脐血单个核细胞在半固体培养基中向神经元样细胞的分化

为观察脐血单个核细胞在甲基纤维素半固体培养基中的生长情况 ,常规方法分离脐血单个核细胞 ,接种于含 SCF、GM-CSF、G-CSF、IL-3、IL-6、EPO的甲基纤维素半固体培养基中培养。第 5 d发现有 6～ 10个细胞组成的小集簇 ,散在分布 ,细胞形态无变化。第 11d有神经元样细胞生长 ,与集簇并存。以后神经元样细胞逐渐生长 ,但集簇生长停滞 ,第 16d仍未发现集落形成。收集细胞 ,进行神经元特异烯醇化酶 (NSE)、神经丝蛋白 (NF)免疫细胞化学测定 ,显示少量神经元样细胞 NSE、NF阳性。该结果提示在半固体培养基中 ,脐血单个核细胞可向神经元样细胞分化 ,传统的用于集落培养的半固体培养基可能也适合脐血中其它细胞成分的生长     

γ-线照射对人树突状细胞表型及功能的影响

为了了解γ-线照射是否影响体外培养的树突状细胞的表型与功能，利用含rhGM-CSF(800U/ml)和rhIL-4(500U/ml）的RPMI1640培养基从多发性硬化症病人的外周血单个核细胞（PBMNC）中诱生树突状细胞（DC）。在培养的第6天加入5μg/ml的脂多糖继续培养24小时促使DC完全成熟。于第7天收获DC并等分成几部分，一部分未经γ-线照射的DC用作对照组，其他部分的DC分别用25Gy和30Gy剂量的γ射线照射。流式细胞术分析DC的表面分子并测定DC细胞刺激同源T细胞增殖的能力。结果表明，γ-线照射减少树突状细胞CD86，CD80和HLA-DR表达，尤其是CD86分子的表达（P=0.0072）。人DC能有效地刺激同源T细胞的增殖，但是同未经照射的DC相比，照射的DC刺激T细胞增殖的能力显降低。结论：γ-线照射不仅影响DC的表型，而且影响它的功能。     

HLA-DRB1等位基因多态性与慢性髓性白血病易感性关联的研究

为了探讨慢性髓性白血病(CML)易感性与HLA-DRB1等位基因多态性之间的关联性,试图找出慢性髓性白血病的易感基因。采用序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)DNA分型技术对48例CML患者和105例健康人对照组进行了HLA-DRB1基因分型。结果显示,CML与HLA-DR4基因关联,基因频率为22.9％,RR=5.076,x~2=17.88,P<0.01;其它等位基困频率在CML组与对照组间差异无显著性。提示在河南汉族人群中,HLA-DR4与CML有关联。     

人骨髓间充质干细胞源性多巴胺神经元的结构和功能特征

背景：研究人骨髓间充质干细胞定向分化为多巴胺神经元及分化后细胞的功能特征，对细胞移植治疗包括帕金森病在内的神经精神性疾病具有重要临床意义。 目的：采用脑源性神经营养因子、forskolin及多巴胺联合诱导人骨髓间充质干细胞向多巴胺神经元定向分化，观察诱导产生的多巴胺神经元的结构和功能。 设计：随机对照观察。 单位：郑州大学及河南大学。 材料：实验于2005-03／2006-09在郑州大学和河南大学实验室完成。实验用骨髓取自15名健康志愿者。脑源性神经营养因子、多巴胺、forskolin及单克隆抗体酪氨酸羟化酶为美国Sigma公司产品。 方法：①通过密度梯度离心获取人骨髓中的单个核细胞，贴壁培养纯化骨髓间充质干细胞。采用50μmol／L脑源性神经营养因子，10μmol／L forskolin和10μmol／L多巴胺联合对骨髓间充质干细胞进行诱导。②诱导2周后应用电子显微镜观察细胞超微结构；免疫细胞化学染色检测神经元烯醇化酶（NSE）和酪氨酸羟化酶（TH）的表达；采用RT-PCR检测多巴胺神经元分化过程中转录因子Nurrl，Ptx3，Lmx1b及酪氨酸羟化酶mRNA表达；同时以未诱导的细胞为对照，应用高效液相色谱检测细胞多巴胺的释放水平。 主要观察指标：①细胞超微结构。②NSE和TH的表达变化。③细胞内关键转录因子及酪氨酸羟化酶mRNA变化。④细胞释放多巴胺情况。结果：①细胞超微结构：诱导2周后细胞胞浆中有大量密集的呈扁平囊状的粗面内质网及其间的一些游离核糖体以及神经微丝的形成。②NSE和TH表达的变化：免疫细胞化学染色结果表明诱导分化后NSE和TH阳性细胞的表达随诱导时间的延长逐渐增高（P〈0．001）。③细胞内酪氨酸羟化酶及关键转录因子变化：RT-PCR结果显示细胞均可表达Nurrl，Ptx3，Lmx1b和酪氨酸羟化酶的mRNA。④细胞释放多巴胺情况：诱导2周后的细胞多巴胺释放水平高于未经诱导的细胞，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：脑源性神经营养因子、forskolin及多巴胺可在体外诱导人骨髓间充质干细胞向多巴胺神经元分化，并具有多巴胺神经元的结构和功能特征。     

