丙型肝炎患者血清抗核抗体的测定及临床研究

目的 评估慢性丙型肝炎(CHC)患者抗核抗体(ANA)的阳性率,同时探讨CHC患者ANA与肝功能及临床指标的关系.方法 选择2006年1月～2007年5月北京佑安医院住院的慢性丙肝患者共105例,测定血清ALT、AST、TBiL、ALB、ANA、HCV-RNA水平.结果 ANA阳性率为26.7% (滴定度>1∶100),ANA阳性患者年龄较阴性患者大(55.29岁±9.39岁 vs 47.24岁±15.09岁,P=0.01).而在性别、丙肝病毒定量、ALT、AST、TBiL和ALB上差异不显著.结论 ANA在慢性丙肝患者检出率与年龄关系密切,年龄越大ANA阳性率越高.与患者肝功水平、病毒的复制与否无关.     

HCV/HBV共感染者抗病毒治疗疗效分析

目的探讨干扰素(IFN)联合利巴韦林治疗丙型肝炎病毒/乙型肝炎病毒(HCV/HBV)共感染患者的疗效。方法46例HCV/HBV共感染者、56例单独HCV慢性感染者及60例单独HBV慢性感染者使用聚乙二醇干扰素α-2a(其中HCV/HBV共感染者及单独HCV慢性感染者联合利巴韦林)治疗48周,停药随访24周,分析疗效。结果治疗后,HCV/HBV共感染者取得持续病毒学应答(SVR)13.04%与单独HCV慢性感染者取得SVR(48.21%)的差异有统计学意义(OR值:6.207,95%CI:1.655-23.28,χ2=8.562,P=0.003)。单独HBV慢性感染者取得SVR者(45.00%)与HCV/HBV共感染者取得SVR者(13.04%)的差异有统计学意义(OR值:5.455,95%CI:1.463-20.332,χ2=7.357,P=0.007)。结论HCV/HBV共感染比单独HCV或单独HBV慢性感染更难治,干扰素α联合利巴韦林治疗HCV/HBV共感染有疗效,但需要进一步优化治疗。     

慢加急性肝衰竭不同预后患者血浆外泌体差异蛋白的生物信息学分析

目的筛选不同预后慢加急性肝衰竭(ACLF)患者血浆外泌体中的差异蛋白,分析其功能及生物学过程,为患者临床诊断提供参考依据。方法前瞻性选取2019年7月—10月于首都医科大学附属北京佑安医院住院确诊的ACLF患者10例,随访90 d,患者死亡或肝移植归入肝移植/死亡组(n=5),患者存活归入生存组(n=5),两组一般资料指标比较采用Mann-Whitney U秩和检验。采用非标记(Label-free)定量蛋白质组学技术对血浆外泌体蛋白进行鉴定和定量分析,筛选差异蛋白并进行功能富集分析,使用R-3.5.1软件对差异蛋白进行层次聚类分析,分析其参与的生物学过程。结果外泌体蛋白质组学分析共鉴定出860种蛋白,以倍数上调>1.2倍或下调>1.2倍且P<0.05的标准筛选出差异表达蛋白116种,与肝移植/死亡组相比,生存组上调蛋白62种、下调蛋白54种。生物信息学分析结果显示,这些蛋白主要参与了免疫反应、信号转导、囊泡介导的转运、细胞死亡和增殖等生物学过程,并与炎症反应、糖类和氨基酸代谢、肝细胞损伤及再生等信号通路密切相关。结论非标记定量蛋白质组学技术筛选出的差异蛋白可能作为ACLF早期诊断及预后判断的血清学标志物。     

酒精性肝病患者脂代谢相关差异蛋白的定量分析

目的应用串联质谱标记(TMT)技术筛选和鉴定酒精性肝病(ALD)患者肝脏组织中的差异蛋白, 对脂代谢相关蛋白和通路进行分析, 探索其功能及生物学过程。方法收集符合纳入标准的肝脏组织, 筛选出酒精性肝硬化患者样本8例, 正常对照组样本3例。采用TMT技术筛选差异蛋白并进行富集信号通路分析和蛋白质网络互作分析, 探索其参与的生物学过程。结果蛋白质组学分析鉴定出2组资料中有2 741种差异蛋白具有统计学意义(P < 0.05), 以P<0.05且|log2(foldchange)| >1的标准筛选出差异表达蛋白106种, 与对照组相比, ALD组上调蛋白12种, 下调蛋白94种。其中, 与脂代谢相关的上调差异蛋白有2种, 下调差异蛋白有14种。生物信息学分析结果显示这些蛋白在脂代谢中主要参与了脂质转运, 脂肪酶活性的调节, 脂肪酸结合以及胆固醇代谢等生物学过程, 并与过氧化物酶体增殖物激活受体信号通路、胆固醇代谢、甘油三酯代谢及脂肪细胞内脂解的调节等脂代谢相关信号通路密切相关。结论 16种脂代谢相关差异蛋白可能是ALD发病机制中的关键蛋白。     

