异常血流动力对TLR4/NF-κB信号传导通路及其下游炎症因子的影响

目的研究异常血流应力或压力单独作用对人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)/NF-κB信号传导通路及下游炎症因子:血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1(lectin-like oxidized low-density lipoprotein receptor-1,LOX-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、细胞间粘附分子-1(ICAM-1)及血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)等的影响,探讨异常血流动力导致动脉粥样硬化的机制。方法将生长良好的HUVECs以1×105个/ml密度接种于细胞综合应力刺激实验系统(型号BIO-CCS13)中进行干预。将HUVECs按所受的应力不同分成应力组、压力组和正常组。在各组应力作用下培养一天后收集细胞备用,用q PCR方法测定TLR4、髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,My D88)、肿瘤坏死因子受体相关因子-6(tumor necrosis factor receptor-associated factor-6,TRAF-6)、血凝素样氧化低密度酯蛋白受体-1(LOX-1)、核因子-κB(NF-κB)、TNF-α、ICAM-1及VCAM-1因子的基因表达,用蛋白质印迹方法测定TLR4、NF-κB、LOX-1、TNF-α、ICAM-1及VCAM-1因子的蛋白表达。结果与正常组比较,应力组和压力组TLR4、My D88、TRAF-6、LOX-1、NF-κB、TNF-α、ICAM-1及VCAM-1m RNA表达水平显著升高(P0.01),TLR4、LOX-1、NF-κB、TNF-α、ICAM-1及VCAM-1蛋白表达显著升高,差异有统计学意义(P0.01)。结论异常血流动力导致动脉粥样硬化的机制可能与激活TLR4/NF-κB信号传导通路和增强下游炎症因子:LOX-1、TNF-α、ICAM-1及VCAM-1等的表达有关。     

C57BL／6小鼠ZFP580C端编码基因的克隆及序列分析

【目的】克隆C57BL／6小鼠ZFP580C端编码基因cDNA序列，并进行序列测定和分析。【方法】参照GENBANK公布的C57BL／6小鼠ZFP580eDNA序列（注册号为AK005257），根据ZFP580C端编码基因eDNA序列设计1对引物，采用RT-PCR技术，从C57BL／6小鼠的肾脏组织中扩增ZFP580C端编码基因eDNA序列，回收纯化后与T载体连接，构建重组子pMD18-T-ZFP580，转化大肠杆菌DH5a。阳性克隆以限制性酶切分析与PCR法鉴定后，测定序列并分析。【结果】自C57BL／6小鼠肾脏组织获得总RNA，扩增出255bp的基因片段，成功构建阳性克隆重组子pMD-T-ZFP580，经双酶切和PCR鉴定与预期结果一致。所测定的C57BL／6小鼠ZFP580C端基因eDNA序列与13本RIKEN基因组中心于GENBANK注册（注册号为AK005257）的完全一致，与人ZNF580C端编码基因eDNA序列比较，核苷酸序列同源性为90％；该eDNA序列所编码的氨基酸序列与人ZNT580基因C端比较，同源性为100％，均编码有3个串联重复的C2H2型锌指蛋白主构域。其氨基酸序列与大鼠、犬、牛比较，同源性分别为100％、100％、98％。【结论】成功克隆C57BL／6小鼠ZFP580C端编码基因，该基因在不同种属间高度保守。     

氧化型低密度脂蛋白的形成及其致动脉粥样硬化的机制

动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）是心脑血管疾病的首要病因。AS损伤易发生在心脏及脑的大、中动脉,使这些部位动脉壁变硬增厚,管腔狭窄甚至闭塞,或斑块破裂继发血栓,引起供血组织缺血缺氧,出现临床症状和体征。AS也广泛侵袭全身血管,还可以引起其他严重疾病。AS的形成是一个复杂的慢性过程,对其形成机制的深入研究是防治心脑血管疾病的关键。     

异常血流动力对人脐静脉内皮细胞影响

目的研究异常血流动力对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells, HUVECs)分泌ET-1、NO以及ET-1、eNOS、VCAM-1、ICAM-1和MCP-1 mRNA和蛋白表达水平的影响,初步探讨异常血流动力致动脉粥样硬化(atherosclerosis, AS)的机制。方法按照HUVECs所受作用力的不同分为应力组、壁面压力组和正常组。3组在各自作用力持续作用下培养24 h,收集细胞备用。采用酶法和放免法检测ET-1、NO分泌水平,采用qPCR检测ET-1、eNOS、VCAM-1、ICAM-1和MCP-1 mRNA表达水平,采用蛋白免疫印迹方法检测VCAM-1、ICAM-1和MCP-1蛋白表达。结果壁面压力组ET-1分泌和mRNA表达水平较正常组明显升高,应力组NO分泌和eNOS mRNA表达水平较正常组明显升高;应力组和壁面压力组VCAM-1、ICAM-1和MCP-1的mRNA和蛋白表达较正常组明显增高。结论应力或壁面压力单独作用于HUVECs能够导致其分泌功能和基因、蛋白表达功能紊乱,异常血流动力导致AS的机制与HUVEC功能紊乱有关。