胞嘧啶脱氨酶的原核表达和多克隆抗体的制备

目的：在原核系统中表达并纯化大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶（cytosine deaminase,CD)，制备鼠抗大肠杆菌CD多克隆抗体，方法：亚克隆CD基因到原核表达载体pMAL-c2和pBV222中，并转化入大肠杆菌DH5α内，诱导表达并纯化MBP-CD和6his-CD融合蛋白，用纯化的MBP-CD融合蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体。结果：通过重组质粒的酶切筛选出重组阳性克隆，成功地表达和纯化出MBP-CD和6his-CD融合蛋白，用纯化的MBP-CD成功制备了鼠抗CD多克隆抗体，并用6his-CD和GST-CD重组蛋白进行Western印迹分析，证实了抗体的正确性，结论：应用多克隆抗体可以检测体内外CD基因的表达，为临床前和临床上深入开展CD基因的生物治疗研究提供重要的实验材料。     

发热门（急）诊的消毒隔离

医院在易于隔离的地方设立相对独立的发热门(急)诊，并采取严格的消毒隔离和防护措施，其目的是实现对传染性非典型肺炎疫情的早期预警和预报，防止疫情进一步扩散、蔓延。     

HPLC-ELSD法同时测定复方产品中10种皂苷类成分的含量

目的：建立高效液相色谱串联蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)同时测定复方产品中红景天苷、刺五加苷B、刺五加苷E、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rc、人参皂苷Rb2、人参皂苷Rb3和人参皂苷Rd等10种皂苷类成分含量的方法。方法：采用YMC-Triart C₁₈色谱柱分离,以乙腈和水为流动相进行梯度洗脱,蒸发光散射检测器检测。结果：在此方法条件下10种皂苷类成分得到了良好的分离。红景天苷、刺五加苷B、刺五加苷E、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rc、人参皂苷Rb2、人参皂苷Rb3和人参皂苷Rd在0.04～1.00 mg/mL浓度范围内,人参皂苷Rb1在0.08～2.00 mg/mL浓度范围内,线性关系良好,平均加标回收率在98.6%～101.5%之间,方法重复性良好,RSD(n=6)小于3%。结论：该方法操作简便、重复性好、准确度高,可用于复方产品中多种皂苷类成分的质量控制研究。     

NAG酶荧光比色测定细胞毒及其应用研究

细胞毒测定作为免疫学的一项基本技术在肿瘤的生物治疗方面已成为检测NK细胞、LAK细胞、CTL细胞、细胞因子活性、药敏实验等一切杀伤活性的必不可少的手段.我室建立的NAG酶荧光比色法测定细胞毒,较经典的~(51)Cr释放     

大川芎经鼻给药制剂中天麻素纯化工艺研究

目的:建立大川芎经鼻给药制剂中天麻素的纯化工艺,以满足制剂载药量小的要求。方法:用吸附、解吸附试验从5种大孔吸附树脂中筛选出最佳树脂,并以天麻素转移率以及出膏率为指标,优选纯化工艺。结果:AB-8对天麻素的吸附与解吸附效果最好,最佳工艺为上柱液浓度为0.5g/mL,上柱液pH为8.0,最大上样量为0.7 BV,吸附流速2～4BV/h,径高比1∶9,先以蒸馏水1 BV洗脱,弃去,再以10%乙醇洗脱,洗脱流速为3～4BV/h、洗脱液体积为6BV;经过纯化后,天麻素的转移率为96%,出膏率为0.82%。结论:该工艺纯化大川芎经鼻给药制剂中天麻素是稳定、可行的。     

