耐碳青霉烯类药物肺炎克雷伯菌感染的危险因素分析

目的探讨耐碳青霉烯类药物肺炎克雷伯菌(CRKP)感染的危险因素,为临床预防和控制CRKP感染提供参考依据。方法选取本院2014年1月-2016年12月CRKP感染患者76例作为疾病组,根据菌种分离部位和科室,按1∶2匹配对碳青霉烯类药物敏感的肺炎克雷伯菌(CSKP)感染患者作为对照组,对2组患者进行回顾性对照分析研究。应用SPSS 22.0软件对CRKP感染的危险因素进行单因素和多因素Logistic回归分析。结果 CRKP组患者死亡率明显高于CSKP组,差异有统计学意义(P0.05)。多因素Logistic回归分析显示,CRKP感染的OR值及95%CI为APACHEⅡ评分为2.130(1.731~3.726),分离出Kpn前使用碳青霉烯类药物为7.115(4.504~9.230),使用抗生素种类≥3种为2.250(1.312~4.413),使用抗生素≥7 d为3.012(1.661~6.102),气管插管为2.754(1.304~4.074),入住ICU时间为3.133(2.026~5.216)。结论 APACHEⅡ评分高、分离出Kpn前使用碳青霉烯类药物、抗生素使用≥3种、抗生素使用≥7 d、气管插管和入住ICU时间长是感染CRKP的独立危险因素。     

钝性创伤后的腹膜后血肿

Maryland 休克创伤中心在1983～1988年收治1787例腹部钝性伤,其中发生腹膜后血肿(RPH)233例(13%),其治疗原则为(1)第1区(中央部)RPH应手术探查以排除火血管、胰或十二指肠创伤;(2)第2区(胁部)有膨胀性或搏动性血肿,或有尿外溢者给予探查;(3)第3区(盆腔)一般不予探查,除非有明确的大血管破裂或压迫止血后病情仍恶化。同时有一个区以上的 RPH 则列为第4区。剖腹探查是诊断 RPH 的主要方法(占73%),发现1、2、3和4区 RPH 分别占14%、37%、46%和3%。使用诊断性腹腔灌洗(DPL)168例,阳性结果125例,假阳性28例。81例探查了血肿(35%),第1区最常见大血管损害(21%),第2区最常见肾损伤(27%)。第2区右侧 RPH 伴胰或十二指肠损伤(14%).122例伴腹腔内脏器损伤,计肝65例、脾64例、空腔脏器49例、肠系膜31例、横膈19例和卵巢4例.在188例存活24小时以上伤员中,共发生并发症110例(59%),计 ARDS 76例、急性肾小管坏死42例、肝功能衰竭10例、DIC 9例和胃出血2例,并发感染46例、肺栓塞8例和胰腺炎7例。死亡91例(39%),其中半数在入院后24小时内死亡。总的死亡原因为多器官衰竭37例、休克33例和头     

融合免疫佐剂Lipo多肽与包膜蛋白EDⅢ区的登革病毒四价疫苗的构建及免疫效应研究

目的构建编码免疫佐剂Lipo多肽与登革病毒1-4型包膜蛋白EDIII区的重组甲病毒载体,并在小鼠体内研究其免疫效应,为研制新型的登革病毒四价疫苗奠定基础。方法先通过GS linker将编码免疫佐剂Lipo多肽的基因序列与编码登革病毒1-4型包膜蛋白EDIII区的基因序列进行串联获得LipoEDIII;然后将LipoEDIII基因插入甲病毒载体DREP的多克隆位点,构建重组甲病毒载体DREP-LipoEDIII;将DREP-LipoEDIII转染293细胞,Western blot检测融合蛋白的表达;随后将DREP-LipoEDIII免疫ICR小鼠,不加任何佐剂,再加强免疫2次后,通过ELISA检测血清中的抗体效价和细胞因子的分泌情况来评价其免疫效应。结果成功构建了含有"融合免疫佐剂Lipo多肽与包膜蛋白EDIII区"的重组甲病毒质粒DREP-LipoEDIII。DREP-LipoEDIII免疫小鼠后可以诱导产生特异性抗体,抗体效价为1∶160。抗原刺激小鼠脾淋巴细胞可以产生IFN-r、IL-4、IL-10细胞因子,实验组的浓度明显高于对照组。结论在不需要加入任何外源佐剂的情况下,本研究构建的融合免疫佐剂Lipo多肽的登革四价疫苗能够诱导小鼠产生特异性的体液和细胞免疫应答,且以细胞免疫应答为主,为今后新型登革病毒四价疫苗的研究奠定了基础。     

重组登革病毒1-4型包膜蛋白EDIII的融合表达和免疫学特性研究

目的：构建含登革病毒（DENV）1-4型包膜蛋白（E蛋白）EDIII区的融合蛋白,并通过动物实验分析该融合蛋白的免疫机制。方法：通过生物信息学分析获得具有广泛代表性的DENV 1-4型EDIII区的氨基酸序列;将编码DENV 1-4型EDIII区的基因序列通过GS linker进行串联后插入原核表达载体pColdIII的多克隆位点,并将构建的重组质粒pColdIII-EDIII转化至大肠杆菌BL21（DE3）;通过SDS-PAGE及Western blot法鉴定目的蛋白表达,采用镍柱亲和层析法纯化目的蛋白。将纯化的蛋白免疫BABL/c小鼠,初次免疫之后再加强免疫2次。通过ELISA法检测血清中的抗体效价和细胞因子的分泌情况来评价其免疫效应。结果：重组蛋白EDIII免疫小鼠后可以诱导产生高滴度的特异性抗体,抗体效价为1:40 000。抗原刺激小鼠脾淋巴细胞可以诱导Th1和Th2细胞免疫应答。结论：成功表达了含DENV 1-4型E蛋白EDIII的融合蛋白,并通过动物实验证实该融合蛋白能诱导小鼠产生特异性的体液和细胞免疫应答,为DENV四价重组疫苗的研制奠定了基础。     

天花粉蛋白基因的克隆及其诱导大肠癌细胞LoVo凋亡的作用

 目的 克隆天花粉蛋白（trichosanthin,TCS）基因及研究重组TCS诱发大肠癌细胞LoVo凋亡的作用。方法 RT-PCR法克隆TCS基因的cDNA序列并表达纯化TCS;MTT法测定TCS对LoVo细胞生长抑制作用,评估TCS体外诱导LoVo凋亡的作用;琼脂糖凝胶电泳法进行细胞凋亡DNA分析。结果 成功克隆了TCS基因,TCS对LoVo细胞体外生长具有抑制作用,DNA电泳呈梯状条带,表明TCS对LoVo细胞确实存在诱导凋亡作用,TCS对LoVo细胞半数抑制浓度（IC50）为45.0 μg/mL。结论 TCS体外能抑制LoVo细胞生长并诱导细胞凋亡,为今后TCS应用于大肠癌的临床治疗提供了重要的实验依据。