糖尿病足部非缺血性溃疡皮肤血管内皮生长因子受体3的表达☆

背景：糖尿病足部溃疡的发病机制和溃疡修复的机制尚不清楚，有研究表明和炎症反应延迟有关，而炎症和淋巴管形成关系密切。 目的：探讨糖尿病足部非缺血性溃疡淋巴管内皮标志物血管内皮生长因子受体3表达。 设计、时间及地点：分组对比观察，于2007-06/2008-05在南方医科大学南方医院内分泌代谢科完成。 材料：标本来自2007-05/2008-03南方医院内分泌代谢科、急诊科、创骨科患者自愿捐献皮肤组织。分为正常对照组10例，男6例，女4例，平均年龄（51.2±4.1）岁；非糖尿病足溃疡组10例，男6例，女4例，平均年龄（55.2±4.7）岁，溃疡出现时间为（67.3±10.1）d；糖尿病足溃疡组10例，男5例，女5例，平均年龄（52.3±4.7）岁，溃疡出现时间为（64.0±10.4）d。 方法：采用半定量反转录-聚合酶链反应的方法检测3组皮肤中血管内皮生长因子受体3mRNA的表达。采用免疫组织化学的方法检测以上3组皮肤中血管内皮生长因子受体3蛋白表达。 主要观察指标：①反转录-聚合酶链反应结果。②免疫组织化学各组阳性细胞定位，表皮组织中阳性细胞数量，真皮组织中积分吸光度值。 结果：与正常对照组比较，非糖尿病足溃疡组血管内皮生长因子受体3mRNA表达增加（P < 0.001），糖尿病足溃疡组表达减少（P < 0.001）。正常组皮肤表皮层基底层细胞中可见明显的阳性细胞，非糖尿病足溃疡组和糖尿病足溃疡组表皮层基底层细胞阳性信号消失。正常对照组、非糖尿病足溃疡组和糖尿病足溃疡组真皮组织中血管内皮生长因子受体3积分吸光度值比较，差异有非常显著性意义（82.800±1.643，179.400±2.608，71.800±3.347，P < 0.01）。 结论：糖尿病足非缺血性溃疡血管内皮生长因子受体3表达减少，提示淋巴管形成减少。     

晚期糖基化终产物对健康成人外周血单核细胞肿瘤坏死因子α和血红素加氧酶-1表达的影响

目的:探讨不同浓度晚期糖基化终产物(advanced glycation end-product,AGE)对健康成人外周血单核细胞肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)及血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)表达的影响。方法:分离健康成人外周血单核细胞,随机分组,利用不同浓度体外制备的AGE修饰牛血清白蛋白(AGE-BSA)刺激,观察不同时间点每组细胞培养上清液中TNF-α表达量及细胞内HO-1mRNA的表达。结果:AGE-BSA可增加健康成人外周血单核细胞TNF-α的释放并可诱导健康人外周血单核细胞内HO-1mRNA的表达。结论:AGE可上调健康人外周血单核细胞TNF-α和细胞内HO-1mRNA的表达。     

糖尿病足溃疡皮肤血红素加氧酶1表达的研究

目的 探讨血红素加氧酶1(HO-1)在糖尿病足溃疡皮肤中的表达.方法 RT-PCR检测非糖尿病的足溃疡(NDFU)组、糖尿病足溃疡(DFU)组、正常对照(NC)组皮肤HO-1mRNA的表达;免疫组化检测各组HO-1蛋白表达.结果 NDFU组、DFU组、NC组HO-1mRNA表达量分别为:1.880±0.033、1.797±0.024、1.399±0.039,三组间差异有统计学意义;NDFU组和DFU组比较,差异有统计学意义(P均<0.01).HO-1蛋白在NC组表达于表皮;在NDFU组和DFU组表皮和真皮炎症部位均有HO-1阳性细胞,且前者阳性细胞数量多于后者.结论 糖尿病足溃疡较非糖尿病的足溃疡皮肤组织HO-1表达降低.     

人胰岛新生相关蛋白基因的克隆及在毕赤酵母中的表达

目的 在毕赤酵母中分泌表达具有生物学活性的重组人胰岛新生相关蛋白(rhINGAP),用于INGAP的生理功能研究和动物试验.方法 通过PCR扩增INGAP基因,插入到重组质粒α/pUC18的α因子信号序列的Xho Ⅰ和EcoR Ⅰ酶切位点处,再将融合基因αINGAP重组到表达质粒pPIC9K的BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ之间,Sal Ⅰ酶切线性化重组质粒INGAP/pPIC9K,电穿孔转化毕赤酵母,营养缺陷型培养基MD和G418筛选含高拷贝表达盒的酵母转化子,PCR鉴定是否含有目的 基因INGAP,甲醇诱导rhINGAP的表达,SDS-PAGE和Western blotting鉴定目的 蛋白,用ELISA定量测定生物学活性.结果 成功构建了重组表达质粒INGAP/pPIC9K,筛选得到3个阳性转化子,表达产物具有良好的抗原活性.结论 实现了rhINGAP在毕赤酵母中的高效分泌性表达.     

