载阿霉素细胞膜纳米囊泡对黑色素瘤B16F10细胞的杀伤效应

目的：制备人胚胎肾细胞来源的细胞膜纳米囊泡（NVs）,其内腔载阿霉素（DOX）得到新型纳米药物载NVs细胞膜DOX（NVs-DOX）,探讨NVs-DOX的肿瘤细胞内吞作用及对黑色素瘤细胞的杀伤效应。方法：利用超速离心法提取HEK293细胞膜,脂质体挤出仪对细胞膜进行处理得到细胞膜NVs;应用电转化法将DOX担载于NVs的内腔,得到NVs-DOX,通过动态光散射检测NVs粒径。以不加囊泡细胞为对照组,细胞膜NVs为实验组,采用MTT法检测不同浓度（5、10、20、50和100 mg·L^-1）NVs对NIH3T3细胞的生物相容性。以小分子DOX（10 mg· L^-1）为对照组,不同浓度（0.001、0.005、0.010、0.050、0.100、0.500和1.000μmol·L^-1）NVs-DOX为实验组,采用荧光显微镜成像和流式细胞术检测NVs-DOX在黑色素瘤B16F10细胞中的荧光分布情况;细胞毒性实验,MTT法检测各组细胞存活率;活/死细胞染色法检测NVs-DOX（1 μmol·L^-1）处理后的B16F10细胞死亡情况。结果：利用细胞膜材料制备平均粒径为254.3 nm的NVs,电转化法得到了粒径约为289.6 nm的NVs-DOX。MTT法检测,不同浓度NVs组NIH3T3细胞存活率均>100%;荧光成像检测,药物孵育3 h后,NVs-DOX组细胞核内荧光强度略低于小分子DOX组;流式细胞术检测,NVs-DOX组的内吞效率（91.07%）略低于小分子DOX组（95.47%）;细胞毒性实验,NVs-DOX组与小分子DOX组均显示出对B16F10细胞浓度依赖性的杀伤效应,DOX浓度在0.1 μmol·L^-1时B16F10细胞存活率<20%,NVs-DOX组与小分子DOX B16F10细胞存活率比较差异无统计学意义（P>0.05）;活/死细胞染色,NVs-DOX组与小分子DOX组黑色素瘤B16F10细胞中死细胞占总细胞比率比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论：成功制备了人胚肾细胞来源的细胞膜NVs及载DOX的新型纳米药物NVs-DOX,NVs-DOX具有较高的肿瘤细胞内吞效率及明显的黑色素瘤细胞的杀伤效应。     

LAG3慢病毒质粒构建及其稳定转染细胞系的建立

目的:构建淋巴细胞活化因子3(LAG3)-mCherry红色荧光蛋白的LAG3-mCherry慢病毒表达载体,转染HEK293T细胞获得稳定表达LAG3-mCherry融合蛋白的细胞系,探讨LAG3-mCherry融合蛋白在HEK293T细胞中的定位.方法:将LAG3质粒和带有mCherry的慢病毒载体分别用限制性内切...     

载奥沙利铂细胞膜囊泡纳米药物的制备及其对小鼠结肠癌细胞的杀伤作用

制备内腔担载奥沙利铂（OXA）的细胞膜纳米囊泡（NVs），得到纳米药物NVs@OXA，探讨NVs@OXA对小鼠结肠癌细胞的内吞和杀伤效应。