人型结核杆菌克隆DNA探针的制备及其应用的研究

用限制性内切酶ＰｓｔⅠ消化人型结核杆菌Ｈ３７ＲｖＤＮＡ,与质粒ｐＵＣ１９ ＤＮＡ连接后转化大肠杆菌,经同位素３２Ｐ标记的人型结核杆菌Ｈ３７Ｒｖ全染色体ＤＮＡ探针筛选出６个阳性克隆（ＭＴ１￣６）,其中克隆ＤＮＡ片段ＭＴ２（４．２Ｋｂ）、ＭＴ４（３．５Ｋｂ）和ＭＴ５（３．０Ｋｂ）标记成探针,检测了２２种分支杆菌标准株和１５侏人型结核杆菌临床分离侏以及２种非分支杆菌,其杂交结果完全相同,与人型结核杆菌及     

重组质粒pMG611中K99和F41抗原基因在E．coli中表达条件的研究

本文通过ELISA方法测定了重组质粒pMG611在不同宿主和培养条件下，K99和F41菌毛抗原的表达水平。研究结果表明重组质粒pMG611在HB101和RRI宿主菌中较在C600宿主菌中表达更多的K99和F41菌毛抗原。实验中还探讨了培养基、温度和丙氨酸对两种菌毛抗原表达的影响。     

志贺氏毒素B亚单位基因的克隆与表达及其免疫保护作用的研究

本研究首次从野生的志贺氏Ⅰ型痢疾杆菌(简称志Ⅰ)克隆了志贺氏毒素基因,其表达量为野生株的16倍。经次级克隆获得无毒性而有保护作用的志贺氏毒素 B 亚单位在大肠杆菌的高效表达,B 亚单位被纯化至电泳纯,分别制备了 B 亚单位特异的多克隆和单克隆抗体,其研究深度达国际先进水平。对 B 亚单位作为口服苗的一系列条件进行深入研究,分别将 B 亚单表达在细胞周质、细胞表面、分泌至胞外和与 LacZ 融合,观察哪一种表达方式在小鼠内引起更好的免疫反应;采用了四种不同的启动子和二种克隆载体,探索了哪一类启动子和克隆载体适用于构建口服苗。结果表明,中等强度、不需诱导和体内诱导的启动子和 pBR322是构建     

大肠杆菌耐热性肠毒素ST_(1b)基因的亚克隆、重组及其核苷酸序列分析

产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)是幼畜、婴幼儿及旅游者腹泻的重要病原菌之一。作者以大肠杆菌pSLM004菌株为始发菌株,利用合成的一对与ST_1基因特定序列相匹配的引物,通过PCR扩增出了ST_(1b)基因。该基因片段扩增物(150bp)经适当方法纯化,与克隆载体pUC18的HlincⅡ位点平端连接,转化到受体菌JM101中。利用氨苄青霉素(Ap)抗性作为压力选择标志以及LacZ基因插入失活显色反     

用DNA杂交技术对大肠杆菌K88ac抗原和F41抗原基因的同源性研究

采用E.coli K88ac抗原基因做探针,对国内分离的F41抗原阳性的大肠杆菌,在不同的杂交条件中做了基因同源性的研究。结果在菌落原位杂交、DNA点杂交及Southern吸印杂交中,K88ac抗原结构基因与F41抗原阳性的菌株都不显示阳性反应,说明两基因间没有显著的同源性,这与国外的报道不一致,推测可能在免疫学上F41抗原反应阳性的菌株中,存在基因水平上显著不同的类型。