人胰岛新生相关蛋白基因毕赤酵母表达载体的构建

目的 构建分泌表达具有生物学活性的重组人胰岛新生相关蛋白(rhINGAP)载体毕赤酵母.方法 通过PCR扩增INGAP基因,插入到重组质粒α/pUC18的α因子信号序列处,再将融合基因αINGAP重组到表达质粒pPIC9K,Sal Ⅰ酶切线性化重组质粒αINGAP/pPIC9K.电穿孔转化毕赤酵母,营养缺陷型培养基MD和G418筛选含高拷贝表达盒的酵母转化子,PCR鉴定是否含有目的 基因INGAP,甲醇诱导rhINGAP的表达,Western blotting鉴定目的 蛋白,ELISA法定量测定其含量.结果 重组表达质粒αINGAP/pPIC9K经酶切获得758bp片段,符合α因子与INGAP片段融合的长度,筛选得到3个阳性转化子,培养上清含有与抗INGAP抗体反应的蛋白.结论 成功构建了分泌INGAP蛋白的毕赤酵母菌株.     

糖尿病足部非缺血性溃疡皮肤血管内皮生长因子受体3的表达

背景:糖尿病足部溃疡的发病机制和溃疡修复的机制尚不清楚,有研究表明和炎症反应延迟有关,而炎症和淋巴管形成关系密切。目的:探讨糖尿病足部非缺血性溃疡淋巴管内皮标志物血管内皮生长因子受体3表达。设计、时间及地点:分组对比观察,于2007-06/2008-05在南方医科大学南方医院内分泌代谢科完成。材料:标本来自2007-05/2008-03南方医院内分泌代谢科、急诊科、创骨科患者自愿捐献皮肤组织。分为正常对照组10例,男6例,女4例,平均年龄(51.2±4.1)岁;非糖尿病足溃疡组10例,男6例,女4例,平均年龄(55.2±4.7)岁,溃疡出现时间为(67.3±10.1)d;糖尿病足溃疡组10例,男5例,女5例,平均年龄(52.3±4.7)岁,溃疡出现时间为(64.0±10.4)d。方法:采用半定量反转录-聚合酶链反应的方法检测3组皮肤中血管内皮生长因子受体3mRNA的表达。采用免疫组织化学的方法检测以上3组皮肤中血管内皮生长因子受体3蛋白表达。主要观察指标:①反转录-聚合酶链反应结果。②免疫组织化学各组阳性细胞定位,表皮组织中阳性细胞数量,真皮组织中积分吸光度值。结果:与正常对照组比较,非糖尿病足溃疡组血管内皮生长因子受体3mRNA表达增加(P<0.001),糖尿病足溃疡组表达减少(P<0.001)。正常组皮肤表皮层基底层细胞中可见明显的阳性细胞,非糖尿病足溃疡组和糖尿病足溃疡组表皮层基底层细胞阳性信号消失。正常对照组、非糖尿病足溃疡组和糖尿病足溃疡组真皮组织中血管内皮生长因子受体3积分吸光度值比较,差异有非常显著性意义(82.800±1.643,179.400±2.608,71.800±3.347,P<0.01)。结论:糖尿病足非缺血性溃疡血管内皮生长因子受体3表达减少,提示淋巴管形成减少。     

糖尿病足部慢性溃疡患者血清单核细胞趋化蛋白-1表达及其危险因素

目的探讨血清单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和糖尿病足部慢性溃疡延迟愈合的相关性以及其危险因素。方法观察对象共72例,分为3组:正常对照组(NC)、糖尿病患者组(DM)、糖尿病足部溃疡患者组(DF);采用ELISA的方法检测各组血清MCP-1的表达。甘油三酯和胆固醇采用生化自动分析仪,C肽采用化学发光法,糖化血红蛋白采用高效液相色谱法。结果3组血清MCP-1表达、空腹血糖之间比较差异有显著性(P<0·01),甘油三酯、收缩压、舒张压之间比较差异有显著性(P<0·05)。MCP-1表达量与空腹血糖、甘油三酯、糖化血红蛋白、餐后2hC肽以及溃疡持续的时间呈正相关(P<0·05)。结论单核细胞趋化蛋白-1和糖尿病足部慢性溃疡难愈合有关,并且和患者的空腹血糖、甘油三酯、糖化血红蛋白、餐后2hC肽以及溃疡持续的时间等呈正相关。     

