血管内皮生长因子及其受体在单侧输尿管梗阻大鼠术侧肾脏的表达

血管内皮生长因子（VEGF）的主要作用是刺激血管内皮细胞的增殖与分化、抑制内皮细胞凋亡，主要通过两个受体Flk-1和Flt-1发挥作用。本研究旨在明确VEGF及其受体在单侧输尿管梗阻（UUO）大鼠术侧肾脏不同时间的表达变化情况，为进一步探讨其在UUO大鼠小管间质纤维化中的作用机制提供实验依据。     

大黄酸对葡萄糖转运蛋白1基因转染系膜细胞功能的影响

目的通过观察大黄酸对葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)基因转染系膜细胞(MCGT1)功能的影响,探讨大黄酸治疗糖尿病肾病(DN)的作用机制.方法利用逆转录病毒载体建立GLUT1基因转染的大鼠系膜细胞,以β-半乳糖苷酶转染细胞(MCLacZ)为对照.用2-脱氧-3H-葡萄糖(2-DG)测定细胞葡萄糖摄入,流式细胞仪分析细胞表型,3H-脯氨酸掺入和流式细胞仪分别检测细胞胶原和纤维连接蛋白(FN)的合成,采用比色法测定谷氨酰胺6-磷酸果糖转氨酶(GFAT)的活性,RT-PCR检测细胞胶原Ⅳ、FN和GFAT的表达.结果MCGT1的2-DG摄入率明显高于MCLacZ[(741±60.5)dpm*μgprot-1比(92.2±9)dpm*μgprot-1],同时表现出细胞大小、RNA/DNA和蛋白/DNA明显增加的细胞肥大表型,细胞外基质合成增加,MCGT1的3H-脯氨酸掺入量明显高于MCLacZ[(7.0±0.4)dpm*cell-1比(4.6±0.6)dpm*cell-1],GFAT活性明显增强(约增加1.8倍).大黄酸能够减少MCGT1的糖摄取[(560±64)dpm*μgprot-1比(741±60.5)dpm*μgprot-1),纠正MCGT1的肥大状态,并抑制MCGT1细胞外基质的合成和表达,降低MCGT1的GFAT活性.结论GLUT1的过度表达会明显改变系膜细胞的功能,大黄酸能逆转GLUT1基因转染所致系膜细胞功能的改变.     

罗格列酮对高血压大鼠的肾保护作用及其与血管紧张素Ⅱ受体表达的关系

目的 研究罗格列酮对高血压肾损伤的保护作用，及其与肾内血管紧张素Ⅱ(ATⅡ)受体表达的关系。 方法 两肾一夹高血压大鼠随机分为:(1)高血压未治疗组；(2)普通降压组(利血平50 µg·kg^-1·d^-1+二肼苯达嗪6.25 mg·kg^-1·d^-1+氢氯噻嗪6.25 mg·kg^-1·d^-1)； (3)常规剂量罗格列酮组(罗格列酮5 mg·kg^-1·d^-1)；(4)大剂量罗格列酮组(罗格列酮20 mg·kg^-1·d^-1)。假手术大鼠作为对照。 结果 常规剂量罗格列酮组收缩压为(176±18) mm Hg，与高血压未治疗组(191±25) mm Hg相比，无显著差异。大剂量罗格列酮组收缩压为(143±16) mm Hg， 普通降压组收缩压为(137±27)mm Hg，与高血压未治疗组相比，差异有统计学意义(P < 0.05)。 在血压、血糖、血脂水平相似的情况下，大剂量罗格列酮组尿蛋白排泄率为(16.78±3.50)mg/24 h，较普通降压组(27.94±12.79)mg/24 h显著降低(P < 0.05)。未钳夹侧肾脏病理改变轻，大剂量罗格列酮组肾小球损伤指数为18.04±7.76，与普通降压组27.92±6.39相比，差异有统计学意义(P < 0.05)；大剂量罗格列酮组微动脉壁/腔比为1.75±0.38，与普通降压组2.16±0.90相比，差异有统计学意义(P < 0.05)；大剂量罗格列酮组2型血管紧张素Ⅱ受体(AT2R)mRNA表达上调。 结论 罗格列酮对高血压肾损伤具有保护作用，可能与其上调肾内AT2R表达有关。     

