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目的 在外泌体表面表达肝癌靶向肽SP94,并将生长分化因子15(GDF15)的siRNA包裹至外泌体中，研究其对肝癌的治疗作用。方法 首先设计合成GDF15的siRNA,转染Hepa1-6和H22细胞作为实验组，无靶向的siRNA作为对照组，通过实时定量PCR、蛋白免疫印迹和流式细胞术验证GDF15 siRNA的功能。再构建一个靶向肝癌的SP94-Lamp2b-HA质粒，转染入HEK293T细胞后提取工程化外泌体SP94-外泌体，用SP94-外泌体包裹GDF15 siRNA作为SP94-siRNA-外泌体实验组，空载SP94-外泌体作为空载对照组，通过尾静脉注射法将两组外泌体导入小鼠体内，研究小鼠原位肝癌模型的治疗效果，并对小鼠的生存期进行观察。另外，将SP94-siRNA-外泌体尾静脉注射入健康小鼠体内，观察器官变化情况，对比血液生物化学和炎性因子指标差异。结果 成功合成GDF15 siRNA,在转染Hepa1-6和H22细胞后，GDF15的mRNA和蛋白水平表达明显降低(P<0.05)。在对原位肝癌小鼠的治疗中，与对照组相比，实验组SP94-siRNA-外泌体明显抑制肿瘤的增... 相似文献
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目的 构建可以精准靶向胶质母细胞瘤(glioblastoma, GBM)的外泌体。方法 构建靶向GBM的Ang-Lamp2b-HA质粒，将Ang-Lamp2b-HA质粒和对照pcDNA3.1载体质粒分别转染入HEK293T细胞后提取工程化外泌体Ang-exo和对照未修饰外泌体Unmod-exo,使用蛋白免疫印迹技术观察两组外泌体标志蛋白表达情况，使用扫描电镜和纳米颗粒分析仪观察两组外泌体形态学表征。建立基于Transwell系统的bEnd.3/LN229体外血脑屏障模型，上下腔室分别接种bEnd.3细胞和LN229细胞，生成完整屏障后，分别在上腔室中加入已染色的Ang-exo和Unmod-exo,通过共聚焦激光扫描显微镜观察两组外泌体在下腔室中胶质瘤细胞荧光强度，验证Ang-exo穿透血脑屏障能力和靶向的能力。已染色的Ang-exo和Unmod-exo外泌体分别通过尾静脉注射入荷瘤小鼠模型，通过活体动物成像和离体器官成像观察两组外泌体在荷瘤小鼠体内荧光分布变化，验证其穿透血脑屏障能力和靶向效果。将Ang-exo与生理盐水分别尾静脉注射入健康小鼠体内，观察比较器官变化情况，对比血液生物化... 相似文献
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目的 观察敲低Geminin对人脑胶质瘤细胞放疗敏感性的影响。方法 利用GEPIA和CGGA数据库分析Geminin在脑胶质瘤组织中的表达及与生存期的相关性。实验分为两组：si-GL2组(对照组)和si-Gem组(干扰组),设计siRNA干扰序列(si-Gem)和阴性对照序列(si-GL2),分别转染脑胶质瘤细胞LN229和U87,qRT-PCR和Western blot检测转染效率及蛋白表达水平。流式细胞术检测碘化丙啶(PI)染色后DNA含量分布，进而分析敲低Geminin对DNA再复制的影响。通过AnnexinⅤ-FITC/PI法，用流式细胞术检测敲低Geminin对细胞凋亡的影响。CCK-8细胞增殖实验检测敲低Geminin对胶质瘤细胞LN229和U87放疗敏感性的影响。Western blot检测Geminin相关分子Cdt1和DNA相关损伤蛋白γ-H2AX的表达水平。结果 脑胶质瘤组织中Geminin的表达水平高于癌旁正常组织，且Geminin表达越高，脑胶质瘤患者预后越差(P<0.05)。与si-GL2组相比，si-Gem组Geminin在LN229和U87细胞中的表... 相似文献
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