重组葡激酶加中药对重症急性胰腺炎大鼠心肌核转录因子кВ的激活作用

[目的]研究重症急性胰腺炎(SAP)心肌功能损害时心肌核转录因子кВ(NF-кВ)的活化及葡激酶的干预作用.[方法]63只SD大鼠随机分为假手术组(n=9)、对照组(n=27)、葡激酶合用益活清胰汤治疗组(n=27),SAP模型采用5%牛磺胆酸钠胰胆管逆行注射方法建立.ELISA法测定6、12、24 h各时点血肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)水平,RT-PCR检测心肌NF-кВ mRNA的表达,免疫组化法检测心肌NF-кВ蛋白的表达,苏木精-伊红染色光镜下观察胰腺及心肌组织的病理变化.[结果]术后6 h大鼠心肌NF-кΒmRNA及其蛋白表达异常增高,TNF-α、IL-6呈进行性升高,治疗组用药后心肌NF-кВmRNA及蛋白表达下调,血TNF-α、IL-6明显下降,与对照组相比P＜0.05,治疗组胰腺及心肌组织的病理变化减轻.[结论]SAP大鼠心肌损伤可能与循环中TNF-α、IL-6水平升高导致的心肌NF-кВ活化有关,益活清胰汤合用葡激酶对SAP并发的心肌损伤具有防治作用.     

细胞凋亡调节基因在重症急性胰腺炎大鼠心肌组织中表达及益活清胰汤的干预作用

目的:观察重症急性胰腺炎(SAP)心肌功能损害时细胞凋亡调节基因在心肌组织中的表达及益活清胰汤的干预作用,进一步探讨SAP循坏功能障碍的发病机制.方法:63只SD大鼠随机分为假手术组(正常组,n=9)、对照组(n=27)及治疗组(n=27益活清胰汤组).SAP模型采用5%的牛磺胆酸钠胰胆管逆行注射方法建立.HE染色光镜下观察胰腺及心肌组织的病理变化,免疫组化法检测术后6 h、12 h、18 h各时点心肌Bcl-2、Bax及NF-kB的表达.结果:治疗组胰腺及心肌组织的病理变化减轻,SAP各时间点均可见NF-kB明显活化,治疗组各时间点NF-kB活化与对照组相比均明显减弱(P<0.05).术后6h各组Bcl-2、Bax无显著性变化(P>0.05),12 h、18 h对照组Bcl-2的表达较正常组及治疗组显著减少(P<0.05),12 h、18 h对照组Bax的表达较假手术组及治疗组显著增加(P<0.05).结论:SAP大鼠心肌NF-kB被激活,Bcl-2表达减少,Bax表达增加;应用益活清胰汤后NF-kB的活化及Bax的表达受到抑制,Bcl-2的表达上调,益活清胰汤对SAP大鼠心肌细胞调亡的具有抑制作用.     

骨髓干细胞动员与缺血心肌血管再生

目的：探讨动员急性心肌梗死大鼠骨髓干细胞归巢于梗死心肌后实现血管再生的能力。方法：实验选用10～12周龄的雄性Wistar(清洁级)大鼠60只，随机分为3组：急性心肌梗死+动员组、急性心肌梗死组及对照组，每组20只。结扎Wistar大鼠左冠状动脉制作心肌梗死模型，用骨髓干细胞动员剂粒细胞集落刺激因子动员自体骨髓干细胞释放并归巢于心肌梗死灶，于造模后24，48h和4周杀死大鼠，取出心脏，通过免疫组化方法观察心肌梗死灶、边缘区和正常心肌组织CD34阳性细胞、血管内皮生长因子及其受体的表达，以及Ⅷ因子表达，并应用流式细胞术比较动员前后外周血中CD34阳性细胞数量的变化。结果：急性心肌梗死+动员组大鼠造模24h，4周后外周血CD34细胞数量分别为(0．919&;#177;0．187)％，(0．834&;#177;0．110)％，明显高于造模前【(0.043&;#177;0．023)％】及心肌梗死组大鼠造模24h，4周后【(0．071&;#177;0.104)％，(0.062&;#177;0.296)％】(t=2.697，2.354，2.492，2.195，P&;lt;0.05)。急性心肌梗死+动员组大鼠心肌梗死区可见CD34阳性细胞浸润；制模后4周，急性心肌梗死+动员组微血管新生数明显多于急性心肌梗死组和对照组(t=3.125，3.308，P&;lt;0.01)。急性心肌梗死+动员组大鼠梗死灶及周围组织中血管内皮生长因子及其受体的表达量均明显高于急性心肌梗死组及假手术组(t=2．099～3．398，P&;lt;0．05)。结论：骨髓干细胞动员的方法在大鼠急性心肌梗死模型中，能通过动员内皮干细胞归巢于梗死灶内，有效促进微血管形成；还通过上调血管内皮生长因子及其受体的表达，促进血管再生，促进缺血心脏功能恢复。