阿德福韦酯治疗活动性代偿期乙肝肝硬化疗效观察

目的研究阿德福韦酯在治疗活动性代偿期乙肝肝硬化的疗效和安全性。方法选取2010年1月-2013年1月在湖北省咸宁市中心医院进行诊断治疗并且确诊为活动性代偿期乙肝肝硬化患者68例作为研究对象,将其随机分为对照组和治疗组,每组34例。对照组给予保肝降酶支持治疗,治疗组在采取保肝降酶支持治疗的同时给予阿德福韦酯10 mg/d进行口服。结果对照组和治疗组的疗效差异有统计学意义(P0.05),治疗组疗效高于对照组。结论阿德福韦酯治疗活动性代偿期乙肝肝硬化具有一定的积极意义,可以有效改善患者的功能,不良反应少,并且价格低廉,具有极大的临床意义和应用前景。     

肝豆状核变性与慢性乙型肝炎重度患者临床特征分析*

目的 观察肝豆状核变性（WD）伴黄疸患者的临床特征,探讨肝豆状核变性黄疸患者临床鉴别诊断的侧重点。方法 回顾性分析52例以“黄疸待查”初次入院的WD患者的临床资料,包括临床表现和常规实验室指标的变化。采用序列分析法检测全血基因组8、12、13、16外显子的突变情况。结果 本研究纳入WD患者24例和慢性乙型肝炎重度患者28例。WD患者发病中位年龄（33.2岁）显著低于乙型肝炎（41.8岁,P=0.049）,WD患者自起病至明确诊断的中位时间（8.2月）显著长于乙型肝炎（1月,P<0.001）;WD患者24 h尿铜水平（919.83±1017.15 μg）显著高于乙型肝炎（204.79±191.85 μg,P<0.001）;WD患者血清γ-谷氨酰转肽酶水平（175.74±245.99 U/L）显著高于乙型肝炎（133.44±115.95 U/L,P=0.004）,且与24 h尿铜水平呈正相关（r=0.552,P=0.012）;24例WD患者全部,而仅4例乙型肝炎患者可检出ATP7B突变。结论 肝豆状核变性伴黄疸患者除可利用血清铜、铜蓝蛋白检测进行筛选性诊断外,24 h尿铜检测为重要的鉴别诊断指标,而血清γ-谷氨酰转肽酶可能是该病潜在的诊断指标。     

两组不同剂量甲泼尼龙治疗重症手足口病临床效果对比分析

目的研究不同剂量甲泼尼龙治疗重症手足口病临床效果。方法 2009年3月～2012年3月收治的90例患儿随机分为试验组和对照组各45例。两组患儿均采用丙种球蛋白进行治疗,分别采用大剂量的甲泼尼龙和小剂量的甲泼尼龙对患儿进行治疗。结果治疗后,发现试验组患者治疗后患者的发热持续时间、易惊缓解时间、心率恢复时间、机械通气时间及住院时间均明显短于对照组,两组比较有统计学意义（P〈0.05）。结论采用大剂量的甲泼尼龙对患儿进行治疗,可显著提高治疗的临床疗效。     

肝癌HepG2细胞株胰岛素样生长因子1和表皮生长因子受体基因沉默后放疗增敏及机制

目的:探讨同时沉默胰岛素样生长因子1(IGF1)和表皮生长因子(EGF)二受体基因的抗瘤放疗增敏及机制.方法:分别构建靶向EGFR、IGF1R及两受体的小分子干扰RNA(siRNA-EGFR、siRNA-IGF1R、siRNA-EGFR& IGF1R),构建与任何基因无同源的阴性对照质粒(siRNA-HK),分别转染48照射肝癌HepG2细胞株.成克隆实验测定细胞存活分数,采用单击多靶模型和线性二次函数模型拟合细胞存活曲线,求出放射生物学参数Do、Dq、N和α、β、SF2值.流式细胞仪检测细胞周期和凋亡变化,细胞周期及相关蛋白、细胞凋亡及相关蛋白采用蛋白印迹.结果:同时沉默EGFR和IGF1R组与对照组及单基因干扰组相比抑制了细胞增殖、诱导细胞凋亡,阻滞细胞周期G1/S期的进程,bcl-2和cdk2表达明显下调,而p21和bax表达增加.且同时沉默EGFR和IGF1R组和对照组细胞的耽值分别为0.588、2.070 4Gy; Dq值分别为0.562 5、2.030 7Gy;α值分别为0.515、0.021 6Gy-1;SF2值分别为0.22、0.619.同时沉默EGFR和IGF1R组Do、Dq和SF2值均减小,α值增大.结论:同时沉默EGFR和IGF1R基因具有更有效地干扰肝癌HepG2细胞株增殖、诱导细胞凋亡,其机制可能与bcl-2和cdk2表达下调和p21与bax表达增加有关,结合干扰多个受体分子可能是一种十分有前途的新的肝癌治疗途经.     

