人肝癌细胞系7402、7721及癌旁肝细胞7701在重组腺病毒-胸苷激酶／更昔洛韦系统作用前后差异蛋白检测及CK18表达

目的检测重组腺病毒一胸苷激酶／更昔洛韦（adenovirus—thymidine kinase／gancyclovir,ADV-TK／GCV）系统作用前后人肝癌细胞株7402、7721及癌旁肝细胞7701差异蛋白表达,进一步阐明ADV-TK／GCV自杀基因系统作用机制。方法利用肽质量指纹图谱和双向电泳分析法检测ADV—TK／GCV系统对人肝癌细胞7402、7721及癌旁肝细胞7701作用前后的差异蛋白;常规病理学技术苏木精伊红染色、电子显微镜技术观察作用前后细胞病理形态学改变;免疫细胞化学方法检测细胞角蛋白18（cytokeratin 18,CK18）的表达部位、分布范围及量的变化。结果7721及7701对ADV—TK／GCV系统作用不敏感,人肝癌细胞7402经自杀基因药物作用后,多种蛋白表达呈现出差异性,差异点主要表现为与物质能量代谢相关的酶类及与细胞骨架相关的蛋白,7402细胞的CK18表达上调明显。加药组7402细胞死亡明显,残留细胞体积变大,胞浆疏松,空泡变性。电镜观察显示加药组细胞器水肿,变化明显,微丝增多,且多分布于核周围,凋亡现象明显。7402免疫细胞化学染色显示加药组CK18的表达增强且向核周聚集。结论ADV-TK／GCV自杀基因系统作用后,敏感株7402蛋白表达具有差异性,其中CK18表达显著上调且出现分布改变,并引起细胞形态学的变化。     

裸鼠人肝癌原位移植瘤模型的建立

目的 探讨利用人肝癌细胞系,建立裸鼠人肝癌原位移植瘤模型,在肝细胞癌自杀基因治疗的应用价值.方法 取人肝癌细胞系Be17402和HepG2,制备皮下移植瘤,后将肿瘤组织接种于裸鼠肝内,建立裸鼠肝原位移植瘤模型.HE染色进行病理形态学观察.结果 裸鼠皮下成瘤率为100.0％(4/4).肝内接种肿瘤,裸鼠存活率100.0％(32/32),成瘤率81.3％(26/32);镜下观察肿瘤细胞成浸润性生长;肺、肠系膜淋巴结等组织器官未见肿瘤转移灶.结论 应用人肝癌细胞系建立的裸鼠肝原位移植瘤模型可以很好地模拟人肝癌的解剖学特征,但肝癌转移模型的建立方法尚需探讨.