肝癌细胞HepG2间的P-糖蛋白传递作用

目的 探讨肝癌细胞株HepG2细胞间是否存在P-糖蛋白(P-gp)的传递及P-gp与多药耐药基因(mdrl)的关系.方法 将pSUPER.neo+GFP质粒转染至HepG2细胞(命名为HepG2/GFP),并与阿霉素耐药HepG2细胞(命名为HepG2/ADM)混合培养.激光共聚焦显微镜观察肝癌细胞间P-gp的传递.免疫磁珠法分离混合培养细胞,收集原HepG2/GFP细胞(命名为HepG2/aqMDR),采用Western blot分析HepG2、HepG2/ADM、HepG2/GFP,HepG2/aqMDR细胞的P-gP表达水平,同时应用实时荧光定量PCR分析这些细胞mdrl mRNA的表达水平.多样本均数比较用单因素方差分析,进一步两两比较用SNK-q检验. 结果荧光显微镜下可见大量带绿色荧光的稳定克隆.激光共聚焦显微镜下见HepG2/aqMDR细胞以黄色荧光为主,而HepG2/GFP以绿色荧光为主,HepG2/ADM以红色荧光为主.Western blot检测结果显示HepG2/aqMDR细胞中P-gp表达水平低于HepG2/ADM,但明显高于HepG2/GFP(q＝35.07,P<0.05)与HepG2(q=36.87,P<0.05).实时荧光定量PCR结果显示,HepG2/ADM细胞中mdrl mRNA表达水平较高,而HepG2/aqMDR、HepG2、HepG2/GFP三组细胞中mdrl的mRNA表达水平差异没有统计学意义(F＝2.30,P>0.05).结论 P-gP可以从耐药肝癌细胞传递至敏感肝癌细胞,这一现象为进一步研究肝癌多药耐药机制提供了新的思路.     

渐进性联合营养支持治疗在重症急性胰腺炎中的作用

目的探讨渐进性营养支持治疗对重症急性胰腺炎(SAP)的治疗效果,寻找合理的营养支持治疗方法。方法回顾性分析重庆市铜梁县人民医院和重庆医科大学附属第二医院130例SAP病例资料,其中普通营养支持治疗组(A组)59例,渐进性营养支持治疗组(B组)71例。对比两组病例治疗前后急性生理学与慢性健康状况Ⅱ(APACHEⅡ)评分、肝功能不全者比例、并发症率、死亡率、治愈率、平均住院时间和住院费用,部分病例(A组13例,B组18例)检测血清IL-6水平。结果(1)A-PACHEⅡ评分和IL-6水平:B组随治疗时间的延长,APACHEⅡ评分和IL-6水平均下降,治疗7、14 d后和A组比较差异均有统计学意义(P0.05);而A组的下降趋势缓慢。(2)肝功能不全者所占比例:入院时两组差异无统计学意义(P0.05),14 d后B组均低于A组,差异有统计学意义(P0.05)。(3)治疗14 d后B组的血清清蛋白水平(30.01±5.7)g/L与A组(29.7±4.2)g/L比较差异无统计学意义(P0.05)。(4)B组的并发症率、死亡率、平均住院时间和住院费用分别为39.4%、12.7%、(32±9)d、(30 869.4±12 794.6)元,低于A组的66.1%、30.5%、(53±11)d、(45 534.2±13 030.5)元(P0.05)。而B组治愈率(81.7%)高于A组(59.3%),差异有统计学意义(P0.05)。结论针对SAP患者采取相应渐进性联合营养支持治疗,可显著改善SAP患者的营养状况及预后,提高临床治疗效果,降低并发症率、死亡率,缩短住院时间,降低住院费用。     

