吸入式气管滴注法的建立

目的:建立一种廉价、高效的呼吸道给药或染毒方法。方法:24只雄性BALB/c小鼠随机平均分为两组,分别进行鼻腔滴注和吸入式气管滴注。24只雄性SD大鼠随机平均分为两组,分别给予非暴露式气管滴注和吸入式气管滴注。小鼠每只滴注50μL生理盐水,大鼠每只滴注100μL生理盐水;每组中取1只动物按相应方法滴注用生理盐水配制的含体积分数50%的蓝墨水,解剖观察肺部形态,评价滴注效果;记录操作时间(从麻醉结束至滴注完成)和成功率。结果:小鼠鼻腔滴注的操作时间为(92.6±5.4)s,吸入式气管滴注操作时间为(25.2±4.0)s;大鼠非暴露式气管滴注操作时间为(102.6±6.5)s,吸入式气管滴注操作时间为(39.9±3.3)s;吸入式气管滴注操作时间均明显较短(t=35.042、29.849,P<0.001)。吸入式气管滴注组小鼠和非暴露式气管滴注组大鼠的肺组织散在分布蓝色印迹,而鼻腔滴注组小鼠的肺部着色不明显;鼻腔滴注和吸入式气管滴注的成功率为100%,而非暴露式气管滴注的成功率为83.7%。结论:吸入式气管滴注兼具廉价、快捷、无创、高效的优点,可广泛应用于呼吸道给药或染毒实验以及疾病模型的建立。     

柯萨奇病毒A组19型VP1蛋白生物信息学分析

目的 分析柯萨奇病毒A组19型(coxsackievirus A19,CVA-19)VP1蛋白的理化性质、结构功能并预测其线性B细胞表位和T细胞表位。方法 应用ProtParam分析CVA-19 VP1蛋白的理化性质;ProtScale预测其亲疏水性;使用SignalP 6.0、DeepTMHMM、NetPhos-3.1和Motif Scan分别预测CVA-19 VP1蛋白的信号肽、跨膜结构域、磷酸化位点和脂酰化位点;利用NetCGlyc-1.0、NetNGlyc-1.0和NetOGlyc-4.0分别预测CVA-19 VP1蛋白的C-甘露糖基化位点、N-糖基化位点和O-N-乙酰半乳糖胺(N-acetylgalactosamine, GalNAc)(粘蛋白型)糖基化位点;通过SOPMA和SWISS-MODEL在线工具分别预测CVA-19 VP1蛋白的二级结构和三级结构;使用网络服务器IEDB、Bepipred 3.0、ABCpred和SVTMrip联合预测其线性B细胞表位;应用IEDB和SYFPEITHI综合预测其T细胞表位。结果 CVA-19 VP1蛋白的分子质量为33.099 ku,...     

肠道病毒感染致神经损伤小鼠脑组织NOD样受体蛋白3的表达

目的:探讨NOD样受体蛋白3(NLRP3)在肠道病毒(EV)感染导致的神经损伤中的作用.方法:30只BALB/c小鼠分为对照组、肠道病毒(EV)71组和柯萨奇病毒A组2型(CVA2)组,每组10只.EV71组和CVA2组小鼠分别经腹腔注射EV71或经肌内注射CVA2,观察临床症状和生存情况.感染后第7天,采用HE和尼氏...     

中国柯萨奇病毒A组2型的遗传进化分析

目的  探讨中国柯萨奇病毒A组2型(coxsackievirus A2, CV-A2)毒株的遗传进化特征。方法  收集中国CV-A2毒株的VP1区及全基因序列,采用MEGA 10.2.4软件构建系统进化树并开展氨基酸位点突变分析,采用SimPlot 3.5.1软件进行基因重组分析。结果  共收集到118条VP1序列和26条全基因序列。CV-A2毒株主要来源于广东省,毒株数量自2011年开始迅速增多。基于VP1序列构建的进化树有7个分支,原型毒株为独立A组,多数CV-A2毒株聚集于G组。具有全基因组序列的CV-A2代表株的基因重组分析显示毒株间存在基因重组。另外,VP1氨基酸序列共有22个突变位点。结论  中国流行的CV-A2毒株已发生较明显的基因重组和VP1区域氨基酸位点突变,监测CV-A2的演化对于手足口病的防控具有重要意义。     