慢性丙型肝炎干扰素治疗后复发患者干扰素联合利巴韦林再治疗

目的 探讨干扰素（IFN）治疗后复发的慢性丙型肝炎（CHC）患者对IFN联合利巴韦林再治疗的应答情况及影响因素。方法 100例IFN治疗后复发的CHC患者中，50例使用聚乙二醇干扰素α-2a（PEG—IFNα-2a），50例使用重组人干扰素α-1b（CIFNα—1b），均联合利巴韦林再治疗，联合治疗48周，停药随访24周，分析HCVRNA载量、病毒基因型、药物种类对联合治疗疗效的影响。结果 100例复发患者联合再治疗后，36．00％取得持续病毒学应答（SVR），其中PEG-IFNα-2a组48．00％取得SVR，显著高于CIFNα—1b组（24．00％，P〈0．05）。56例低病毒载量（HCV-RNA〈1×10^5拷贝／mL）患者中，PEG—IFNα-2a组28例，其中57．14％取得SVR，显著高于CIFNα—1b组（25．00％，P〈0．05）。HCV非基因1（2a或2b）型组29例，其中55．17％取得SVR，显著高于基因1型组（28．20％，P〈0．05）；在CIFNα—1b治疗组，病毒非基因1型17例患者，其中47．06％取得SVR，明显高于基因1型患者（12，12％，P〈0．01）；在基因1型组，PEG—IFNα-2a组38例，其中42．11％取得SVR，显著高于CIFNα—1b组（12．12％，P〈0.01）。结论 IFN治疗后复发的CHC患者IFN联合利巴韦林再治疗存在部分患者无应答；对于HCV病毒载量低、基因1型的复发患者，聚乙二醇干扰素联合利巴韦林再治疗疗效明显优于普通干扰素的联合治疗。     

国产与进口荧光定量PCR试剂检测HBV DNA的结果比较

目的:评价国产和进口HBV DNA定量检测试剂盒的性能和应用。方法:同时用国产和进口HBVDNA定量检测试剂盒对200例临床血清样本进行检测,比较试剂的特异性、灵敏度和符合率,分析检测结果。结果:国产科华试剂的特异性为100%,而灵敏度(68.1%)和符合率(74.5%)均低于CAP/CTM系统;CAP/CTM系统与科华试剂相比,对相同标本检出的HBV DNA水平数值更高。结论:结合临床诊治和检测的效率、以及患者费用等各方面因素,可选择适当的检测试剂。     

感染性疾病诊断新技术实验课的教学实施与探讨

加强学生对感染性疾病诊断新技术的认识,可以为其未来的临床和科研工作奠定好基础。学生通过对实时荧光定量PCR技术检测病毒核酸定量、分子克隆方法检测病毒变异耐药位点的实验操作和理论学习,掌握了病毒核酸定量和病毒变异耐药位点检测的基本方法和基本理论。通过开设这门实验课,学生能够理论联系实际,学生对感染性疾病的诊断技术有了全面的认识,并能将所学知识应用于临床和科研实际工作中,达到了开设该门课程的效果。     

稳定表达HBx的人肝细胞系7702的建立

目的 构建HBx表达载体,筛选可稳定表达HBx的人肝细胞(HL)-7702细胞系。 方法 采用RT-PCR法扩增HBx 基因片段,并将其连接至pIRES载体,经酶切和测序鉴定pIRES-HBx重组质粒序列。然后,分别采用Real-time PCR和Western blot技术检测验证重组质粒的正确性。最后,应用G418抗生素筛选稳定表达HBx的HL-7702细胞系。结果 经PCR扩增得到正确的HBx片段,成功构建pIRES-HBx质粒,将重组质粒转染HEK 293 细胞和HL-7702细胞均实现了HBx过量表达;经免疫荧光法鉴定,我们获得了稳定大量表达HBx的HL-7702细胞系。结论 成功构建的pIRES-HBx表达载体能在HL-7702细胞稳定表达HBx,为后续研究提供了基础实验工具。