miR-629-5p对胃癌细胞生物学行为的影响及其靶基因MTRF1L的鉴定

目的：研究miR-629-5p对胃癌细胞生物学行为的影响并鉴定其靶基因。方法：通过实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR,qRT-PCR）检测miR-629-5p在16例胃癌组织和3种胃癌细胞中的表达水平;将细胞实验分为2个组：实验组（IN）和对照组（NC）;转染miR-629-5p抑制剂下调胃癌细胞MKN-45中miR-629-5p的表达;CCK-8实验和平板克隆实验检测MKN-45增殖;Transwell小室实验和划痕实验检测MKN-45迁移和侵袭;细胞流式技术检测MKN-45凋亡;通过miRWalk2.0工具预测miR-629-5p的靶基因,Western blot检测MKN-45中线粒体样转录释放因子1（mitochondrial translational release factor 1 like,MTRF1L）蛋白表达。结果：与癌旁组织[1.574（0.197,4.503）]相比,胃癌组织中miR-629-5p相对表达量[2.081（0.231,7.216）]明显增加（P=0.003）;与正常胃黏膜细胞（1.017±0.226）相比,胃癌细胞中miR-629-5p相对表达量（MKN-28：3.040±0.506;MKN-45：5.924±0.403;SCG-7901：3.377±0.372）均明显增加（P=0.000）。下调miR-629-5p表达后,胃癌细胞MKN-45的增殖减慢（IN：64±12;NC：102±12;P=0.018）,迁移（IN：106±9;NC：194±29;P=0.008）和侵袭（IN：25±7;NC：60±9;P=0.007）能力减弱,凋亡细胞数增加[IN：（19.257±2.440）%;NC：11.687±2.237;P=0.017]。miR-629-5p预测的靶基因共有46个,下调miR-629-5p的表达后,MTRF1L表达量明显增加（IN：0.923±0.101;NC：0.556±0.026;P=0.004）。结论：miR-629-5p在胃癌中表达上调,可促进MKN-45的增殖,增强MKN-45迁移和侵袭能力,抑制MKN-45凋亡;MTRF1L可能是miR-629-5p的靶基因之一。     

索拉非尼诱导HepG2细胞凋亡过程中Mcl-1与bFGF-2的表达及意义

目的观察索拉非尼体外诱导人肝癌细胞HepG2的凋亡效应,以及对髓样细胞白血病-1蛋白质(Mcl-1)及人碱性成纤维细胞生长因子-2(bFGF-2)的表达的影响。方法采用不同浓度梯度的索拉非尼作用于人肝癌细胞株HepG2,CCK-8试剂盒测定细胞杀伤效应,流式细胞术检测肝癌细胞凋亡率,采用Western blot测定Mcl-1表达,ELISA法检测细胞培养液中bFGF-2的水平。结果与对照组相比,索拉非尼能诱导人肝癌细胞株HepG2凋亡,呈一定的浓度时间效应(P<0.05),Mcl-1及bFGF-2表达均减少。结论索拉非尼可抑制人肝癌细胞株HepG2增殖,诱导其凋亡,Mcl-1及bFGF-2可能在肝癌细胞的增殖分化中起着重要的作用。     

索拉非尼联合奥曲肽对HepG2细胞的抑制作用

目的 观察索拉非尼联合奥曲肽在体外对人肝癌细胞株HepG2的抑制作用,并探讨其机制. 方法 采用不同浓度梯度的索拉非尼、奥曲肽单独和联合作用于人肝癌细胞株HepG2,分别于24、48、72 h用CCK-8试剂盒测定各组细胞的杀伤效应,流式细胞术检测HepG2细胞的凋亡率,荧光显微镜观察细胞的凋亡情况;并用酶联免疫吸附法检测细胞培养上清液中血管内皮生长因子(VEGF)的水平,Western blot法测定细胞中髓样细胞白血病-1(Mcl-1)、细胞外信号调节激酶(ERK) 1/2、磷酸化ERK1/2的表达.数据采用均数±标准差((x)±s)表示,用SPSS17.0软件对数据进行单因素方差分析. 结果 索拉非尼、奥曲肽单独使用和联合使用均对HepG2细胞具有抑制作用,并诱导其凋亡,联合用药组抑制效果优于单独用药组F=200.398,(P＜0.05).荧光显微镜观察显示,联合用药组和单独用药组细胞膜上均出现代表细胞早期凋亡的标志物磷脂酰丝氨酸.联合用药组VEGF表达水平为(10.31±4.69) pg/ml,低于索拉非尼组[(22.73±5.88)pg/ml]、奥曲肽组[(25.46±3.45) pg/ml]及正常对照组[(57.15±6.32) pg/ml],F=1019.725,P值均＜0.05.Western blot 法结果显示,各组ERK1/2表达水平差异并无统计学意义(P＞0.05);与正常对照相组比,索拉非尼、奥曲肽及联合用药组的磷酸化ERK1/2表达均减少(F=2.401,P＜0.05),联合用药组表达水平低于单独用药组(P值均＜0.05);奥曲肽组Mcl-1的表达水平与对照组差异无统计学意义,索拉非尼组和联合用药组的表达水平低于正常对照组(P值均＜ 0.05),联合用药组的Mcl-1表达水平低于各单独用药组(P值均＜ 0.05).结论 索拉非尼、奥曲肽均可抑制人肝癌细胞HepG2增殖,并诱导其凋亡,联合应用效果更为显著;其机制可能与二者协同抑制VEGF的表达,并下调抗凋亡蛋白Mcl-1及磷酸化ERK1/2的表达有关.     

中药材DNA条形码信息查询系统设计与实现

介绍DNA条形码技术及国内外药用植物相关信息平台建设情况,阐述中药材DNA条形码可视化查询系统的设计与实现,指出该系统的建设能够推进物种DNA条形码技术的应用,为相关研究者提供参考与借鉴。     

LncRNA UNC5B-AS1通过调控Toll样受体信号通路对宫颈癌细胞增殖及上皮间质转化的影响

目的 探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)UNC5B-AS1对宫颈癌细胞增殖及上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)的影响。方法 利用GEO和TCGA数据库进行差异表达分析，采用qRT-PCR在正常与癌变宫颈组织中进行验证，筛选出差异表达lncRNA UNC5B-AS1。在宫颈癌细胞株中转染lncRNA UNC5B-AS1干扰和过表达质粒，通过平板克隆、CCK-8、EdU实验检测lncRNA UNC5B-AS1对宫颈癌细胞增殖的影响；通过Transwell实验检测其对宫颈癌细胞迁移、侵袭能力的影响；通过Western blot检测EMT相关蛋白E-Cadherin、N-Cadherin、Vimentin的表达水平；通过转录组测序得到lncRNA UNC5B-AS1调控的信号通路，验证其相关基因的表达水平。结果 RNA微阵列和生物信息学分析显示，lncRNA UNC5B-AS1在宫颈癌中的表达水平明显高于正常宫颈组织，并与患者的总生存时间相关。与阴性对照组相比，敲低lncRNA UNC5B-AS...