中国柯萨奇病毒A组6型分离株全基因序列特征分析

目的  分析中国2007-2019年柯萨奇病毒A组6型(coxsackievirus A6,CVA6)毒株遗传进化规律,以期为疾病预防及疫苗研发提供理论依据。方法  收集中国截至2021年3月1日Genbank数据库中454株CVA6毒株全基因序列,分析毒株分离年份、地区信息,构建系统发育树揭示进化规律并进行基因重组分析。结果  地区信息显示,毒株主要分布于中国沿海及南方地区,时间信息表明,自2013年起,CVA6毒株报告数量逐渐增加。系统进化结果表明,454株CVA6毒株分10个分支,A分支中3株分离自江西省的毒株与CVA6原型毒株Gdula(AY421764)亲缘关系极为接近,核酸序列相似度近乎100%,J分支是中国流行最广泛的毒株群,包含了中国较多省份如山东省、广东省等。基因重组分析显示,基因重组现象较为普遍,大部分CVA6代表毒株在P2区和P3区与其他肠道病毒A组毒株之间存在基因重组现象。结论  2007-2019年CVA6毒株在中国广泛传播,毒株间基因重组现象普遍存在。     

SARS-CoV-2 Nsp8基因及蛋白分子特征探讨

目的  SARS-CoV-2感染不仅引起呼吸系统病变,且可能累及生殖系统及中枢神经系统。本研究探讨SARS-CoV-2 nsp8基因变异、Nsp8蛋白结构与生物学功能及靶向药物,为建立更有效的防控策略奠定基础。方法  采用生物信息学技术和大型生物数据库,分析nsp8基因变异性、Nsp8理化特征、空间结构、抗原表位、生物功能、药物结合靶点等。结果  基于3种28株冠状病毒的nsp8序列构建了进化树;SARS-CoV-2毒株间nsp8基因保守性为99%~100%,与SARS遗传距离较MERS近;Nsp8无信号肽及跨膜区;在体外网织红细胞内半衰期为4 h,具有亲水性;获得Nsp8二级和三级结构模型;Nsp8具有线性B细胞和CTL细胞抗原表位、磷酸化及SUMO修饰位点;从DrugBank数据库筛选出可靶向结合Nsp8的四种药物。结论  Nsp8具有典型抗原分子特征,参与病毒复制,且同种不同株nsp8基因高度保守,在病毒致病机制、分型及防治研究中具有应用潜力。在全球亟需新型冠状病毒肺炎特效防治措施的状况下,靶向结合Nsp8的化疗药物具有重要科学意义和应用价值。     

河南省2012-2023年儿童青少年病毒性脑炎的流行病学特征分析

目的 分析2012-2023年河南省儿童青少年病毒性脑炎流行特征及其时空变化趋势分布。方法 以河南省儿童医院/郑州儿童医院（国家儿童区域医疗中心）为研究现场,收集入院时间为2012年10月1日至2023年7月26日的病毒性脑炎病例信息,分析病例的时空分布特征、重症发生率、年龄构成、病原构成和影像学检查结果的情况。结果 本研究排除信息不全的病毒性脑炎病例后共纳入6 276例。病例主要来源于郑州市（38.96%）,其次分别为周口市（9.93%）、许昌市（8.68%）、驻马店市（7.90%）和平顶山市（7.39%）。病例中男性占62.13%,女性占37.87%,7~13岁病例数最多（72.45%）。2012-2023年总体重症率为4.51%,不同地区、年份的重症构成比差异有统计学意义（χ²=5.33,P=0.021; χ²=48.14,P<0.001）。病原分型中肠道病毒构成比最大（31.57%）,其中柯萨奇病毒居多（58.37%）。影像学检查结果表明,儿童青少年患病毒性脑炎大脑半球的损伤最常见（54.93%）。结论 2012-2023年河南省病毒性脑炎病例中男性较多,7~13岁儿童青少年为主要发病人群,肠道病毒尤其是柯萨奇病毒感染应当引起重视,在诊断病毒性脑炎后要特别注意预防大脑半球的损伤。     

