序列特异性引物联合RT-PCR在LRRK2基因多态性分型中的应用

目的建立帕金森病(PD)相关基因LRRK2疾病易感位点R1628P、G2385R的新检测方法。方法设计序列特异性引物,采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)的方法,对已知基因型的标准品进行分型检验;检测100例未知基因型的PD样品,并用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RLFP)的方法对待检样品基因型进行验证。结果标准品分型结果完全正确,待检的100例样品分型结果与PCR-RLFP分型结果完全吻合。结论序列特异性引物联合实时荧光定量PCR可成功实现对LRRK2疾病易感位点R1628P、G2385R的基因型分型。     

“专创融合”在法医学教育中的探索与实践

创新创业能力培养是医学院校培养医学人才的重要内容。“专创融合”教育教学对于培养法医学专业学生的创新精神、创业意识及创新创业能力尤为重要。本文针对目前法医学教育存在创新创业教育与专业教育融合不足的现实问题,以培养目标为依托,从教育教学理念、思政教育、教学内容与教学方法综合改革等几个方面,探索法医学创新创业教育模式及实践路径,以期挖掘“专创融合”的潜能,为培养具有创新创业意识和能力的复合型高素质法医学专门人才奠定基础。     

中国北方汉族人群PARK9、PARK15和BST1基因中的3个SNP与帕金森氏病之间缺乏相关性

研究背景 帕金森病（Parkinson’s disease, PD）是多发于老年人群中的常染色体神经退行性疾病。尽管准确的病因不清,但目前的研究显示PD的发病原因与环境因素和遗传因素密切相关。在已经鉴定的约16种PD易感基因中存在着大量的与PD相关的单核苷酸多态性（SNP）,然而,中国PD人群中相关的数据报道甚少。为了调查PD潜在的遗传危险因素,本研究首次以中国北方人群为样本,对BST1, PARK15 和 PARK9 三种PD易感基因的三个SNP位点（rs4538475,rs11107和 rs12564040）的遗传多态性进行了调查。 研究方法 常规分离提取215名PD患者及212名平均年龄相仿的正常个体的静脉血基因组DNA,应用PCR-RFLP和错配PCR-RFLP技术,在两个独立的PCR反应体系和一个接续的单一限制性内切酶Pst I的消化反应体系中,经单一常规的聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,鉴定三个位点的基因型。所得基因型数据采用SPSS 13.0和PLINK-1.07软件进行遗传参数及相关性分析。 实验结果 应用本研究设计的方法可以准确地鉴定所有三个位点的基因型。实验结果显示,rs4538475和rs11107两个位点观察的杂合度在PD病人组和对照组中排列范围分别为0.460 ~ 0.481和0.410 ~ 0.441;而rs12564040位点上疾病和对照组均没有发现杂合子。疾病和对照组之间相似的基因型频率分布经相关性分析显示,本研究所调查的三个SNP位点至少在中国北方汉族人中不构成常见的PD危险因素,也不考虑其为PD的致病性突变位点。 结论 本研究所调查的三个SNP位点在中国北方汉族人群中与PD缺乏相关性。     

细胞凋亡途径中HIPPI的潜在调节作用

亨廷顿蛋白相互作用蛋白1相互作用因子(huntingtin-interacting protein 1 protein interactor,HIPPI)也称为雌激素相关受体β样蛋白1(estrogenrelated receptor beta-like protein 1,ESRRBL1)或者鞭毛内转运蛋白57同系物(intraflagellar transport 57homolog,IFT57).2002年,Gervais等[1]在研究亨廷顿病(Huntington disease,HD)的发病机制时,发现了一种新的与享廷顿蛋白相互作用蛋白1(huntingtin-interacting protein 1,HIP-1)相互作用的蛋白,进而克隆了该蛋白的基因,并命名这个新的蛋白为HIPPI.进一步深入研究发现HIPPI参与细胞凋亡的发生,并推测其在神经变性疾病HD的发病机制中起重要作用.随后,研究者们发现IFT57/HIPPI也参与排列在纤毛和鞭毛轴丝微管中大的蛋白复合物的双向运动,影响着细胞内基本的蛋白转运[2].也有研究指出HIPPI在胚胎发育初级阶段有着重要功能.最新的研究显示HIPPI作为一个重要的转录因子,参与包括与凋亡相关的多种基因的调节,进而影响不同的信号转导通道.鉴于HIPPI表现出的生理病理学重要性,本文对HIPPI基因与蛋白质结构、分布特征、生物学功能及病理生理学意义等进行综述,重点探讨HIPPI在凋亡过程中的潜在调节作用.     

