SIRT4的酶活性及其生物学功能

哺乳动物沉默信息调节因子2(silent information regulator two, SIRT)家族有7名成员,SIRT1-7,它们的分子结构具有高度的保守性,每个分子都具有一个由275个氨基酸组成的催化中心,通过对下游目标蛋白进行翻译后修饰,参与机体内许多重要的生理过程,但是它们在细胞内的分布,酶活性以及生物学功能各不相同。其中,位于线粒体中SIRT4已被证明在胰岛素分泌,脂肪酸代谢,氨基酸代谢,ATP稳态等过程中发挥着重要的作用,SIRT4还具有肿瘤抑制的功能。     

肺耐药相关蛋白、P-糖蛋白在人膀胱癌中的表达及其临床意义

目的 探讨肺耐药蛋白(LRP))及P-糖蛋白(P-gp)在人膀胱癌组织中表达的意义。方法采用免疫组织化学技术检测62例人膀胱癌组织中LRP及P-gp的表达。结果62例人膀胱癌组织中可检测到LRP表达者42例,占67.74％;P-gp表达者24例,占38.71％;两者同时表达者13例,占21.00％;P-gp表达阳性率与肿瘤分期、分化程度,细胞增殖性间无明显相关(P>0.05),而LRP表达仅与细胞分级呈显著负相关(r=-0.74,P<0.001)。两蛋白表达无明显相关(P>0.05)。结论LRP可能是比P-gp更有效的检测膀胱癌多药耐药(MDR)指标。     

COX-2抑制剂NS398通过抑制前列腺素E2诱导肾癌细胞的凋亡

目的:揭示环氧合酶2(COX-2)在肾癌细胞中的表达情况,通过COX-2抑制剂NS398作用肾癌细胞探讨非甾体抗炎药(NSAID)对肾癌细胞增殖作用的影响及其可能的作用机制。方法:采用标准的细胞培养方法对人肾癌786-0细胞进行培养,将NS398分别以25,50,100,150及200μmol/L的剂量加入细胞中作用24及48h后,MTT法检测NS398对肾癌细胞增殖的影响;作用24h后,流式细胞仪测定细胞凋亡的情况,EIA法测定细胞中前列腺素E(2PGE2)含量的变化,Western blotting测定COX-2蛋白表达的情况。结果:NS398对肾癌786-0细胞具有较强的抑制作用,且这种抑制作用随浓度和时间的增加而增大,呈浓度依赖关系(P<0.05);NS398作用肾癌786-0细胞24h后,在细胞周期G0/G1期前出现明显的亚二倍体凋亡峰,随着浓度升高,凋亡峰亦越来越增高(P<0.05);NS398可抑制PGE2释放,并且这种抑制作用呈剂量效应,与对照组相比有统计学意义(P<0.05);不同浓度NS398作用下的肾癌786-0细胞中,COX-2的表达明显减弱,且呈剂量梯度下降。结论:NS398通过诱导凋亡来抑制肾癌786-0细胞的增殖;NS398诱导肾癌786-0细胞的凋亡作用机制可能是通过抑制COX-2的表达,降低肾癌786-0细胞PGE2的合成,减少前列腺素对肿瘤细胞增殖的刺激作用来抑制增殖和促进凋亡的。     

神经酰胺对人膀胱癌细胞凋亡诱导作用及其机制

目的 探讨神经酰胺（cer）对人膀胱癌细胞的凋亡诱导作用及其机制。方法 不同浓度C2-神经酰胺（C2-cer）作用于膀胱癌T24细胞，噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞存活率，吖啶橙（AO）荧光染色、流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡，并对半胱天冬酶（Caspase）-3活性、bcl-2蛋白含量和细胞色素C在细胞内的分布变化进行检测。结果 T24细胞存活率与C2-cer浓度呈负相关（r=-0．973，P＜0．01）。对照组和5、10、20、40μmol／L的C2-cer处理组凋亡率分别为2．95％、9．18％、14．23％、29．12％、48．46％，C2-cer处理组凋亡率显著高于对照组（P＜0．01）。Caspase-3活性随C2-cer浓度增加而增加，与对照组比较差异有统计学意义（P＜0．05）。在C2-cer作用下，T24细胞内bcl-2蛋白含量下降，细胞色素C向细胞质释放。结论 降低bcl-2蛋白表达水平，从而促进线粒体细胞色素C释放和Caspase-3激活可能是C2-cer诱导膀胱癌细胞凋亡的重要机制。     

Sma和Mad 4型同源体在前列腺增生中的表达及对前列腺细胞增殖和凋亡的影响

为探讨Sma和Mad4型同源体(Smad4)在前列腺增生中的表达及其作用，我们采用分子生物学方法对前列腺组织中Smad4蛋白和mRNA的表达进行研究，并采用流式细胞术对前列腺细胞DNA含量和细胞凋亡情况进行定量对比分析，以研究Smad4对细胞增殖与凋亡的影响。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体单克隆抗体对人肾癌细胞的毒性作用

