血细胞分离机大量采集实验猕猴外周血单核细胞方法探讨

目的 使用COBE Spectra血液成分分离机大量采集实验猕猴外周血单核细胞(PBMCs),继而可从中分离得到外周血造血干细胞(PBSC),为进一步利用猕猴开展免疫学研究、基因治疗提供足够的目的 细胞,探讨采集的关键技术,建立安全、有效的采集方法.方法 体重为4-5奴的实验猕猴5只,采集前一个月内分3次进行自体或异体血液于4℃储备共120 mL,用于采集时填充管路.5只猴采集前接受rhGM-CSF 20μg/ks皮下注射动员4～5 d,麻醉动物后行股动脉穿刺,选择自动外周血干细胞收集程序(Auto-PBSC)进行采集.采集结束后管路中血液以10 mL/min回输给动物3～5 min.结果 生长因子连续注射第4天外周血白细胞数增至最高,收获细胞数量随循环血量和采集次数增加而增多.经动员的所有猴能够采集到需要的PBMC,最多达9.9×108,采集次数1～3次,循环血量达750～1420 mL,实验结束后1只猕猴因心脏衰竭死亡.结论 人用血细胞分离机可用于4～5 kg实验猕猴PBMC的大量采集.由于动物不同于人体,为保证采集成功需要选用适合于猕猴的程序,采集前做好储血和生长因子动员准备,稳定的麻醉保定,提高抗凝剂比例,积极处理并发症是关键.     

猕猴静脉注射自体RAK细胞剂量安全性研究

目的 通过对猕猴静脉注射自体RAK细胞,观察猕猴是否出现血管内细胞栓塞等现象,为评价在人体上回输RAK细胞安全性剂量提供依据.方法 随机选择健康雄性猕猴5只,进行自体RAK细胞静脉回输,观察动物在回输过程中及回输结束后14 d内动物的生理生化指标是否出现异常,是否出现血管栓塞现象.结果 自体RAK细胞回输后至观察期14 d结束,5只动物均存活,且精神状态良好,各动物的生理生化指标正常,无行为和体征异常出现.结论 猕猴静脉注射自体RAK细胞达到拟用临床剂量上限时不会引起毒性反应,不会引起血管内栓塞现象.     

联合重组人纤维连接蛋白活化的杀伤细胞过继性治疗肾癌的实验研究

目的 探讨肾癌患者外周血来源联合重组人纤维连接蛋白(RetroNectin)活化的杀伤细胞(RAK)体外杀伤肾癌细胞及裸鼠体内的抑瘤作用.方法 采用RetroNectin+抗人CD3单克隆抗体(CD3mAb)+白细胞介素2(IL-2)培养肾癌患者外周血分离出的单个核细胞,培养产生RAK细胞,流式细胞仪测定细胞表面标志CD3、CD4、CD8、CD25、CD16、CD56,酶联免疫吸附法(ELISA)检测RAK分泌的细胞因子,乳酸脱氢酶法(LDH)定量检测RAK细胞体外杀伤肾癌细胞的能力,观察体内治疗肾癌荷瘤鼠抑瘤作用.统计学分析RAK培养前后分泌细胞因子浓度及荷瘤鼠治疗前后瘤体积的差异.结果 体外培养14 d,肾癌RAK细胞数由1×107扩增至3.2×109,以CD3+CD8+细胞为主,占50%以上,CD25表达由5%上调至36%,且能分泌高水平干扰素γ(IFN-γ)和肿瘤坏死因子α(TNF-α),培养上清中IFN-γ浓度900 pg/ml,TNF-α浓度90 pg/ml.RAK治疗组荷瘤鼠肿瘤平均体积为259.6 mm3,对照组为932.1 mm3,差异有统计学意义(P＜0.05),抑瘤率72.1%.结论 利用RetroNectin可以使少量外周血来源的单个核细胞生成大量的RAK细胞,RAK可以在体外杀伤肾肿瘤细胞,并能在动物体内起到抑制肾肿瘤生长的作用.