抑制BCRP表达逆转肝细胞癌MDR的研究

目的：研究小片段RNA干扰对肝癌耐药细胞系HEPG2／ADM中BCRP基因及其蛋白产物BCRP表达的抑制作用和逆转其耐药性的效果。方法：构建针对BCRP基因pSUPER-RNAi质粒,转染肝癌耐药细胞HEPG2／ADM。通过RT-PCR和Western Blot在mRNA和蛋白水平评价RNAi对BCRP表达的影响。MTT法检测RNAi逆转HEPG2／ADM细胞耐药性的效果,按实验组和对照组细胞的半数抑制剂量（IC50）计算RNAi对各种细胞耐药倍数的改变。结果：在耐药肝癌细胞HEPG2／ADM中,RNAi明显抑制了BCRP mRNA和蛋白产物BCRP的表达水平,其表达仅为对照组细胞的22.55％和37.49％（P〈0.01）。在相同浓度化疗药物的作用下,RNAi组HEPG2／ADM细胞耐药性显著下降,对ADM的耐药逆转倍数为3.55倍。结论：针对多药耐药基因BCRP,RNAi具有强大的逆转肝癌耐药细胞HepG2多药耐药的作用,为从基因水平逆转MDR展示了良好的前景。     

雷贝拉唑三联疗法治疗幽门螺杆菌相关十二指肠溃疡的临床疗效

目的 探讨雷贝拉唑三联疗法治疗幽门螺杆菌相关十二指肠溃疡的临床疗效.方法 方便选取2015年6—12月该院消化内科收治的幽门螺杆菌阳性的十二指肠溃疡患者80例作为观察对象.采用随机数表法将所有患者分为观察组与对照组,对照组40例患者采用常规奥美拉唑、阿莫西林、克拉霉素药物治疗,观察组40例患者则采用阿莫西林、克拉霉素联合雷贝拉唑治疗,比较两组患者药物治疗效果,并对比两组患者幽门螺杆菌根除率,随访复发率以及不良反应发生结果 .结果 观察组患者治疗后的总有效率为95.00%、幽门螺杆菌根除率为90.00%,明显高于对照组的77.50%、72.50%(P<0.05),但两组患者不良反应发生率比较差异无统计学意义(P>0.05);并且随访1年结果 显示观察组患者幽门螺杆菌相关十二指肠溃疡复发率(5.00%)明显低于对照组复发率(25.00%),差异有统计学意义(P<0.05).结论 采用雷贝拉唑三联疗法治疗幽门螺杆菌相关十二指肠溃疡临床疗效显著,并且患者幽门螺杆菌根除率较高,治疗后不易复发,可作为幽门螺杆菌阳性的十二指肠溃疡患者首选药物治疗方案.     

早期炎性肠梗阻术后97例诊治分析

目的研究术后早期炎性肠梗阻的诊断以及治疗措施。方法回颐性分析我院收治的97例术后早期炎性肠梗阻患者的病例资料。结果85例患者经非手术治愈,平均治愈时间9．8d。12例中转手术治疗后治愈,其中8例非手术治疗时出现绞窄性肠梗阻而中转手术,4例非手术治疗40d无效而中转手术。结论术后早期炎性肠梗阻应仍以非手术治疗为主。小剂量低分子肝素、胃肠外营养及生长抑素的联合应用具有较佳的疗效。     

脱氧氮杂胞苷诱导HepG2细胞表达主要组织相容性复合体Ⅰ类分子A

Objective Major histocompatibility complex class I Crelated molecules A and B(MICA and MICB) are innate immune system ligands for the NKG2D receptor expressed by natural killer cells and activated CD8(+)T cells.Our previous study showed that 5-aza-2'-deoxycytidine(5-aza-dC),a DNA methyltransferase inhibitor,can induce the expression of MICB and sensitized cells to NKL-cell-mediated cytolysis.The aim of this study was to determine the expression level of MICA in HepG2 cells(an HCC cell line)and L02 cells(a normal liver cell),and to investigate the effect of 5-aza-dC on MICA expression in HepG2 cells.Methods Cells were treated with 5-aza-dC,caffeine and ATM-specific siRNA.The cell surface MICA protein on HepG2 cells and L02 cells was determined using flow cytometry.The mRNA level was detected using realtimeRT-PCR.Result MICA was undetectable on the surface of L02 cells,but was highly expressed on HepG2 cells.MICA expression was upregulated in response to 5-aza-dC treatment(P＜0.05),and the upregulation of MICA was partially prevented by pharmacological or genetic inhibition of ataxia telangiectasia mutated(ATM)kinase(P＜0.05).Conclusion Our data suggest that 5-aza-dC induces the expression of MICA by a DNA damage-dependent mechanism.     