缺氧、VEGF及其受体表达在高血压肾损伤中的作用

目的:探讨缺氧、VEGF及其受体表达在高血压肾损伤中的作用。方法:将大鼠分为3组:①假手术组;②两肾一夹高血压未治疗组;③两肾一夹高血压降压治疗组。每组8只,观察10周后处死,对未钳夹的右肾进行常规病理、RT—PCR及免疫组化检测。用缺氧探针显示肾组织缺氧情况。结果:高血压组血清肌酐与假手术组比差异无统计意义(P＞0．05),但血压、24h尿蛋白定量、肾小球损伤指数、微动脉壁/腔比均较假手术组有上升(P＜0．01)。假手术组大鼠未钳夹肾髓质有轻度缺氧,但皮质无明显缺氧表现。高血压组髓质和皮质均有明显缺氧(P＜0．01),主要阳性部位在肾小管和病变较严重的肾小球。皮质VEGF、VEGFR-2表达均较假手术组明显升高(P＜0．01),阳性部位与缺氧探针阳性部位分布一致。与未治疗组比较,降压治疗组的血压、24h尿蛋白定量、肾小球损伤指数、肾皮质缺氧状况均有所改善,VEGF、VEGFR-2表达显著下调(P＜0．05)。结论:两肾一夹高血压大鼠模型可作为慢性肾脏缺氧的动物模型。高血压大鼠的肾皮质VEGF及其受体表达上调,并与缺氧部位分布一致,这可能是对组织缺氧的代偿反应,并参与了慢性高血压肾损伤的发生。     

二甲氧乙二酰甘氨酸对缺血性急性肾衰竭小鼠的保护作用

目的 观察二甲氧乙二酰甘氨酸(DMOG)对小鼠缺血性急性肾衰竭的影响及其与低氧诱导因子1α(HIF-1α)活化之间的关系.方法 雄性C57/BL小鼠25只,随机分为5组:正常对照组(Control组),DMOG组(20 mg/kg,ip),假手术组(Sham组)及肾缺血-再灌注组(I/R组)和DMOG预处理组(DMOG+I/R组).采用夹闭双侧肾蒂30 min的方法建立小鼠缺血性急性.肾衰竭模型,DMOG注射6 h或缺血-再灌注24 h后采血并处死小鼠,全自动生化分析仪检测小鼠的肾功能,通过HE染色对肾组织病理学进行评分,免疫组织化学染色检测肾组织中波形蛋白的表达,TUNEL法检测细胞凋亡,Western blot方法检测肾HIF-1α活化情况.结果 DMOG组小鼠肾组织中HIF-1α的表达明显高于正常对照组(P＜0.01);DMOG+I/R组小鼠.肾功能病理学评分明显低于I/R未处理组[BUN,(26.3±6.5) vs (65.8±2.6);Scr,(27.0±14.1) vs (229.5±11.2),P＜0.01],DMOG+I/R组细胞凋亡程度和小管波形蛋白的表达较I/R组明显减少[(5.7±1.5) vs (23.3±2.1),P＜0.05;(12.9±5.7) vs (69.6±22.7),P＜0.01].结论 DMOG可通过诱导HIF-1α活化对缺血性急性肾衰竭小鼠发挥保护作用.     

葡萄糖转运蛋白对大鼠肾小球系膜细胞己糖胺通路的影响

目的探讨己糖胺通路(HBP)在葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)基因转染系膜细胞功能改变中的作用.方法利用逆转录病毒载体建立GLUT1基因转染的大鼠系膜细胞,以β-半乳糖苷酶转染细胞(MCLacZ)为对照.用2-脱氧-3H-葡萄糖(2-DG)测定细胞葡萄糖摄入,流式细胞仪分析细胞表型和纤维连接蛋白(FN)的合成,采用比色法测定HBP限速酶--谷氨酰胺6-磷酸果糖转氨酶(GFAT)的活性,RT-PCR检测细胞GFAT基因的表达.结果 MCGT1的2-DG摄入率明显高于MCLacZ[(741.0±60.5)dpm/μg蛋白质 vs (92.2±9.0)dpm/μg 蛋白质,P＜0.01],动力学分析发现MCGT1的Vmax是MCLacZ的3.7倍,而两者Km值无明显差别.MCGT1的GFAT活性明显高于MCLacZ[(3.25±0.25)OD365·μg蛋白质-1·30 min-1·10 vs (1.15±0.16)OD365·μg蛋白质-1·30 min-1·     

