可生物降解多肽基因载体的构建与体外评价

目的 制备一种应用于基因递送系统的硫辛酸修饰的聚精氨酸多肽纳米复合物,并考察其对人胚肾细胞系HEK293细胞的转染效率及细胞毒性.方法 以不同量的半胱氨酸作为交联剂,合成4种不同交联度的还原性硫辛酸修饰的交联聚精氨酸组氨酸(LHRss),利用1H NMR和凝胶色谱鉴定合成的LHRss.取质粒DNA (pDNA)和LHRss以不同氮磷比(N/P)自组装形成纳米复合物,用粒度测定仪测定复合物的粒径和zeta电位,凝胶阻滞电泳测定载体LHRss对pDNA的包裹能力.用LHRss/pDNA纳米复合物与HEK293细胞共同培养,考察不同交联度复合物的细胞摄取情况及相关基因转染情况,并测定不同纳米复合物对HEK293细胞的细胞毒性.结果 通过结构鉴定确定LHRss多肽合成成功.组装形成的纳米复合物粒径分布均匀,N/P≥40时LHRss3/pDNA及LHRss4/pDNA复合物的zeta电位均大于30 mV.凝胶阻滞电泳结果显示N/P值为5时,LHRss3可完全包裹pDNA.当N/P值为40时,HEK293细胞对LHRss3/pDNA的摄取及转染效率高于其他3种复合物及单体硫辛酸修饰的聚精氨酸组氨酸(LHR);其中LHRss3/pGL3复合物的平均荧光强度约为LHR/pGL3复合物的3.98倍,差异具有统计学意义(P＜0.05).细胞毒性实验显示LHR/pGL3及不同交联度LHRss/pGL3转染HEK293细胞24 h后,细胞存活率均在80％以上,其毒性作用均低于bPEI-25K(20 μg/mL bPEI-25K转染细胞24 h后细胞存活率为25％左右,P＜0.05).结论 制备的硫辛酸修饰的聚精氨酸多肽纳米复合物有望成为一种高效的基因载体.     

清热祛湿通络汤联合前列地尔注射液治疗糖尿病周围血管病变34例

目的:观察清热祛湿通络汤联合前列地尔注射液治疗糖尿病周围血管病变的临床疗效。方法:将68例糖尿病周围血管病变患者按照随机数字表法分为对照组和观察组,每组各34例。对照组给予常规基础治疗,观察组给予清热祛湿通络汤联合前列地尔注射液治疗。检测两组患者治疗前后空腹血糖、餐后2 h血糖变化情况;比较两组患者的临床疗效及治疗前后外周动脉血流速度变化情况。结果:观察组有效率为96.12%,对照组有效率为79.41%,两组患者有效率比较,差异具有统计学意义(P0.05)。两组患者治疗后空腹血糖及餐后2 h血糖均低于治疗前,且观察组低于对照组,差异具有统计学意义(P0.05)。两组患者治疗后外周动脉血流速度大于治疗前,且观察组大于对照组,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:清热祛湿通络汤联合前列地尔注射液治疗糖尿病周围血管病变,可改善患者血糖水平及外周动脉血流速度。