人血管抑素A K(1-3)基因的克隆表达、纯化及活性鉴定

目的 克隆人Angiostatin K(1-3)基因,获得有活性的重组人血管抑素蛋白,为进一步开发应用奠定基础.方法 以人新鲜肝脏组织为材料,通过RT-PCR得到人Angiustatin基因的AK(1-3)片段.构建重组质粒pET30a-Angiostatin,转化表达菌Rosetta(DE3),对转化子进行诱导表达,利用Ni-NTA亲和层析纯化目的 产物,并验证其活性.结果 获得了人Angiostatin基因AK(1-3)片段的正确序列,表达和纯化了人血管抑素蛋白,表达量占菌体总蛋白的30%,纯化后证明表达产物具有较高纯度(达到90%).结论 Anginstatin K(1-3)可在原核融合蛋白表达载体中表达,且得到有活性的目的 蛋白.     

用逆转录PCR-核酸探针杂交法对柯萨奇B组病毒分型诊断

目的 建立一种逆转录PCR-核酸探针杂交法对柯萨奇B组病毒(CVB1～6)进行分型诊断。方法 一对通用PCR引物，它能有效扩增所有CVB1-6型的特异性DNA片段；另选取6条各型特异性寡核苷酸探针，将它们分别共价结合在不同的微孔板上。经过一次PCR扩增，扩增后的产物分别与包被有不同探针的微孔板进行杂交检测，从而有效鉴别CVB各型。结果 本法与ELISA法的分型比较显示它们具有很好的一致性，无错误分型。对152例IgM抗体阳性标本的检测，该方法阳性率为71．7％。结论 本法可准确对CVB进行分型，为CVB的临床诊断及流行病学调查提供了一种有效的方法。     

人血管抑素A K(1-3)基因的克隆表达、纯化及活性鉴定

目的 克隆人Angiostatin K(1-3)基因,获得有活性的重组人血管抑素蛋白,为进一步开发应用奠定基础.方法 以人新鲜肝脏组织为材料,通过RT-PCR得到人Angiustatin基因的AK(1-3)片段.构建重组质粒pET30a-Angiostatin,转化表达菌Rosetta(DE3),对转化子进行诱导表达,利用Ni-NTA亲和层析纯化目的 产物,并验证其活性.结果 获得了人Angiostatin基因AK(1-3)片段的正确序列,表达和纯化了人血管抑素蛋白,表达量占菌体总蛋白的30%,纯化后证明表达产物具有较高纯度(达到90%).结论 Anginstatin K(1-3)可在原核融合蛋白表达载体中表达,且得到有活性的目的 蛋白.     

胆结石患者胆囊粘膜及胆汁和结石中幽门螺杆菌DNA的检测

目的 检测单纯胆囊结石患者胆囊粘膜、胆汁和胆石中的幽门螺杆菌DNA,探讨幽门螺杆菌在胆石的形成过程中的作用。方法 选用一对来源于幽门螺杆菌特异性尿毒酶A基因的引物,用PCR法对52例单纯胆囊结石患者的胆囊粘膜、胆汁和胆石中的幽门螺杆菌DNA进行检测。结果 胆汁中幽门螺杆菌DNA的阳性率为30．8％（16例）,明显高于胆囊粘膜中的15．4％（8例）和胆石中的13．5％（7例）。结论 提示幽门螺杆菌是胆石形成过程中的重要病原菌之一。     

简套式荧光RT-PCR检测患者血清样本中SARS冠状病毒

目的　建立一种快速、特异、灵敏的SARS冠状病毒(SARS CoV)核酸检测方法。方法　根据GenBank中SARS CoV基因序列,自行设计引物、荧光探针,在PE 770 0扩增仪上探讨工作参数,形成试剂盒,并用研制的试剂检测76份临床SARS样本。结果　简套式荧光RT PCR方法对血清样本、漱口液样本、正常人样本检出率分别为33.3% (12 36 )、6 7.5 % (2 7 4 0 )、0 (0 / 16 0 ) ,与经典套式检测结果一致。而传统一步法荧光RT PCR对样本的检出率分别为13 9% (5 36 )、5 2 5 % (2 1 4 0 )、0 (0 / 80 )。结论　简套式荧光RT PCR核酸检测法是SARS临床早期诊断快速、特异、灵敏的方法。     

人血管抑素A K(1-3)基因的克隆表达、纯化及活性鉴定

目的 克隆人Angiostatin K(1-3)基因,获得有活性的重组人血管抑素蛋白,为进一步开发应用奠定基础.方法 以人新鲜肝脏组织为材料,通过RT-PCR得到人Angiustatin基因的AK(1-3)片段.构建重组质粒pET30a-Angiostatin,转化表达菌Rosetta(DE3),对转化子进行诱导表达,利用Ni-NTA亲和层析纯化目的 产物,并验证其活性.结果 获得了人Angiostatin基因AK(1-3)片段的正确序列,表达和纯化了人血管抑素蛋白,表达量占菌体总蛋白的30%,纯化后证明表达产物具有较高纯度(达到90%).结论 Anginstatin K(1-3)可在原核融合蛋白表达载体中表达,且得到有活性的目的 蛋白.     

同时多原发大肠癌（附18例临床分析）

目的探讨提高同时多原发大肠癌诊断率及治疗效果。方法回顾分析１８例同时多原发大肠癌的临床病理资料。结果本组同时多原发大肠癌１８例,癌灶３８个,其中腺瘤癌变占２６３％,均行手术治疗,术后三年生存率、五年生存率分别为６４７％和４７０％。结论术前钡灌肠造影、纤维结肠镜检查,术中充分仔细探查全结肠及经结肠切口结肠镜检查,是提高同时多原发大肠癌诊断率的关键。     

多原发大肠癌32例分析

目的探讨多原发大肠癌的临床特点及诊断治疗.方法回顾性分析32例多原发大肠癌的临床资料.结果32例占同期大肠癌的3.75%(32/853),同时性、异时性多原发癌的术前诊断率为61.9%(13/21)、81.8%(9/11);同时性多原发癌术后5年生存率为44.4%(8/18),异时性多原发癌的第1癌术后5年生存率为63.6%(7/11),再发癌术后5年生存率为50%(4/8).结论提高对多原发大肠癌的警惕性,术前全面检查,术中仔细探查及常规解剖标本,术后肠镜复查,积极治疗,可提高生存率.