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［摘要］目的: 研究抑制FANCM和USP1基因后,人肺鳞癌SK-MES-1细胞株FA/BRCA通路激活状态以及对顺铂敏感性的变化。方法: 用脂质体转染试剂将FANCM siRNA和USP1 siRNA分别和共转染于SK-MES-1细胞株,采用蛋白质印迹法测定转染后FANCM和USP1蛋白表达,并检测转染前后经DDP处理后细胞FANCD2蛋白单泛素化水平。免疫荧光染色检测胞核内FANCD2核聚小体表达。CCK-8法测定转染前后细胞生存率的变化;Annexin V/PI流式细胞术测定转染前后细胞凋亡率。结果： 转染FANCM-siRNA和USP1-siRNA后,SK-MES-1细胞中FANCM和USP1蛋白表达均较转染前明显降低。转染FANCM siRNA后经顺铂诱导的FANCD2单泛素化水平和核聚小体表达明显下调;转染USP1-siRNA后,顺铂诱导的FANCD2单泛素化水平和核聚小体形成明显增加;转染USP1 siRNA后细胞生存率和细胞凋亡率高于转染FANCM-siRNA,同时共转染USP1-siRNA+FANCM siRNA后细胞对顺铂的致敏效应与转染USP1 siRNA相似。结论： 沉默FANCM和USP1基因后,通过阻断FA/BRCA通路,抑制其DNA修复功能,导致SK MES 1细胞对顺铂的敏感性增高,其中沉默USP1基因的增敏效应更为明显。 相似文献
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