利用TaqMan-MGB探针检测A(H3N2)亚型流行性感冒病毒E119V耐药突变

目的 建立快速检测A(H3N2)亚型流行性感冒病毒(简称流感病毒)神经氨酸酶(M)基冈E119V奥司他韦耐药突变位点的双重实时荧光定量逆转录PCR(rRT-PCR)方法.方法 由GenBank获取2000-2012年A(H3N2)亚型流感病毒NA基因序列26条,据此设计特异性靶向NA E119V突变位点的TaqMan-MGB探针进行双重rRT-PCR反应,并利用耐药参考株、临床分离株进行敏感性、特异性和重复性评价.结果 建立了快速检测NA基因E119V位点的双重rRT-PCR检测方法.本方法在A(H3N2)病毒(HA=8)稀释度至10-5仍可检测到荧光信号,病毒滴度的对数与Ct值之间呈线性相关,具有较高的灵敏度;与无耐药突变的A(H3N2)流感病毒及其他呼吸道病毒均无交叉反应,两条TaqMan-MGB探针之问不存在交叉反应,具有很高的特异性,并能够检测耐药株和敏感株混合病毒中的耐药突变,在较高浓度的混合病毒中对耐药突变的检测限是5％,在低浓度混合病毒中的检测限是50％.重复性试验得到H3N2-119E和H3N2-119V两组探针批内平均变异系数(CV)值分别为2.32％和0.57％,批间CV值分别为1.77％和0.97％,具有较好的重复性.对其中20株病毒的NA基因序列进行分析,证实这些毒株的NA基因119位点均为谷氨酸(E),表明本研究设计的方法与序列测定结果一致.结论 建立了基于TaqMan-MGB探针检测A(H3N2)亚型流感病毒E119V耐药突变的双重rRT-PCR方法,该方法灵敏、特异、重复性好,实验过程和结果判读简单易操作.     

人脂联素球状结构域的表达、纯化和功能鉴定

目的表达和纯化人脂联素（adiponectin,APN）球状结构域并观察其生物学活性.方法用PCR方法复制人脂联素球状结构域（globular domain of adiponectin,gAPN）的cDNA,并克隆于pET28a（＋）原核表达载体中.将重组表达质粒pET28a（＋）-gAPN转化大肠埃希菌BL21（DE3）,37℃培养至A600达到0.6时,加入异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导目的蛋白的表达.细菌经超声破菌,得到粗提的包涵体洗涤变性后经镍柱亲和层析柱一步纯化,获得纯化的gAPN重组蛋白,复性后冻干保存.然后,用链佐星（streptozocin,STZ）诱导的小鼠高血糖模型检测其生物活性.结果IPTG诱导后有Mr约为17 000大小的目的蛋白表达,免疫印迹结果进一步表明,其具有人gAPN的抗原性.表达蛋白主要以包涵体形式存在,占菌体蛋白的30%以上,表达产物经变性、纯化、复性,可获得纯度90%以上的目的蛋白.该重组蛋白能够降低STZ诱导的小鼠高血糖模型的血糖水平.结论在大肠埃希菌BL21（DE3）中成功表达了人gAPN蛋白,经变性、纯化、复性后得到具有生物学活性的蛋白.     

阵发性心房颤动患者心房及肺静脉不应期离散度的变化

目的探讨阵发性房颤患者房颤相关组织的电生理特性改变情况。方法选取阵发性房颤患者10例(房颤组)和无房颤病史的左侧旁路有显性预激波患者15例(对照组)。将大头电极分别放置在两组患者左上肺静脉、左下肺静脉、右上肺静脉、右下肺静脉开口及左心房顶壁、前壁、后壁、高位右心房,分别测定各部位有效不应期(EPR)。结果①房颤组心房及肺静脉EPR离散度指数(DI)为0.117±0.028,对照组为0.074±0.029,两组比较,P<0.05。②房颤组左心房ERP为(234.00±28.72)ms,肺静脉ERP为(230.75±32.69)ms;对照组左心房ERP为(248.00±25.99)ms,肺静脉ERP为(244.33±26.78)ms,两组比较,P均<0.05。结论阵发性房颤患者DI明显增大,左心房、肺静脉ERP显著缩短。     

基于Box-Behnken及PCA-G1-熵权法优选青香乳康颗粒中挥发油的提取及包合工艺

目的优选青香乳康颗粒中挥发油的提取及包合工艺。方法运用Box-Behnken优化青香乳康颗粒中挥发油的提取工艺,基于PCA-G1-熵权法和L9(34)正交设计,采用胶体磨法,以芳香水中油水比、油β-环糊精比和研磨时间为考察因素,以包合率以及包合物的收得率为评价指标,优选挥发油的最佳包合工艺。结果挥发油的最佳提取工艺为浸泡0 h,加水量为10倍,提取6 h。挥发油的最佳包合工艺为芳香水中油水比1∶80,每毫升挥发油中加入6 gβ-环糊精,研磨30 min。在此条件下,分别进行3批验证试验,试验数据组间无明显差异。结论优选的挥发油提取及包合工艺稳定可行,为大生产提供实验依据。