血管紧张素转化酶2参与臭氧暴露导致的小鼠肺部炎症及气道重塑

目的 研究血管紧张素转换酶2（ACE2）在臭氧暴露致小鼠肺部炎症及气道重塑中的作用。方法 16只野生型（WT）C57BL/6J小鼠和16只ACE2 敲除（KO）小鼠分别暴露于空气和臭氧（0.8 ppm）中,每天暴露3 h,连续暴露5 d。分别设置AirWT组,Air KO组,Ozone WT组和Ozone KO组。Masson染色观察小鼠肺组织胶原沉积情况,HE染色观察小鼠肺部病理学改变,并进行评分;收集小鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）,并进行细胞计数;分别采用BCA法和酶联免疫吸附法（ELISA）测定BALF总蛋白和细胞因子浓度;荧光定量PCR检测肺组织中气道重塑相关指标的mRNA表达;小鼠的气道阻力采用小动物呼吸机测量（乙酰甲胆碱激发）。结果 臭氧暴露ACE2 KO小鼠肺组织炎症病理学变化总分显著高于臭氧暴露WT小鼠（P<0.05）。Masson染色结果显示,臭氧暴露小鼠肺组织支气管和肺泡周围有大量的胶原沉积,臭氧暴露ACE2 KO小鼠肺组织的支气管和肺泡的胶原沉积阳性区域面积为（19.62±3.16）%、（21.63±3.78）%,高于臭氧暴露 WT 小鼠肺组织的（6.49±1.34）%、（4.44± 0.99）%,两者差异具有统计学意义（P<0.05）。臭氧暴露ACE2 KO小鼠BALF中总细胞数与总蛋白含量均高于臭氧暴露WT小 鼠,差异无统计学意义（P>0.05）。臭氧暴露ACE2 KO小鼠BALF中IL-6、IL-1β、TNF-α、趋化因子（C-X-C基序）配体1（CXCL1/KC）和单核细胞趋化蛋白（MCP-1）水平均高于臭氧暴露WT小鼠,其中IL-1β水平的变化差异具有统计学意义（P<0.05）。臭氧暴露 ACE2 KO 小鼠的肺组织中的基质金属蛋白酶 9（MMP-9）、MMP-13、金属蛋白酶组织抑制剂（TIMP4）、Ⅰ型胶原α1 （COL1A1）、TGF-β的mRNA水平均明显高于WT组小鼠,两组的MMP-9、TIMP4、COL1A1、TGF-β的mRNA水平差异具有统计学意义（P<0.01）。两组小鼠在0、10、25、100 mg/mL的乙酰甲胆碱浓度下的气道阻力的差异无统计学意义（P>0.05）。结论 ACE2参与臭氧暴露导致的小鼠肺部炎症及气道重塑。     

新型冠状病毒肺炎确诊患者首发临床症状分析

目的:探索适用于新型冠状病毒肺炎(新冠肺炎)疫情监测的临床症状指标。方法:收集2020年1月9日0:00至2020年9月21日24:00全国各级卫生健康委员会官方网站公布的、报告了临床症状的4 672例确诊病例信息,分析临床症状分布情况。结果:4 672例中,临床症状顺位前三分别是发热(77.7%)、咳嗽(33.9%)和乏力(9.5%)。与男性相比,女性发热和乏力比例更低,咽部不适和鼻塞或流涕比例更高(P<0.05)。各年龄组发热和咳嗽均最常见。老年人(≥71岁)气促/胸闷和恶心/呕吐比例更高(P<0.001),而乏力、气促/胸闷和恶心/呕吐在未成年人(<18岁)中比例更低(P<0.05)。单一症状、两种症状和三种症状作为自主健康监测的最佳指标分别是发热(77.7%)、发热或咳嗽(91.7%)和发热、咳嗽或咽部不适(94.0%)。结论:发热和咳嗽可作为新冠肺炎疫情早发现的监测指标。