Gamma射线照射对体外培养人树突状细胞表型的影响

目的：了解Gamma射线照射是否影响体外培养的人树突状细胞的表型。方法：利用含有重组的人GM－CSF（800U／ml)和IL－4（500U／ml)的RPMI 1640培养基从人的外周血单个核细胞（PBMC）诱生树突状细胞（DC）。在培养的第6d加入5mg/L的脂多糖（LPS）继续培养24h促使DC完全成熟，于第7d收获DC并分成2部分，一部分未经Gamma射线照射的DC用作对照组，另一部分的DC用30Gy剂量的Gamma射线照射。采用流式细胞仪分析DC的表面分子。结果：Gamma射线照射减少树突状细胞CD86，CD80和HLA－DR，尤其是CD86分子的表达（P＝0.0072)。结论：Gamma射线照射影响DC的表型。     

不同状态乙型肝炎病毒感染患者血清中HBV DNA定量聚合酶链反应测定

目的 :采用荧光定量聚合酶链反应 (FQ -PCR)测定不同状态乙型肝炎患者血清中乙型肝炎病毒 (HBV)的载量 ,为乙型肝炎的临床诊断、病程判断和治疗提供参考。方法 :采用实时定量PCR方法 ,检测不同病程状态的乙肝患者血清样本 1 90份 ,其中HBeAg阳性的慢性乙型肝炎 (CHB)患者 2 5例 4 7份样品 ,HBeAg阴性的 4例CHB患者 4份样品 ,接受α-干扰素治疗后发生HBeAg血清学转归的患者 5例 4 0份样品 ,非活动性HBV携带者 37例 5 7份样品。由CHB康复患者 2 1例 4 2份样品。结果 :HBeAg阳性的CHB血清中HBVDNA水平为 8.3× 1 0 8拷贝 /ml,明显高于HBeAg阴性的CHB患者 (7.0× 1 0 6拷贝 /ml)和HBeAg血清转归患者HBVDNA水平 (6 .2× 1 0 3 拷贝 /ml)以及非活动性HBsAg携带者HBVDNA水平 (5 .6× 1 0 3 拷贝 /ml)。乙型肝炎康复者中未检出HBVDNA。结论 :定量PCR方法可以作为确认HBV感染不同状态的一种有效手段     

Gamma射线照射对人树突状细胞表型及功能的影响

Ｇａｍｍａ照射通常被用来处理混合淋巴细胞反应 (ＭＬＲ)中刺激细胞进而获取单向性的应答 ,本研究探讨了Ｇａｍｍａ射线对人树突状细胞 (ＤＣ)表型与功能的影响。肝素抗凝人外周血 11份 ,每份 2 0～30ｍｌ,经密度梯度离心分离单个核细胞(ＰＢＭＣ) ,在含有 5 0ＩＵ ｍｌ青霉素、5 0 μｇ ｍ1链霉素、1%非必需氨基酸、2ｍｍｏｌ Ｌ谷胺酰胺及 10 %胎牛血清的ＲＰＭＩ 16 40培养基中 ,置 37℃ ,5 %ＣＯ2 2ｈ后移去非贴壁的细胞 ;贴壁细胞用含有重组的人ＧＭ ＣＳＦ ( 80 0Ｕ ｍｌ)和ＩＬ 4 ( 5 0 0Ｕ ｍｌ)的ＲＰＭＩ 16 40培养基中培养 7ｄ…     

HLA—DR基因分型中三种DNA提取法的比较

目的：寻找简便快速的ＨＬＡ－ＤＲ基因分型方法。方法：比较了标准酚－氯仿抽提法、ＮＰ－４９０法及快速盐析法抽提ＤＮＡ对ＨＬＡ－ＤＲ基因分型的影响。结果：３种方法抽提的ＤＮＡ含量、纯度、琼脂糖凝胶电泳结果及用于ＨＬＡ－ＤＲ基因分型的效果无差异,但酚－氯仿抽提法抽提ＤＮＡ所需时间比ＮＰ－４０法及快速盐析工。结论：ＮＰ＝４０法及快速盐析法可作为ＨＬＡ＿ＤＲ快速基因分型时提取ＤＮＡ的方法。     

HLA-DR快速基因分型PCR-SSP方法的建立

目的：探讨应用于器官移植配型及疾病相关性分析的方法及基本数据,建立一种高分辨率、高特异性、简单、快速、方便的ＨＬＡＤＲ基因分析方法。方法：利用ＤＲ１～ＤＲ１８序列特异性引物及１对内对照引物,采用序列特异性引物聚合酶链式反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎｓｅｑｕｅｎｃｅｓｐｅｃｉｆｉｃｐｒｉｍｅｒｓ,ＰＣＰＳＳＰ）技术对２２份国际标准细胞株ＤＮＡ及２０例未知ＤＲ型别的临床血液标本进行ＨＬＡＤＲ基因分析,扩增条件为：变性９４℃,６０ｓ;退火６５℃,６０ｓ;延伸７２℃,６０ｓ。２５个循环后,７２℃保温７ｍｉｎ。结果：对各个标准ＤＮＡ的分型结果显示,准确率及重复率均为１００％,无假阳性及假阴性。结论：该方法快速、简便、灵敏、重复性好,结果易于判断,适合临床器官移植组织配型、疾病相关性分析、法医鉴定及人类学研究等。     

HLA-DRB1基因多态性与河南汉族人群急性淋巴细胞白血病关联分析

目的 :探讨急性淋巴细胞白血病 (ALL)易感性与HLA DRB1基因多态性之间的关联性 ,找出ALL的易感基因。方法 :采用序列特异性引物聚合酶链反应 (PCR SSP)DNA分型技术对 5 6例ALL患者和 10 5例健康对照组进行了HLA DRB1基因分型。结果 :ALL组与HLA DR7基因关联 ,基因频率为 2 4.1% ,RR =2 .5 6 ,χ2 =7.34 ,P <0 .0 1,病因分数为 0 .2 9;其他等位基因频率ALL组与对照组间差异无显著性。结论 :HLA DR7与ALL有关联