分泌粒蛋白Ⅲ的生物学功能与临床意义

分泌粒蛋白Ⅲ（secretogranin III,SCG3/Sg III）是粒蛋白家族（granin family）中一个较新的成员.该蛋白与粒蛋白家族其它成员一样,在分泌颗粒（secretory granules）的基质中表达丰富,为亲水性酸性蛋白质,带有丰富的电荷,广泛分布于神经内分泌细胞、内分泌细胞及神经细胞.     

PI3K-p55γ亚基与疾病的关系

磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol 3-hydroxykinases,PI3K)是一个具有使羟基磷酸化功能和脂质激酶功能的酶家族。PI3K具有多种生物学功能,可被多种生长因子、细胞因子以及神经营养因子等激活,从而参与到多种细胞信号调节中,如细胞分化、迁移、增殖和抗凋亡等。根据各成员的序列同源性和脂质底物的特异性,PI3K家族成     

帕金森病患者共核蛋白基因复制子的调查及血清共核蛋白表达水平的研究

帕金森病(PD)的发病机制与遗传因素密切相关,调查形成中脑黑质多巴胺能神经元内病理性路易小体(LB)的主要成分α-共核蛋白的基因(SNCA)在散发PD患者的突变;同时了解α-共核蛋白在血液中的浓度.方法 抽取210名散发性PD患者和80名正常人的静脉血,分离血清后,分别提取RNA和基因组DNA;采用实时定量PCR方法分析SNCA基因的剂量变化以及mRNA表达的水平;应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中α-共核蛋白的表达水平.结果 SNCA基因外显子1基因组水平相对定量结果显示,1个散发PD患者比值为1.6,其余PD患者和正常个体的比值在0.8～1.2之间;基因组水平比值增加的PD患者mRNA表达水平与其他PD患者及正常个体比较显著增加(P＜0.05);但该患者血清中α-共核蛋白表达水平与其他PD患者及正常个体之间差别没有统计学意义(P＞0.05).结论 汉族散发PD患者中存在SNCA基因双拷贝复制,但出现频率极低;血清中α-共核蛋白的检测目前不能视为PD分析的有效生物学指标.     

中国北方汉族人群FUT5基因编码区序列特征

目的 揭示中国北方汉族人群岩藻糖基转移酶基因V(fucosyltransferase 5 gene,FUT5)编码区序列特征.方法 对160名健康中国北方汉族人群血液样品进行研究,DNA测序分析其中30例FUT5基因编码区序列;突变基因亚克隆后测序鉴定其单倍型;聚合酶链反应-限制性片段长度法分析130名C560T(rs778970)和C484A位点的遗传多态性.结果 DNA测序共鉴定出7个单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNPs)及2个新突变点C484A(Leu162Met)和T684C;9种碱基替换共鉴定出7种单倍型;160名样本的rs778970位点遗传多态性分析结果显示等位基因频率C为0.3031,T为0.6969;而C484A未发现其具有多态性.结论 中国北方汉族人群FUT5基因编码区序列呈现出高度的变异性;rs778970位点等位基因分布具有较好多态性.     

SNCA和PARK16多态性与中国辽宁地区汉族帕金森病人的关联分析

目的: 探究SNCA基因rs3857059和PARK16基因rs16856139单核苷酸多态性(SNPs)的频率分布及与帕金森病的关联性。方法: 本研究以214名中国辽宁地区汉族健康个体和213名帕金森病患者为研究对象,借助多重PCR及单一的限制性内切酶消化后的限制性片段长度多态性(RFLP)分析技术,对上述2种帕金森病易感基因中的2个SNPs位点进行等位基因多态性调查,并将所得的对照及病例组数据进行相关统计分析。结果: 多重PCR-RFLP法成功地检测出2个SNPs位点的所有基因型。基因频率数据显示rs3857059位点的G等位基因频率在帕金森病患者组高于对照组,差异有统计学意义(χ²=7.592,P<0.01,OR= 0.677,95% CI=0.517~0.888);rs16856139位点的T等位基因频率在帕金森病患者组低于对照组,差异有统计学意义(χ²=11.511,P< 0.01,OR= 0.390, 95% CI=0.227~0.669),这些结果提示本研究调查的2个SNPs构成了帕金森病患病的危险因素。结论: 帕金森病易感基因SNCA的rs3857059和PARK16的rs16856139位点基因频率分布在中国辽宁地区汉族群体中与帕金森病相关。