Bcl-xl和IGF-1受体特异性siRNA真核表达载体的设计、构建及鉴定

目的:构建能表达靶向Bcl-XL mRNA和IGF1RmRNA的siRNA真核表达质粒。方法:从GeneBank中搜索Bcl-XL(NM_138578)和IGF-1R(NM_000875)基因组标准序列,根椐siRNA设计原理各基因选取两段19bp的碱基序列作为靶目标,根据其序列构建siRNA真核表达质粒:psiBcl-XL1和psiBcl-XL2以及psiIGF1R1和psiIGF1R2。随机选取一段与人类基因无同源性的碱基序列,构建表达siRNA的真核表达质粒作为质粒对照psiHK。所构建的质粒均含有增强绿色荧光基因作为报告基因和SalI的酶切位点。质粒经酶切后,电泳鉴定酶切片段;基因测序分析质粒的碱基序列;用脂质体转染鼻咽癌CNE2细胞。转染后培养48h,做流式细胞仪检测转染率并采用共聚焦显微镜检测质粒绿色荧光蛋白的表达,通过RT-PCR检测各组质粒对其基因的干扰率。结果:质粒psiBcl-XL1、psiBcl-XL2、psiIGF1R1、psiIGF1R2和psiHK酶切后均可见400bp小带,与预期插入的目的基因大小一致,基因测序证实碱基序列与模板序列相符;经荧光显微镜下摄片计算转染效率发现:在转染48小时达最高(45%～50%之间);流式细胞仪检测转染后48小时的转染率为48.45%,并在共聚焦显微镜下观察均见大量的细胞表达绿色荧光;psiBcl-XL1、psiIGF-1R1、psiB-clXL2和psiIGF1R2干扰率分别是:22.1%、50%、70.6%、61.8%。结论:本实验构建了靶向Bcl-XLmRNA和IGF1R mRNA、表达短发夹RNA(short hairpin ribonucleic acid,shRNA)的真核表达质粒。重组质粒能有效转染人鼻咽咽癌细胞,psiBcl-XL2和psiIGF-1R2与psiBcl-XL1和psiIGF1R1相比,转染CNE2 48h后其对mRNA的干扰率相对较高。     

EGF和IGF-1受体特异性siRNA真核表达载体的设计、构建及鉴定

目的构建能表达靶向EGF RmRNA和IGF-1 RmRNA的siRNA真核表达质粒。方法从GeneBank中搜索EGFR（NM 000875）和IGF-1 R（NM 201283）基因组标准序列,根椐siRNA设计原理各基因选取两段19bp的碱基序列作为靶目标,并根据其序列构建真核表达质粒。随机选取一段与人类基因无同源性的碱基序列,构建表达siRNA的真核表达质粒作为质粒对照psiPC。转染后分别培养12h、24h、36h、48h、60h、72h,以转染率高的时间点的鼻咽癌细胞做流式细胞仪检测转染率,并采用共聚焦显微镜检测质粒绿色荧光蛋白的表达。结果质粒psiEGFR1、psiEGFR2、psiIGF-1 R1、psiIGF-1 R2和psiPC酶切后均可见400bp小带,与预期插入的目的基因大小一致,基因测序证实碱基序列与模板序列相符;经荧光显微镜下摄片计算转染效率发现：在转染48h达最高（55%～60%之间）;流式细胞仪检测转染后48h的转染率为57.45%,共聚焦显微镜下观察均见大量的细胞表达绿色荧光。结论本实验构建了靶向EGFRmRNA和IGF-1 RmRNA、表达短发夹RNA（shRNA）的真核表达质粒。重组质粒能有效转染人鼻咽癌细胞并在其中表达,能下调鼻咽癌细胞EGFR和IGF-1 R的表达。     

复方甘草酸苷联合还原型谷胱甘肽治疗酒精性肝硬化的疗效观察

目的 评价复方甘草酸苷联合还原型谷胱甘肽在治疗酒精性肝硬化中的临床疗效.方法 选取咸宁市中心医院收治的酒精性肝硬化患者120例作为研究对象,随机分为复方甘草酸苷组、还原型谷胱甘肽组及联合用药组.复方甘草酸苷组患者每天给予120 mg复方甘草酸苷进行治疗;还原型谷胱甘肽组患者每天给予1.8g还原型谷胱甘肽进行治疗;联合用药组患者每天给予120 mg复方甘草酸苷＋1.8 g还原型谷胱甘肽进行治疗;治疗周期均为20 d.结果 与单独用药组相比,联合用药组能显著改善患者各临床症状（P＜0.05）,患者经联合用药治疗后,GGT、AST、ALT、TBIL水平降低幅度显著高于单独用药组（P＜0.05）;复方甘草酸苷组总有效率为62.5％,还原型谷胱甘肽组总有效率为65.0％,联合用药组总有效率为92.5％,联合用药组治疗效果显著优于单独用药组（P＜0.05）.结论 复方甘草酸苷联合还原型谷胱甘肽对酒精性肝硬化的治疗效果显著优于单独用药,值得临床推广应用.     

尼美舒利与阿霉素联合应用对骨肉瘤MG-63细胞增殖、凋亡及衰老的影响

目的:研究尼美舒利与阿霉素联合应用对骨肉瘤MG-63细胞的作用及机理。方法:MTT法检测细胞的增殖,衰老相关性β-半乳糖苷酶(SAβ-Gal)染色检测细胞衰老,流式细胞仪测定细胞周期和凋亡,透射电镜显示MG-63细胞的形态变化。结果:当阿霉素浓度固定在0.75 mg/L时,与低浓度尼美舒利(25-200 μmol/L)...