红景天甙对HSC—T6细胞株Rho／ROCK信号通路影响的研究

目的:观察红景天甙对大鼠肝星状细胞株HSC-T6细胞增殖活化、胶原合成、Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶-I(Rho associated coiled coil forming protein kinase-Ⅰ,ROCK-Ⅰ)及基质金属蛋白酶抑制剂-1(Tissue inhibitor of metalloproteinases-1,TIMP-1)表达的影响并以ROCK特异性抑制剂Y-27632作为阳性对照,探讨红景天甙抗肝纤维化作用的分子机制.方法:MIT法检测HSC-T6细胞生长增殖;酶联免疫吸附(ELlsA)法检测HSC-T6 细胞上清Ⅰ型胶原含量;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测细胞α-平滑肌肌动蛋白(Alpha-smooth muscle actin,α-SMA)、ROCK-Ⅰ、TIMP-1mRNA的表达;Western blot 检测细胞α-SMA、ROCK-Ⅰ、TIMP-Ⅰ蛋白表达.结果:MTT检测显示红景天甙和Y-27632对HSC-T6细胞的生长增殖具有抑制作用,并呈剂量依赖性;ELISA结果提示红景天甙和Y-27632可抑制HSC-T6细胞I型胶原的分泌;Real-time PCR和Western blot结果表明红景天甙和Y-27632均能下调HSC-T6细胞ROCK-Ⅰ、TIMP-1和α-SMA的表达.结论:红景天甙可抑制HSC-T6细胞活化增殖.减少其Ⅰ型胶原分泌,其机制可能与抑制HSC-T6细胞的Rho/ROCK信号通路有关.     

脱氧氮杂胞苷诱导HepG2细胞表达主要组织相容性复合体Ⅰ类分子A

目的 观察主要组织相容性复合体Ⅰ类分子A(MICA)在HepG2与L02细胞株中表达的差异及脱氧氮杂胞苷(5-aza-dC)对HepG2细胞株MICA表达的影响,探讨毛细血管扩张性共济失调突变蛋白(ATM)依赖的DNA损伤途径与5-aza-dC调节MICA表达的关系. 方法同时接种并培养L02和HepG2细胞,在同一时间点收取细胞,流式细胞仪检测细胞膜MICA蛋白表达水平;不同浓度5-aza-dC(0.1,1.0,5.0mmol/L)作用于HepG2细胞不同时间(24、48、72、96h)后,定量PCR检测MICA mRNA水平以寻找5-aza-dC最佳作用浓度和时间;ATM特异性抑制剂咖啡因或RNA干扰技术干扰ATM表达,定量PCR检测细胞mRNA水平,流式细胞术检测细胞膜MICA蛋白表达水平.结果 数据比较采用Kruskal-Wallis和Mean-Whitney U方差分析.结果 流式细胞结果显示,HepG2细胞高水平表达MICA,而正常肝细胞L02几乎不表达MICA;5-aza-dC处理可上调HepG2细胞MICA的表达(X2=7.20,P＜0.05),这种上调作用可被ATM特异性阻滞剂咖啡因和ATM特异的小分子干扰RNA所阻断(U=0.00,P＜0.05).结论 MICA在正常肝细胞株中无表达,在肝癌细胞株中高表达;5-aza-dC可诱导HepG2细胞MICA的表达,其机制可能与5-aza-dC引起的ATM依赖的DNA损伤途径有关.