Cyclin B1的启动子在HeLa细胞cyclin B1蛋白调控中的作用

目的 通过检测细胞周期素B1(cyelin B1)的启动子在HeLa细胞的不同细胞周期的活性变化,探讨其对cyclin B1蛋白的调味控作用.方法 采用PCR法获得HeLa细胞cyclin B1的启动子,通过基因重组插人pGL3 promoter vector 从而获得质粒pGL3/cyelin B1 promoter.采用羟基脲(hydroxyurea,HU)对HeLa细胞进行细胞周期G_1、S、G_2/M期的同步化,通过流式细胞术法确认.用短暂转染的方法,将重组的质粒转染至HeLa细胞.通过双萤光素酶活性检测分析cyelin B1的启动子在HeLa细胞周期G_1、S、G_2/M期的活性的变化.结果 双荧光素酶活性检测cyelin B1的启动子活性在G_1期最高,S期最低,G_2期中等.结论 在HeLa细胞巾cyclin B1的启动子活性和cyclin B1蛋的的表达并不同步.     

羟基脲对体外Hela细胞周期同步化作用的研究

目的 探讨利用羟基脲(HU)对Hela细胞进行细胞周期同步化.方法 培养Hela细胞,采用Hu处理Hela细胞24 h,然后除去HU,让Hela细胞进入细胞周期G1、S、G2/M期,通过流式细胞术确认.结果 流式细胞仪检测证实Hela细胞在HU祛除后3.5 h处于S期,8.5 h处于G2/M期,18 h处于G1期.结论 HU处理可以有效地将Hela细胞同步化于特定的细胞周期,而且方法简单,易于操作.