自制电泳凝胶干燥器

凝胶电泳后凝胶的干燥是一个困难的问题,我们参照中山医科大学的凝胶干燥器样本加以改进,自制了凝胶干燥器,使用效果满意。1.组装 打开凝胶干燥器上盖,在底盘中间放一块有孔铝薄片(图d),薄片上铺放大小一致的四层尼龙网及二层湿滤纸,再放一张湿玻璃纸。凝胶标本放在玻璃纸上,凝胶与玻璃纸之     

恶性疟原虫保护性单克隆抗体的分离和纯化

为制备亲和吸附剂,提取恶性疟原虫保护性抗原,我们用ProteinA亲和吸附柱,自小鼠腹水中提取抗恶性疟原虫保护性单克隆抗体。腹水上柱后,用0.1M PBS洗涤杂蛋白,用0.1M醋酸洗脱吸附的McAb。洗脱液经透折。浓缩后,用SDS—PAGE鉴定纯度,免疫荧光及双扩散试验检测其活性。 四个杂交瘤株(9_4D_1,9_4C_3,9_2D_4,9_3A_3)的腹水共60.3ml,过柱后收获McAb153.9mg,平均每毫升腹水可得2.25mg McAb,SDS—PAGE电泳图谱上显示二条区带,     

用抑制性单克隆抗体对恶性疟原虫裂殖体和裂殖子表面抗原的鉴定

根据体外抑制试验证明,94D_1,94C_3,92D:,9_3A_3,9 B和9_3D_4等6株McAb对恶性疟原虫的增殖有明显的抑制活性,为了分析这些McAb相应的靶抗原以及进一步的提取和纯化。我们首先对上述靶抗原的理化特性作了初步鉴定。用葡萄球菌A蛋白(SPA)免疫吸附柱自小鼠杂交瘤腹水中提取纯化抗恶性疟原虫保护性单克隆抗体。纯化后的单克隆抗体与溴氰活化的琼脂糖珠(Sepharose 4B)制备免疫吸附柱。将~(125)I—标记的恶性疟原虫tritonX—100提取物通过上述亲和层析柱,洗脱物经透析浓缩后,用SDS—PAGE—放射自显影鉴定与保护性McAb对应的靶抗原的分子量。同时用提纯后的McAb与恶性疟原     

辣根过氧化物酶与A蛋白结合物的制备

A蛋白与辣根过氧化物酶交联,可为酶联免疫试验提供大量的酶结合物,对推广ELISA的广泛应用很有意义。我们参照丁宗武等的报导进行了辣根过氧化物酶与A蛋白的酶联试验,简报如下。 材料和方法 辣根过氧化物酶与A蛋白的交联: A蛋白购自上海生物制品研究所,每安瓶6mg冻干纯品,批号81—9—1500。与酶交联前将6mgA蛋白溶于1ml 0.015M pH9.6的Na_2CO_3/NaHCO_3缓冲液中,平衡24小时。     

用葡萄球菌蛋白A(SPA)菌体试剂免疫沉淀诺氏疟原虫裂殖体(裂殖子)靶抗原(摘要)

本文参考Kessler和Howard等报道的方法,用金黄色葡萄球菌CowanI株(SPA)菌体试剂免疫沉淀诺氏疟原虫裂殖体(裂殖子)表面抗原,获得了较为满意的结果。 用乳过氧化物酶催化的~(125)Ⅰ标记诺氏疟原虫裂殖体(裂殖子)表面抗原,后将用Tri-ton X-100提取出的标记抗原和SPA菌体试剂在室温孵育60分钟;后取100μl~(125)Ⅰ标记的诺氏疟原虫表面抗原加入到100μl的兔抗诺氏疟原虫免疫血清中,在4℃孵育18小时,使其形成免疫复合物。在室温下将100μl预先用TNT缓冲液(0.15M NaCl、10mM Tris,pH7.5,0.25%TritonX-100)洗过3次的10%SPA菌     

恶性疟人群免疫血清靶抗原的分析

本文报告利用乳过氧化物酶(LPO)催化的~(125)I放射性标记法,标记恶性疟原虫裂殖体(裂殖子)表面抗原。将标记的原虫制成TritonX—100提取物,然后分别与采自流行区的11份病人血清和非疟疾流行区正常人血清进行免疫沉淀,通过十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS PAGE)和放射自显影分析恶性疟患者血清的靶抗原。 结果指出,恶性疟裂殖体(裂殖子)的TritonX—100提取物中存在20多种表面膜抗原。分子量为270、240、183、160、137、104、98、74和63KD的多肽系免疫沉淀中的主要靶抗     

恶性疟人群免疫血清对靶抗原的分析

用乳过氧化物酶催化的~(125)I放射标记法,标记裂殖体及裂殖子为主的恶性疟原虫表面抗原。将标记原虫制成Triton x-100提取物,与流行区的11份病人血清和非流行区正常人血清进行免疫沉淀.通过SDS-PAGE和放射自显影分析恶性疟患者血清抗体的靶抗原.结果表明,上述恶性疟原虫的提取物中存在20多种表面抗原。分子量270、240、200、183、160、137、104、98、74和63KD的多肽系免疫沉淀中的主要靶抗原,其中137,104、98和63KD的多肽主要出现于三次感染以上的人群免疫血清中,表明上述多肽与诱导宿主产生的免疫力似有一定关系.