目的　探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体 (TRAIL R)的单克隆抗体对肾癌细胞的毒性作用和机制。方法　在人肾癌细胞系ACHN和Caki 1中 ,应用四甲基偶氮唑盐 (MTT)方法分析细胞毒效应 ,应用流式细胞术检测相关凋亡诱导配体受体 (TRAIL R)的表达 ,应用荧光染色和AnnexinV标记检测细胞凋亡的发生 ,应用比色法分析多种Caspase活性在凋亡过程中的变化。结果　抗TRAIL R2单克隆抗体 (ETR2 )对人肾癌细胞系ACHN和Caki 1都具有明显的细胞毒性 (P <0 .0 1) ,而抗TRAIL R1单克隆抗体 (ETR1)的细胞毒性不显著 (P >0 .0 5 )。TRAIL R2在两种细胞表面均高表达 (ACHN :97.9% ,Caki 1:98.7% ) ,TRAIL R1表达微弱 (ACHN :7.6% ,Caki 1:7.5 4% )。ETR2通过诱导细胞凋亡发挥细胞毒作用 ,Caspase 8, 9, 6和 3活性在凋亡过程中明显增高 (P <0 .0 1)。结论　TRAIL R2的单克隆抗体在体外可诱导肾癌细胞发生凋亡 ,其细胞毒性与TRAIL R2的表达有关 ,在凋亡过程中内源性与外源性凋亡通路均被激活。     

细胞色素C亚细胞分布和Caspase-3活性改变在丝裂霉素C诱导膀胱癌细胞凋亡中的作用

目的:探讨丝裂霉素C(MMC)诱导人膀胱癌细胞凋亡的分子机制。方法:不同浓度MMC作用于膀胱癌BIU-87细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞存活率,吖啶橙(AO)荧光染色、流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡,并对半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)活性、细胞色素C亚细胞分布变化进行检测。结果:BIU-87细胞存活率与MMC浓度呈负相关(r=-0.97,P<0.05)。对照组和16、32、64、128μg/ml的MMC处理组凋亡率分别为(1.10±0.20)%、(10.93±1.51)%、(22.51±2.49)%、(31.71±3.39)%、(53.2±3.81)%,Caspase-3活性分别为0.152±0.009、0.201±0.010、0.275±0.009、0.479±0.012、0.594±0.013,MMC处理组与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。MMC处理组线粒体内细胞色素C含量显著低于对照组(P<0.05)。结论:促进线粒体细胞色素C释放和Caspase-3激活可能是MMC诱导膀胱癌细胞凋亡的重要机制。     

细胞增殖凋亡及血管生成在肾盂输尿管移行细胞癌中的作用

我们通过检测肾盂输尿管移行细胞癌中Ｋｉ 6 7、细胞凋亡、ＣＤ31的表达 ,探讨了细胞增殖、凋亡及血管生成在肾盂输尿管移行细胞癌中的作用。一、资料与方法1 研究对象 :肾盂输尿管移行细胞癌 4 2例中 ,Ｔ1期 14例 ,Ｔ2期 17例 ,Ｔ3～ 4期 11例。细胞分级为 :1级 8例 ,2级2 2例 ,3级 12例。2 细胞增殖、微血管密度和原位凋亡细胞的检测 :用免疫组化ＳＰ法检测Ｋｉ 6 7与ＣＤ31的表达 ,用ＴＵＮＥＬ法检测凋亡细胞。在每张切片阳性细胞最密集的区域中 ,计数 10 0 0个肿瘤细胞 ,并按Ｋｉ 6 7阳性细胞所占的比率计算增殖指数(ＰＩ) ;按ＴＵＮ…     

Netrin-1蛋白的结构与功能生物信息学分析

目的:通过生物信息学方法对Netrin-1蛋白的结构和功能进行全面的预测分析,从而为癌症发病机制及治疗提供理论依据。方法:利用ProtParam、Genecards、STRING等数据库对Netrin-1蛋白的序列同源性、亚细胞定位、理化性质、空间结构及蛋白质相互作用网络及表达谱进行综合分析。结果:人Netrin-1蛋白由604个氨基酸组成,在进化过程中高度保守,属于Laminin_N超家族和NTR_like超家族,是一种亲水、不稳定的分泌蛋白。该蛋白主要二级结构为无规卷曲,存在较多潜在的磷酸化、乙酰化位点,其互作蛋白有DCC、UNC5H家族、FYN、BCAR1、MAP1B等,在结肠癌、乳腺癌、前列腺癌等实体肿瘤中表达较高。结论:综合Netrin-1蛋白的结构、功能信息,提示其可能通过调节多种肿瘤相关信号通路促进肿瘤恶性进展。     

膀胱癌DNA甲基转移酶1、3a、3b基因的表达

目的探讨DNA甲基转移酶(DNMT)1、3a、3b mRNA在膀胱癌组织中的表达及其意义.方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测DNMT1、3a、3b mRNA在40例人膀胱癌组织及31例人正常膀胱粘膜组织中的表达.结果膀胱癌组织中DNMT1、3b表达的阳性率、表达值均高于正常对照组(P＜0.05);DNMT3a的表达与对照组相比,差异无显著性(P＞0.05);3种基因的表达率与表达值在不同肿瘤分级、分期、生长方式及原发肿瘤与复发肿瘤之间差异无显著性(P＞0.05);DNMT1与DNMT3b表达值明显相关(P＜0.01).结论DNMT1、3b表达升高是膀胱癌形成、发展中的早期、普遍事件,可作为早期诊断和复发监测的有效指标,DNMT1与DNMT3b的表达可能存在共同调节机制.