基于Nrf2通路研究通腑养髓方调控Wilson病模型TX小鼠神经细胞铁死亡的机制

目的 基于核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2- related factor,Nrf2)信号通路观察通腑养髓方对Wilson病(Wilsons disease, WD)模型TX小鼠神经细胞铁死亡的干预效应,并探讨通腑养髓方对WD神经细胞损伤的保护机制。方法 以DL小鼠为正常对照,将TX小鼠随机分为模型组和通腑养髓方组,通腑养髓方组以通腑养髓方中药灌胃治疗30 d,模型组和对照组小鼠以生理盐水灌胃,末次灌胃后取各组小鼠脑组织。采用电感耦合等离子体质谱法检测小鼠脑组织铜、铁微量元素含量,免疫荧光染色技术检测小鼠脑组织转铁蛋白受体（transferrin receptor, TfR）表达水平,比色法检测小鼠脑组织超氧化物歧化酶（superoxide dismutase, SOD）活性和丙二醛（malondialdehyde, MDA）含量,透射电子显微镜观察小鼠脑组织细胞线粒体形态变化,Fluoro-Jade B（FJB）染色观察小鼠神经细胞损伤程度,Western blot法检测小鼠脑组织铁死亡及Nrf2信号通路相关蛋白［Nrf2,铁蛋白重链（ferritin heavy chain,FTH1）、血红素加氧酶1（heme oxygenase 1,HO1）、醌氧化还原酶1（NADPH quinone oxidoreductase 1,NQO1）］表达水平。结果 与正常对照组比较,模型组小鼠脑内铜、铁含量,TfR表达水平,MDA含量显著升高（P<0.05）,SOD活性显著下降（P＜0.05）;与模型组比较,通腑养髓方组小鼠脑内铁含量,TfR表达水平,MDA含量显著降低（P＜0.05）,SOD活性显著升高（P＜0.05）。模型组小鼠脑组织线粒体膜皱缩,嵴数量减少或消失,空泡产生;通腑养髓方组小鼠脑组织线粒体结构损伤程度明显减轻。与正常对照组比较,模型组小鼠神经细胞损伤程度显著增加（P<0.05）;与模型组比较,通腑养髓方组神经细胞损伤程度显著减少（P<0.05）。模型组小鼠脑内谷胱甘肽过氧化物酶4（glutathione peroxidase 4,GPX4）表达水平较正常对照组显著降低（P< 0.05）,通腑养髓方组脑内GPX4表达水平较模型组显著升高（P<0.05）。模型组小鼠脑内Nrf2、FTH1、HO1、NQO1表达水平较正常对照组显著降低（P<0.05）,通腑养髓方组脑内Nrf2、FTH1、HO1、NQO1表达水平较模型组显著增加（P<0.05）。结论 通腑养髓方通过上调TX小鼠神经细胞GPX4等铁死亡相关蛋白及Nrf2、FTH1、HO1、NQO1等Nrf2通路相关蛋白的表达水平,减轻铜蓄积所致的氧化应激,抑制神经细胞铁死亡,从而起到保护神经细胞的作用。     

通督调神针刺法治疗急性脑梗死病人的临床疗效观察及疗效机制探讨

目的 观察通督调神针刺法治疗急性脑梗死病人的疗效，探讨通督调神针刺治疗急性脑梗死病人的疗效机制。方法 前瞻性研究 2021年 4月至 2022年 10月合肥市第一人民医院住院的 72例急性脑梗死病人按随机抽签法随机分成观察组 38法例(通督调神针刺法治疗)和对照组 34例(常规针刺法治疗)。两组病人纳入研究前均错过最佳溶栓时间窗，未给予溶栓治疗，全部给予调节血糖、血压、抗血小板聚集、稳定斑块、改善脑循环及神经保护等基础治疗。观察组按通督调神针刺法选取水沟、百会、风府、大椎、至阳、腰阳关等督脉穴位，对照组按普通针刺法选取血海、内关、极泉、尺泽、三阴交、委中等穴位，均针刺 1次/天，每次留针 40 min，每周治疗 6次，共治疗 4周。使用神经功能评分量表( NIHSS评分量表)、运动功能评分量表( FMA评分量表)和日常生活能力评分量表( MBI评分量表)对两组病人治疗前及治疗 4周后进行评分，同时测定两组病人治疗前及治疗 4周后血清微 RNA-320(miRNA-320)、胰岛素样生长因子 -1(IGF-1)的表达水平。结果治疗 4周后，对照组、观察组 NIHSS评分［(16.82±1.29)、(15.97±1.72)分］、 miRNA-320表达水平［(0.90±0.98)、(0.50±0.45)mg/L］均较治疗前［ NIHSS评分为( 17.35±1.65)、(17.53±1.66)分， miRNA-320表达( 1.86±1.47)、(1.79±1.84)mg/L］明显下降( P<0.05)且观察组 NIHSS评分、 miRNA-320表达水平降低程度均显著大于对照组( P<0.05)；两组 FMA评分、 MBI评分、 IGF-1表达水平治疗前明显升高(P<0.05)且观察组 FMA评分、 MBI评分、 IGF-1表达水平升高程度显著大于对照组( P<0.05)。治疗 4周后观察组的总有效率为 94.74均较，%(36/，38)，对照组的总有效率为 85.29%(29/34)(P<0.05)。结论通督调神针刺法和普通针刺法均能改善急性脑梗死病人神经功能、运动功能及日常生活能力，且通督调神针刺组临床疗效显著高于普通针刺组，其机制可能是通过抑制 miRNA-320表达并上调 IGF-1的表达所致。