践与探讨

目的 探讨将临床技能考核纳入卫生系列职称评聘的效果.方法 制订临床技能考核方案,对2014~2016年度晋升职称的初、中级临床医生(初级职称131人,中级职称167人)及初、中级医技人员(初级职称50人,中级职称36人)进行临床技能考核,对比不同年度、不同职称、不同类别晋聘人员的公共项目及专科项目的考核成绩.结果 2014~2016年初级、中级职称临床医生的专科临床技能考核总分及各专科项目操作成绩比较,差异均有统计学意义(P<0.05),均呈逐年增高趋势.2014~2016年,各年度临床医生与医技人员的公共项目考试成绩比较,差异无统计学意义(P>0.05);但2014~2016年初级、中级职称的临床医生及医技人员的公共项目考试成绩比较,差异均有统计学意义(P<0.05),均为2016年得分最高.结论 将临床技能考核方案纳入职称评聘考核中,可促使临床医生更好地掌握临床操作技能,有利于临床医生的综合素质的提高.     

RNAi在肿瘤中的研究进展

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是一种由双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)诱发的基因沉默(genesilencing)。在此过程中,与双链RNA有同源序列的信使RNA(mRNA)被降解,从而抑制了该基因的表达。因RNAi所致的基因沉默发生在转录后水平,所以被称为转录后基因沉默(post transcrip