低氧在单侧输尿管梗阻大鼠模型肾间质纤维化中的作用初探

目的证实结扎致单侧输尿管梗阻（UUO）大鼠模型梗阻侧肾脏是否存在低氧,不同时间点低氧的特点及低氧与肾间质纤维化的关系。方法选用180g左右的雄性SD大鼠,随机分为8组,即假手术组（Sham组）、单侧输尿管结扎术后12h、24h、48h、3d、5d、7d和10d组,每组4只。除Sham组外,均结扎左侧输尿管建立UUO模型。各组大鼠处死前1．5h腹腔麻醉后,经阴茎静脉注射低氧探针（Hypoxyprobe^TM-,ChemiconInternational,Inc．）60mg／kg,然后开腹取左肾。对各组肾脏Masson三色染色后,半定量分析肾小管间质纤维化程度;用RT-PCR、Westernblot及免疫组织化学方法检测其转化生长因子（TGF）-β1表达,用免疫组织化学方法观察其低氧程度及分布。结果与Sham组比较,大鼠血肌酐自术后3d组即有不同程度的显著升高（P〈0．01）,血尿素氮自UUO后7d组出现显著升高（P〈0．01）,尿蛋白及血压则无显著差别。Masson染色显示肾小管间质纤维化的程度逐渐加重,术后10d组纤维化程度约增加了10倍。自术后48h组TGF-β1mRNA和蛋白水平均出现进行性上升,主要集中在小管上皮细胞。术后12h组,肾脏低氧的范围和程度有明显加重,免疫组织化学半定量分析表明在术后3d组达到高峰,并持续存在至10d组,主要集中在各种小管细胞。大鼠术后7d内,各组肾脏皮质区低氧程度与间质纤维化程度（r：0．821,P〈0．05）、TGF-β1mRNA（r：0．824,P〈0．05）、TGF-β1蛋白表达量（r：0．834,P〈0．05）之间存在显著相关性。结论UUO大鼠模型术后10d内梗阻侧肾脏持续存在低氧,很可能通过调节TGF-β1等细胞因子参与了梗阻侧肾脏间质纤维化的过程。     

特发性膜性肾病足细胞靶抗原的新认识

膜性肾病(membranous nephropathy,MN)是白种人群原发性肾病综合征最常见的病理类型,尽管有约1/3患者可自发缓解,但仍有约40%患者在10年后进入终末期肾病[1,2].     

5/6肾切除大鼠低氧诱导因子1α和2α在肾内的表达和定位

目的 探讨慢性肾脏病（CKD）进程中低氧诱导因子（HIF）的肾内表达部位和动态表达变化。 方法 雄性SD大鼠行5/6肾切除后,分别于术后第1、2、4、6、8和12周处死大鼠。采集血、尿和肾组织标本,PAS染色观察残肾病理改变;连续切片免疫组化染色观察HIF-1α、HIF-2α在肾脏中的表达部位;Western印迹检测二者的蛋白表达变化;RT-PCR检测靶基因血管内皮生长因子（VEGF）、血红素加氧酶1（HO-1）的mRNA水平变化。 结果 （1）大鼠5/6肾切除后第1周出现了短暂的急性肾衰竭[Scr（122.8±22.1） μmol/L],之后Scr下降并进入稳定的慢性肾衰竭阶段[（66.0±3.7）～（66.4±8.4） μmol/L],第6周后Scr进行性升高,残肾皮质出现进行性间质纤维化病变。（2）在肾切除早期阶段（术后第1周末）,HIF-1α和HIF-2α表达即开始增加,其中HIF-1α仅在萎缩扩张的肾小管上皮细胞表达,HIF-2α则表达于血管内皮细胞、间质成纤维细胞和小动脉的平滑肌细胞;至第4和6周,两者表达到达峰值;此后,伴随Scr升高和病理损伤加重,两者表达逐渐下降。（3）HIF靶基因VEGF、HO-1的mRNA在第4和第6周时呈暂时性的高表达。 结论 CKD早期肾脏皮质HIF蛋白高表达和靶基因转录增加可能是对肾内缺氧的代偿性反应;CKD终末期HIF表达进行性减少,其在CKD进展中的作用值得进一步研究。     

罗格列酮对两肾一夹高血压大鼠的降压作用

目的观察罗格列酮对两肾一夹高血压大鼠的降压作用,并探讨其与调节糖脂代谢的关系。方法两肾一夹高血压大鼠24只,随机分为未治疗组(2K1C)、罗格列酮5mg·kg-1·d-1组(RGL5)、罗格列酮20mg·kg-1·d-1组(RGL20)。另设一假手术组(SHAM)作为空白对照。每2周测一次收缩压、体重,共观察10周。干预前后采空腹静脉血查血清胆固醇、三酰甘油及葡萄糖。结果干预结束时,与2K1C组收缩压比,RGL5组无差异,RGL20组第二周开始降低(P<0.05);与2K1C组三酰甘油水平比,RGL5组、RGL20组均较低(P<0.05),但后两组之间三酰甘油水平无差异。结论罗格列酮5mg·kg-1·d-1对2K1C大鼠有降三酰甘油作用,但无降压作用。罗格列酮20mg·kg-1·d-1对2K1C大鼠有降三酰甘油作用,亦有降压作用,但其降压作用可能不完全依赖于其调节糖脂代谢的作用。